【摘要】：目的:世界衛(wèi)生組織癌癥研究中心2002年的統(tǒng)計(jì),我國胃癌發(fā)病率全球居第二位。胃癌(Gastric carcinoma)患者多數(shù)就診時(shí)已是晚期,失去手術(shù)機(jī)會(huì),且胃癌異質(zhì)性強(qiáng),所以胃癌預(yù)后差,已成為全球第2大腫瘤死因。目前晚期胃癌缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的治療,化療成為主要治療方法,然而化療的療效已經(jīng)達(dá)到瓶頸,聯(lián)合分子靶向藥物可以提高客觀緩解率,然而化療聯(lián)合分子靶向藥物的用藥時(shí)序尚無明確定論。尤其是抗血管生成藥物在臨床應(yīng)用以較成熟。貝伐珠單抗(Bevacizumab)是一種重組的人源化單克隆抗體,主要是通過選擇性與人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)結(jié)合,抑制VEGF下游通路,從而通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生和新生血管形成來延緩腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。與化療藥物聯(lián)用時(shí),可以通過改變腫瘤血管的微環(huán)境、血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管生成,增加腫瘤內(nèi)藥物濃度,達(dá)到增敏的效果。本課題旨在研究貝伐珠單抗(Bevacizumab)聯(lián)合FP方案(氟尿嘧啶(5-Fluorouracil)加順鉑(Cisplatin))化療方案不同給藥時(shí)序?qū)晒饷富驑?biāo)記的胃腺癌(MGC-803)細(xì)胞y|鼠模型腫瘤生長(zhǎng)的影響,為臨床上貝伐單抗聯(lián)合FP方案(氟尿嘧啶5-Fluorouracil加順鉑Cisplatin))給藥時(shí)序提供理論依據(jù)。方法:1細(xì)胞培養(yǎng)及裸鼠模型的建立對(duì)熒光酶基因標(biāo)記的胃腺癌(MGC-803)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng),收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的熒光酶基因標(biāo)記的胃腺癌(MGC-803)細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5×107個(gè)/m L,每只BALB/c裸鼠左側(cè)肋腹部皮下接種0.2 m L,制作裸鼠胃腺癌模型。2隨機(jī)分組25只裸鼠隨機(jī)分為5組,每組5只。A組為空白對(duì)照組(生理鹽水)、B組為貝伐珠單抗(Bevacizumab)組(Bev:4mg/kg/d,d1、4每3天腹腔注藥21天)、C組為貝伐珠單抗給藥前24h給予FP方案(5-FU:20mg/Kg DDP:1 mg/kg d1、4每3天腹腔給藥,Bev:4mg/Kg d2、5每3天腹腔給藥;21天)、D組為貝伐珠單抗給藥同時(shí)給予FP方案(Bev:4mg/Kg、5-FU:20mg/Kg、DDP:1 mg/kg d1、4,每3天腹腔給藥,21天)、E組為貝伐珠單抗給藥后24h應(yīng)用FP方案(Bev:4mg/Kg d1、4每3天腹腔給藥;5-FU:20mg/Kg DDP:1 mg/kg d2、5每三天腹腔給藥,21天)。3抑瘤結(jié)果評(píng)定為動(dòng)態(tài)觀察移植腫瘤的生長(zhǎng)情況,利用熒光活體成像系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行活體光學(xué)成像,記錄腫瘤體積及熒光值(測(cè)量基線值后每隔7天間斷測(cè)量)。游標(biāo)卡尺進(jìn)行測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑(測(cè)量基線值后每隔2天間斷測(cè)量),用藥結(jié)束后,采用吸入水合氯醛處死小鼠,根據(jù)LI%=(對(duì)照組腫瘤質(zhì)量-治療組腫瘤質(zhì)量)/(空白組腫瘤質(zhì)量)*100%計(jì)算抑瘤率。4病理組織技術(shù)首先通過HE染色確定為胃腺癌組織,通過免疫組化的方法確定VEGF-A、MVD及Bax在腫瘤組織的表達(dá)情況。5統(tǒng)計(jì)方法腫瘤體積、熒光值、抑瘤率、VEGF-A、MVD和Bax符合正態(tài)性分布,MVD、Bax、VEGF-A懫用單因素方差分析(One-way ANOVA),LSD進(jìn)行兩兩比較。裸鼠體積及熒光值,采取重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料的方差分析、多個(gè)樣本均數(shù)比較的方差分析,以P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:1成瘤率接種7天后,25只裸鼠左側(cè)肋腹部均可觸及0.8cm左右的腫瘤。成瘤率:100%。2腫瘤體積及熒光值的變化2.1腫瘤體積(cm3)基線值及治療后變化(Fig.1):藥物處理前移植瘤體積,A組:(0.122±0.021)cm3、B組:(0.119±0.020)cm3、C組:(0.114±0.027)cm3、D組:(0.115±0.011)cm3、E組:(0.116±0.024)cm3,各組間未見顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.975)。