【摘要】：目的： 1.觀察激酶調(diào)控下的縫隙連接功能（gap junction, GJ）在缺血后處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用。 2.初步探討IP3、Caspase-9、Caspase-3、Bax/Bcl-2在GJ介導(dǎo)的擴(kuò)大損傷中的作用。 方法:采用線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型；Longa’s法評(píng)價(jià)大鼠神經(jīng)功能損傷；TTC染色法檢測(cè)大鼠腦梗死體積變化；HE染色法檢測(cè)大鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化；WesternBlotting法檢測(cè)腦組織中縫隙連接蛋白Cx43、Cx32，縫隙連接功能調(diào)控激酶PKC、ERK1/2、p-PKC和凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3的表達(dá)；RT-PCR法檢測(cè)腦組織中Cx43mRNA的變化；Elisa法檢測(cè)腦組織中磷酸肌醇（inositoltrisphosphate, IP3）的變化。 結(jié)果: 1.神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果顯示，假手術(shù)（Sham）組無(wú)神經(jīng)功能損傷；與Sham相比，缺血再灌注(ischmia/reperfusion, I/R)組神經(jīng)功能評(píng)分顯著增高；與I/R組相比，缺血后處理（ishemic postconditioning, IPO）組神經(jīng)功能損傷顯著降低；與IPO組相比，甘珀酸(Carbenoxolone, CBX)干預(yù)缺血后處理（IPO+CBX）組神經(jīng)功能損傷進(jìn)一步降低。結(jié)果表明，缺血后處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)功能具有保護(hù)作用，抑制縫隙連接后可增強(qiáng)缺血后處理的神經(jīng)功能保護(hù)作用。 2. TTC染色結(jié)果顯示，Sham組未見梗死灶；與Sham組相比，I/R組腦梗死體積增大；與I/R組相比，IPO組腦梗死體積顯著減小；與IPO組相比，IPO+CBX組腦梗死體積進(jìn)一步減小。結(jié)果表明，IPO可縮小大鼠腦缺血再灌注損傷的腦梗死體積，抑制縫隙連接后可使腦梗死體積進(jìn)一步減少。 3. HE染色結(jié)果顯示，Sham組組織切片結(jié)構(gòu)清晰完整、細(xì)胞排列整齊，胞核居中，核膜核仁清楚；與Sham組相比，I/R組腦組織細(xì)胞排列紊亂、胞核固縮等組織形態(tài)學(xué)改變顯著；與I/R組相比，IPO組細(xì)胞排列紊亂及胞核固縮等病理學(xué)改變顯著改善；與IPO組相比，IPO+CBX組腦組織病理學(xué)改變進(jìn)一步改善。以上結(jié)果表明，缺血后處理對(duì)缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，抑制縫隙連接可增加缺血后處理對(duì)缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。 4. Western blotting檢測(cè)縫隙連接蛋白結(jié)果顯示，與Sham組相比，I/R組Cx43蛋白表達(dá)顯著增加；與I/R組相比，IPO組Cx43蛋白表達(dá)顯著降低；與IPO組相比，IPO+CBX組Cx43蛋白表達(dá)進(jìn)一步降低。同時(shí)，縫隙連接蛋白Cx32在各處理組中表達(dá)無(wú)顯著性差異（P0.05）；縫隙連接蛋白Cx26在各處理組中表達(dá)較少。結(jié)果提示， IPO對(duì)I/R損傷的保護(hù)作用可能與Cx43蛋白表達(dá)的抑制有關(guān)。 5. RT-PCR法檢測(cè)Cx43mRNA結(jié)果顯示，各處理組中的Cx43mRNA的表達(dá)無(wú)顯著性差異（P0.05）。結(jié)果提示，IPO抑制縫隙連接蛋白Cx43的表達(dá)可能通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控而實(shí)現(xiàn)的。 6. Western bloting檢測(cè)縫隙連接功能的激酶調(diào)控蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，與Sham組相比，I/R組PKC蛋白表達(dá)顯著降低；與I/R組相比，IPO組PKC蛋白表達(dá)顯著增加；與IPO組相比，IPO+CBX組PKC蛋白表達(dá)進(jìn)一步增加。而p-PKC蛋白的檢測(cè)結(jié)果顯示，，與Sham組相比，I/R組和I/R+CBX組p-PKC表達(dá)顯著增加；與I/R組相比，IPO組較I/R組p-PKC蛋白表達(dá)顯著降低；而IPO+CBX組較IPO組p-PKC蛋白表達(dá)無(wú)顯著性差異(P0.05)。且Sham、IPO、IPO+CBX組p-PKC蛋白表達(dá)均較少。同時(shí)，縫隙連接功能調(diào)控蛋白ERK1/2在各處理組中的表達(dá)無(wú)顯著性差異（P0.05）。結(jié)果提示，PKC蛋白可能參與了IPO對(duì)I/R損傷保護(hù)作用中GJ功能的調(diào)控。 7. Western blotting檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示，與Sham組相比，I/R組Bax/Bcl-2表達(dá)顯著增加；與I/R組相比，IPO組Bax/Bcl-2表達(dá)顯著降低；與IPO組相比，IPO+CBX組Bax/Bcl-2表達(dá)進(jìn)一步降低。同時(shí)，Caspase-9、Caspase-3表達(dá)與Bax/Bcl-2有類似的變化。結(jié)果提示，IPO抑制GJ功能而降低I/R損傷可能與Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3與關(guān)。 8. Elisa檢測(cè)IP3結(jié)果顯示，與Sham組相比，I/R組IP3表達(dá)顯著增加；與I/R相比，IPO組IP3表達(dá)顯著降低；與IPO相比，IPO+CBX組IP3表達(dá)進(jìn)一步降低。結(jié)果提示，IPO抑制GJ功能而降低I/R損傷可能與IP3有關(guān)。 結(jié)論： 1. IPO可通PKC抑制Cx43縫隙連接功能而減輕I/R損傷。 2. IPO抑制GJ功能而降低I/R損傷可能與Bax/Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、IP3降低有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2324402