【摘要】：背景 Wilson病（Wilson Disease, WD），又稱肝豆?fàn)詈俗冃圆。℉epatolenticulardegeneration, HLD），是一種常染色體隱性遺傳性銅代謝障礙性疾病，ATP7B基因是其致病基因。WD患者由于ATP7B基因突變導(dǎo)致銅的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，使得過量的銅離子在肝臟、腦、角膜等組織臟器沉積，臨床出現(xiàn)肝硬化、神經(jīng)或（及）精神癥狀、角膜K-F環(huán)等癥狀體征。 研究資料表明，WD基因具有高度的遺傳異質(zhì)性，其突變位點(diǎn)眾多，目前已在各外顯子發(fā)現(xiàn)超過600種形式的基因突變或多態(tài)，且多為復(fù)合雜合突變，常見突變形式少見，多為罕見突變，在不同種族、不同人群和不同地域中的突變特征存在明顯差異。因此，獲得不同種族、不同人群和不同地域WD基因突變譜研究結(jié)果，是開展臨床實(shí)用化WD基因診斷的前提條件。 雖然目前國內(nèi)有多個(gè)關(guān)于中國人WD基因突變的研究報(bào)道，但這些研究的入組病例數(shù)偏少，鮮有超過100例以上的較大樣本的研究報(bào)道，更缺乏大樣本的中國人WD基因突變譜的系統(tǒng)性研究資料。近年來，隨著MassArray等高通量且費(fèi)用相對(duì)低廉的基因檢測(cè)技術(shù)的涌現(xiàn)，使得進(jìn)行大樣本W(wǎng)D基因突變譜的系統(tǒng)研究成為可能。 本研究基于WD基因突變的研究現(xiàn)狀，在衛(wèi)生部國家臨床重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目的資助下，應(yīng)用高通量的PCR-MassArray檢測(cè)平臺(tái)開展了大樣本中國人WD患者的基因突變譜研究，在此基礎(chǔ)上收集被檢測(cè)的WD患者的基因型和臨床表型研究資料，研究不同地域、不同種族的中國人WD基因的突變特征，并嘗試探討WD患者常見的基因型與臨床表型及中醫(yī)證型的關(guān)系。 目的 1.采用PCR-MassArray技術(shù)檢測(cè)大樣本的中國人WD患者ATP7B基因的突變，明確中國人的WD基因突變譜。 2.進(jìn)行基于大樣本W(wǎng)D基因突變譜的中國人ATP7B基因不同地域的突變特征研究。 3.探討WD患者常見的基因型與臨床表型及中醫(yī)證型的關(guān)系。 方法 以2008年~2013年在我院住院治療的WD患者為研究對(duì)象，收集其姓名、性別、年齡、病程、首發(fā)癥狀等臨床資料及其中醫(yī)證型資料，收集并提取基因組DNA，應(yīng)用PCR-MassArray分析方法對(duì)上述患者進(jìn)行ATP7B基因突變位點(diǎn)檢測(cè)，明確中國人WD患者的基因突變譜，分析中國人ATP7B基因的突變規(guī)律和特征，嘗試探討WD患者基因型和臨床表型及中醫(yī)證型間的關(guān)系。 結(jié)果 1. WD患者的一般臨床資料 （1）本研究共收集了2008～2013年在安徽中醫(yī)藥大學(xué)神經(jīng)病學(xué)研究所附屬醫(yī)院住院治療的確診病例共1216例，共有800個(gè)不同的家系，部分病例來自同一家系，男性756例，女性460例，發(fā)病年齡1~57歲，平均14.30士7.26歲，病程0.1~36年，平均6.99士5.86年，漢族1208例，回族2例，滿族4例，蒙古族1例，維吾爾族1例，來自安徽（290例），江蘇（111例），浙江（107例），河南（105例），山東（101例），江西（80例）等省份。 （2）以黃疸、腹水等肝癥狀為首發(fā)癥狀的患者有409例，以錐體外系癥狀、精神癥狀等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀為首發(fā)癥狀的患者有609例，以血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)等癥狀為首發(fā)癥狀的患者有198例。 （3）以錐體外系癥狀起病，或病程中以錐體外系癥狀為主要臨床表現(xiàn)者，且肝癥狀不明顯或較輕的腦型患者588例；以食欲不振、黃疸、腹水或脾功能亢進(jìn)等肝臟損害癥狀為主要表現(xiàn)的肝型患者447例；肝臟癥狀與神經(jīng)癥狀同為本病的主要特征，，可同時(shí)合并其他內(nèi)臟損害的腦-內(nèi)臟型患者150例；還有31例患者，臨床癥狀不明顯，歸于亞臨床患者 （4）對(duì)278例典型病例根據(jù)患者的癥狀、體征、舌苔、脈象，四診合參，分為下五型：肝腎陰虛型患者106例；氣血兩虧型患者62例；濕熱內(nèi)蘊(yùn)型患者102例；痰蒙清竅型患者6例；痰火擾心型患者2例。 2. WD患者ATP7B基因突變的檢測(cè)結(jié)果 （1）1216例患者共檢出59種位于ATP7B基因外顯子的突變，3個(gè)位于內(nèi)含子區(qū)域的突變。