在3-21天測(cè)量過程中,對(duì)d8、d15、d22所得數(shù)據(jù)進(jìn)行連續(xù)測(cè)量分析:對(duì)照組較治療組均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值0.01);聯(lián)合用藥組較單藥組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01);E移植瘤體積與C、D組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001)。C、D組未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(Fig.4)2.2腫瘤熒光值基線值及治療后變化腫瘤熒光值基線值A(chǔ)組:(57784±2145)p/sec、B組:(60354±2422)p/sec、C組:(58335±1956)p/sec、D組:(59425±2145)p/sec、E組:(58778±2011)p/sec,各組間未見顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.843)。在7-22天治療過程中,對(duì)d8、d15、d22所得數(shù)據(jù)進(jìn)行連續(xù)測(cè)量分析:對(duì)照組較治療組均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值0.01);聯(lián)合用藥組較單藥組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001);E熒光值與C、D組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001);C、D組未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)(Fig.3)。病理學(xué)驗(yàn)證:治療過程中第1-14天,各組腫瘤體積和熒光值均逐漸增大,第15-21天,聯(lián)合用藥組腫瘤體積變化不明顯,熒光值下降。獲得瘤組織后,經(jīng)HE染色證實(shí)存在大片壞死瘤組織(Fig.2)。3瘤體重量及抑瘤率結(jié)果A:(1.840±0.041)g、B:(1.503±0.042)g、C:(1.207±0.051)g、D:(1.159±0.112)g、E:(0.986±0.123)g,相較于對(duì)照組,B、C、D、E組的抑瘤率分別為18.31%,34.4%、37.01%及46%(Fig.8)。單因素方差分析示存在組間差異(P0.001)。兩兩比較:單藥組抑瘤率均低于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組抑瘤率顯著高于C、D組。C、D組未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.342)(Table1)。4免疫組化結(jié)果分析4.1 VEGF-A(Fig.5)表達(dá)率(%)A:91.15±3.30;B:60.19±4.30C:48.15±3.20,D:46.15±3.60;E:33.15±3.81;單因素方差分析示存在組間差異(P0.05),兩兩比較:對(duì)照組VEGF-A表達(dá)率顯著高于治療組(P0.01);單藥組VEGF-A表達(dá)率顯著高于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組顯著低于C、D組(P0.01)。C、D組未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.732)。4.2 MVD(Fig.7)分別為A:13.8±1.32;B:7.9±1.23;C:6.4±1.28;D:6.5±1.24;E:4.0±1.20。單因素方差分析示存在組間差異(P0.05),兩兩比較:對(duì)照組MVD顯著高于治療組(P0.01);單藥組顯著高于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組MVD顯著低于C、D(P0.01)。C、D組未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.843)。4.3 Bax(Fig.6)的表達(dá)率LI為:A:45.51±4.67%;B:60.26±4.48%;C:72.35±5.3%4;D:75.24±2.95%;E:90.26±2.53%。單因素方差分析示存在組間差異(P0.05),兩兩比較:對(duì)照組顯著低于治療組(P0.01);單藥組Bax的表達(dá)率顯著低于聯(lián)合治療組(P0.01);聯(lián)合用藥組中:E組顯著高于C、D組(P0.01)。C、D組未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.754)。結(jié)論:1應(yīng)用貝伐單抗24h后給予FP方案對(duì)抑瘤作用優(yōu)于同時(shí)給藥組及貝伐單抗24h前給予FP方案治療組。2貝伐單抗24h后給予FP方案抑瘤作用較其他聯(lián)合方式抑瘤率高,可能是進(jìn)一步降低了VEGFA,減少了新生血管生成,并增加了BAX表達(dá)。3在抗血管生成藥物應(yīng)用中,腫瘤體積可能并不能真實(shí)表現(xiàn)腫瘤對(duì)藥物的反應(yīng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742

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本文編號(hào)：2314791