【摘要】：目的:研究Wilson病脾臟病理形態(tài)學,細胞免疫指標的表達以及微量元素含量的相關狀況,了解WD脾切除患者脾臟免疫指標與中醫(yī)辨證之間的相關性,了解WD合并脾功能亢進患者在行脾臟精準切除術后脾臟相關指標免疫指標及脾組織內(nèi)銅與免疫指標的相關機制。方法:1.標本收集對象為“安徽中醫(yī)藥大學神經(jīng)病學研究所附屬醫(yī)院”于2015年04月~2016年12月期間確診的WD合并脾功能亢進患者20人,患者都需符合全脾精準切除術的手術指征,簽訂知情同意書后收集該組脾臟標本20例。收集患者一般資料,對WD患者行西醫(yī)的臨床分型、Goldstein分級,運用中醫(yī)四診合參,對WD患者行中醫(yī)辨證分型。對照組肝炎后肝硬化合并脾功能亢進患者,滿足行脾臟精準切除術,簽訂知情同意書后術后留取脾臟標本16例。外傷后脾破裂組為外傷導致脾破裂后行脾切除術的患者,該組患者術前體檢指標均正常,簽訂知情同意書后收集脾臟標本20例。2.將脾組織制作成冰凍切片行HE染色并與對照組比較,觀察Wilson病患者脾組織病理形態(tài)學的變化。3.使用“Western Blot技術”測定各組脾組織內(nèi)“粒細胞集落刺激因子”(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)、“轉(zhuǎn)化生長因子-β1”(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的相對表達水平。4.使用“酶聯(lián)免疫吸附”(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定各組脾組織中“白細胞介素-8”(interleukin-8,IL-8)、“白細胞介素-18”(interleukin-18,IL-18)、“腫瘤壞死因子-α”(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表達水平。5.采用“原子發(fā)射廣譜法”測定檢測各組內(nèi)脾組織銅、鋅、鐵微量元素的含量情況。6.分析各組之間免疫指標的差異。結果:1.各組脾組織的形態(tài)學特點WD合并脾功能亢進患者脾臟形態(tài)觀察(冰凍切片制作后HE染色)脾臟被膜結構明顯,紅髓、白髓邊界尚清晰,數(shù)量上白髓與外傷后脾破裂組比較不存在明顯的改變,白髓可見淋巴細胞聚集;紅髓中脾索數(shù)量較外傷后脾破裂組略有減少;脾小梁結構多不規(guī)則,不完整。(200倍鏡下視野)。巨噬細胞數(shù)量較正常組織略有增多,偶見個別細胞形態(tài)異常(400倍鏡下視野)。肝炎后肝硬化合并脾亢患者脾臟形態(tài)觀察(冰凍切片制作后HE染色)脾臟被膜結構明顯,紅髓、白髓界限不甚分明,紅髓內(nèi)脾索結構明顯減少,視野內(nèi)滿布炎癥細胞浸潤,脾小梁結構不完整,形態(tài)不規(guī)則(200倍鏡下視野)。視野內(nèi)炎細胞浸潤嚴重(400倍鏡下視野)。外傷后脾破裂組患者脾臟形態(tài)觀察(冰凍切片制作后HE染色)脾臟被膜被膜結構明顯,紅髓、白髓界限分明,白髓中可以看見大量的淋巴細胞;紅髓所在區(qū)域有分布的脾索及大小不等的脾竇(脾血竇),被膜附近可以觀察到脾小梁完整呈條索狀,小梁靜脈偶見(200倍鏡下視野)。白髓中聚集著的大量淋巴細胞形態(tài)正常(400倍鏡下視野)。2.Western-Blot法檢測各組脾組織內(nèi)G-CSF、TGF-β1的蛋白定量表達三組間G-CSF/GAPDH在脾組織內(nèi)的相對表達量不具統(tǒng)計學意義(p值=0.076,p0.05)。三組間TGF-β1/GAPDH在脾組織內(nèi)的相對表達量具有顯著統(tǒng)計學意義(p值=0.005,p0.01):外傷后脾破裂組脾組織TGF-β1相對表達量顯著低于WD合并脾亢組和肝炎后肝硬化合并脾亢組,差異具有統(tǒng)計學意義,而WD合并脾亢組與肝炎后肝硬化合并脾亢組脾組織內(nèi)TGF-β1相對表達不存在統(tǒng)計學差異(p值=0.310,p0.05)。