【摘要】：目的： 1.觀察激酶調(diào)控下的縫隙連接功能（gap junction, GJ）在缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用。 2.初步探討IP3、Caspase-9、Caspase-3、Bax/Bcl-2在GJ介導的擴大損傷中的作用。 方法:采用線栓法建立大鼠大腦中動脈栓塞模型；Longa’s法評價大鼠神經(jīng)功能損傷；TTC染色法檢測大鼠腦梗死體積變化；HE染色法檢測大鼠腦組織形態(tài)學變化；WesternBlotting法檢測腦組織中縫隙連接蛋白Cx43、Cx32，縫隙連接功能調(diào)控激酶PKC、ERK1/2、p-PKC和凋亡相關蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3的表達；RT-PCR法檢測腦組織中Cx43mRNA的變化；Elisa法檢測腦組織中磷酸肌醇（inositoltrisphosphate, IP3）的變化。 結果: 1.神經(jīng)功能評分結果顯示，假手術（Sham）組無神經(jīng)功能損傷；與Sham相比，缺血再灌注(ischmia/reperfusion, I/R)組神經(jīng)功能評分顯著增高；與I/R組相比，缺血后處理（ishemic postconditioning, IPO）組神經(jīng)功能損傷顯著降低；與IPO組相比，甘珀酸(Carbenoxolone, CBX)干預缺血后處理（IPO+CBX）組神經(jīng)功能損傷進一步降低。結果表明，缺血后處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)功能具有保護作用，抑制縫隙連接后可增強缺血后處理的神經(jīng)功能保護作用。 2. TTC染色結果顯示，Sham組未見梗死灶；與Sham組相比，I/R組腦梗死體積增大；與I/R組相比，IPO組腦梗死體積顯著減��；與IPO組相比，IPO+CBX組腦梗死體積進一步減小。結果表明，IPO可縮小大鼠腦缺血再灌注損傷的腦梗死體積，抑制縫隙連接后可使腦梗死體積進一步減少。 3. HE染色結果顯示，Sham組組織切片結構清晰完整、細胞排列整齊，胞核居中，核膜核仁清楚；與Sham組相比，I/R組腦組織細胞排列紊亂、胞核固縮等組織形態(tài)學改變顯著；與I/R組相比，IPO組細胞排列紊亂及胞核固縮等病理學改變顯著改善；與IPO組相比，IPO+CBX組腦組織病理學改變進一步改善。以上結果表明，缺血后處理對缺血再灌注損傷具有保護作用，抑制縫隙連接可增加缺血后處理對缺血再灌注損傷的保護作用。 4. Western blotting檢測縫隙連接蛋白結果顯示，與Sham組相比，I/R組Cx43蛋白表達顯著增加；與I/R組相比，IPO組Cx43蛋白表達顯著降低；與IPO組相比，IPO+CBX組Cx43蛋白表達進一步降低。同時，縫隙連接蛋白Cx32在各處理組中表達無顯著性差異（P0.05）；縫隙連接蛋白Cx26在各處理組中表達較少。結果提示， IPO對I/R損傷的保護作用可能與Cx43蛋白表達的抑制有關。 5. RT-PCR法檢測Cx43mRNA結果顯示，各處理組中的Cx43mRNA的表達無顯著性差異（P0.05）。結果提示，IPO抑制縫隙連接蛋白Cx43的表達可能通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控而實現(xiàn)的。 6. Western bloting檢測縫隙連接功能的激酶調(diào)控蛋白表達結果顯示，與Sham組相比，I/R組PKC蛋白表達顯著降低；與I/R組相比，IPO組PKC蛋白表達顯著增加；與IPO組相比，IPO+CBX組PKC蛋白表達進一步增加。而p-PKC蛋白的檢測結果顯示，，與Sham組相比，I/R組和I/R+CBX組p-PKC表達顯著增加；與I/R組相比，IPO組較I/R組p-PKC蛋白表達顯著降低；而IPO+CBX組較IPO組p-PKC蛋白表達無顯著性差異(P0.05)。且Sham、IPO、IPO+CBX組p-PKC蛋白表達均較少。同時，縫隙連接功能調(diào)控蛋白ERK1/2在各處理組中的表達無顯著性差異（P0.05）。結果提示，PKC蛋白可能參與了IPO對I/R損傷保護作用中GJ功能的調(diào)控。 7. Western blotting檢測凋亡相關蛋白的表達結果顯示，與Sham組相比，I/R組Bax/Bcl-2表達顯著增加；與I/R組相比，IPO組Bax/Bcl-2表達顯著降低；與IPO組相比，IPO+CBX組Bax/Bcl-2表達進一步降低。同時，Caspase-9、Caspase-3表達與Bax/Bcl-2有類似的變化。結果提示，IPO抑制GJ功能而降低I/R損傷可能與Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3與關。 8. Elisa檢測IP3結果顯示，與Sham組相比，I/R組IP3表達顯著增加；與I/R相比，IPO組IP3表達顯著降低；與IPO相比，IPO+CBX組IP3表達進一步降低。結果提示，IPO抑制GJ功能而降低I/R損傷可能與IP3有關。 結論： 1. IPO可通PKC抑制Cx43縫隙連接功能而減輕I/R損傷。 2. IPO抑制GJ功能而降低I/R損傷可能與Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、IP3降低有關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R741

【參考文獻】

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本文編號：2324402