3.ELISA法檢測各組脾組織內(nèi)IL-8、IL-18、TNF-α的表達量三組間IL-8在脾組織內(nèi)的表達具有顯著統(tǒng)計學意義(p值=0.008,p0.01):外傷后脾破裂組脾組織IL-8相對表達量顯著低于WD合并脾亢組、肝炎后肝硬化合并脾亢組,差異有統(tǒng)計學意義,而WD合并脾亢組與肝炎后肝硬化合并脾亢組脾組織內(nèi)IL-8的表達不存在統(tǒng)計學差異(p值=0.472,p0.05)。三組間IL-18在脾組織內(nèi)的相對表達量具有統(tǒng)計學意義(p值=0.041,p0.05):WD合并脾亢組脾組織IL-18的相對表達量低于外傷后脾破裂組,差異有統(tǒng)計學意義(p值=0.045,p0.05),而WD合并脾亢組與肝炎后肝硬化合并脾亢組、肝炎后肝硬化合并脾亢組與外傷后脾破裂組脾組織IL-8的相對表達量無差異性,不有統(tǒng)計學意義(p值分別為0.309、0.718,p0.05)。三組間TNF-α在脾組織內(nèi)的相對表達量不具統(tǒng)計學意義(p值=0.667,p0.05)。4.各組脾組織內(nèi)微量元素的檢測三組間脾組織內(nèi)Cu的含量具有顯著的統(tǒng)計學意義(p值=0,p0.01):WD合并脾亢組脾組織Cu含量高于肝炎后肝硬化合并脾亢組、外傷后脾破裂組,差異有明顯的統(tǒng)計學意義;而肝炎后肝硬化合并脾亢組與外傷后脾破裂組脾組織內(nèi)Cu含量無統(tǒng)計學差異(p值=0.733,p0.05)。三組間脾組織內(nèi)Zn的含量不具有統(tǒng)計學意義(p值=0.886,p0.05)。三組間脾組織內(nèi)Fe的含量有差異,具有顯著統(tǒng)計學意義(p值=0.005,p0.01):WD合并脾亢組脾組織Fe的含量高于外傷后脾破裂組(p值=0.0492,p0.05),差異有統(tǒng)計學意義;肝炎后肝硬化合并脾亢組脾組織Fe的含量高于外傷后脾破裂組(p值=0.0102,p0.05),差異有統(tǒng)計學意義;WD合并脾亢組與肝炎后肝硬化合并脾亢組脾組織Fe的含量無差異性,不有統(tǒng)計學意義(p值=0.7744,p0.05)。5.WD合并脾亢組各指標的中醫(yī)證型比較WD合并脾亢組各中醫(yī)證型脾組織內(nèi)檢測指標無統(tǒng)計學差異(p值分別為0.069、0.340、0.469、0.627、0.052、0.155、0.303,p0.05)。結論:1.WD合并脾功能亢進患者脾臟形態(tài)觀察,紅髓中可以觀察到脾索數(shù)量較外傷后脾破裂組減少;巨噬細胞數(shù)量較正常組織略有增多,偶見個別細胞形態(tài)異常;脾小梁結構多不規(guī)則。2.WD合并脾功能亢進組脾組織內(nèi)TGF-β1、IL-8相對表達量高于外傷后脾破裂組,IL-18相對表達量低于外傷后脾破裂組,提示患者存在免疫紊亂狀態(tài)。3.WD合并脾功能亢進組脾組織內(nèi)Cu明顯高于外傷后脾破裂組及肝炎后肝硬化合并脾亢組,提示脾臟也是WD銅沉積的靶器官之一。WD合并脾亢組與肝炎后肝硬化合并脾亢組脾組織內(nèi)鐵含量都超過外傷后脾破裂組,提示W(wǎng)D患者存在鐵代謝異常。4.WD合并脾功能亢進組各中醫(yī)證型脾組織內(nèi)檢測指標無統(tǒng)計學差異。
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【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R742.4

【參考文獻】

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