其中第8外顯子p.Arg778Leu突變和第13外顯子p.Pro992Leu的突變頻率最高，分別是32.32%和18.54%；而第16外顯子p.Ile1148Thr突變、第12外顯子p.Arg919Gly突變、第18外顯子p.Asn1270Ser突變、第17外顯子p.Val1216Met突變、第8外顯子p.Met769Hisfs*26突變、第13外顯子p.Ser975Tyr突變、第12外顯子p.Thr935Met突變等各突變頻率分別是1.81%、1.77%、1.60%、1.60%、1.52%、1.44%、1.07%。其余的突變位點(diǎn)突變頻率均小于1%，有1例患者第14號(hào)外顯子檢出p.His1069Gln錯(cuò)義突變(該突變?yōu)闅W美人群的突變熱點(diǎn))。 （2）1216例患者ATP7B基因第8、13、12、16和第18號(hào)外顯子突變的頻率分別為34.58%、21.30%、3.42%、3.20%和3.12%。位于跨膜區(qū)(第7、8、12、13、19、20外顯子)的突變率為60.49%，ATP酶功能區(qū)(第10~11、14~18外顯子)的突變率為11.19%，銅離子結(jié)合區(qū)(第2~3、5外顯子)的突變率為2.43%。 （3）1216例患者中，漢族人群有1208例，突變頻率最高的是p.Arg778Leu突變（32.07%）和p.Pro992Leu突變(18.50%);少數(shù)民族有8例，其中3例檢出p.Arg778Leu突變，1例檢出p.Pro992Leu突變，突變頻率分別系37.50%和12.50%,因此推測(cè)這兩個(gè)突變也是部分少數(shù)民族的突變熱點(diǎn)。 （4）華東地區(qū)的患者最多，有724例，其次是華南（236例）、華北（94例）、東北（84例）、西南（40例）、西北（38例），各區(qū)的突變主要是p.Arg778Leu和p.Pro992Leu兩種突變，各地區(qū)兩個(gè)突變頻率分別為華東33.08%和19.27%、華南28.81%和16.74%、華北32.45%和11.17%、東北35.12%和15.48%、西南27.50%和21.25%、西北35.53%和17.11%，這兩個(gè)突變點(diǎn)突變頻率在各地區(qū)間比較無顯著差異（P0.05）。 3.中國人WD患者的p.Arg778Leu突變與患者的臨床分型有顯著性差異（P0.05），與性別、首發(fā)癥狀無顯著差異（P0.05）；p.Arg919Gly與首發(fā)癥狀及臨床分型之間有顯著差異（P0.05），與性別無無顯著差異（P0.05）；p.Pro992Leu突變、p.Ile1148Thr突變、p.Asn1270Ser突變、p.Val1216Met突變與患者的性別、首發(fā)癥狀、臨床分型等臨床表型之間均無顯著性差異（P0.05）。 4. p.Arg778Leu突變組與肝腎陰虛型相關(guān)（P0.05），而p.Pro992Leu、p.Ile1148Thr以及p.Arg919Gly突變與各中醫(yī)證型間無顯著差異（P0.05）。 結(jié)論 1.第8、13外顯子是中國人WD基因的第一突變熱區(qū)，第12、16、18外顯子是中國人WD基因的第二突變熱區(qū)；中國人WD基因的突變熱區(qū)位于ATP7B基因跨膜區(qū)，ATP7B基因功能區(qū)和銅離子結(jié)合區(qū)不是中國人WD基因的突變熱區(qū)。 2.第8外顯子p.Arg778Leu和第13外顯子p.Pro992Leu是中國人WD患者ATP7B基因的高頻突變位點(diǎn)(突變率分別為32.32%和18.54%)，第16外顯子p.Ile1148Thr突變、第12外顯子p.Arg919Gly突變、第18外顯子p.Asn1270Ser突變、第17外顯子p.Val1216Met突變、第8外顯子p.Met769Hisfs*26突變、第13外顯子p.Ser975Tyr突變、第12外顯子p.Thr935Met突變等在中國人WD患者中也是較為常見的突變位點(diǎn)，突變頻率分別是1.81%、1.77%、1.60%、1.60%、1.52%、1.44%、1.07%。 3.中國人WD患者的基因突變類型在地區(qū)上無差異性。 4.p.Arg778Leu和p.Arg919Gly純合或雜合突變的腦型患者均高于其他類型患者；p.Arg919Gly的非神經(jīng)首發(fā)癥狀患者低于神經(jīng)首發(fā)癥狀患者。WD基因的p.Arg778Leu、p.Pro992Leu、p.Ile1148Thr、p.Arg919Gly、p.Asn1270Ser及p.Ser975Tyr與性別無差異性。 5.中國人WD患者的Arg778Leu突變類型與肝腎陰虛型存在相關(guān)性。
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【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 杜益剛;程楠;胡紀(jì)源;;肝豆?fàn)詈俗冃曰蛟\斷技術(shù)的研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)學(xué);2009年04期

2 胡文彬;韓詠竹;楊任民;程楠;薛本春;孫道銀;喻緒恩;韓永升;葉冬青;;安徽省金寨縣和利辛縣漢族人群肝豆?fàn)詈俗冃缘幕疾÷收{(diào)查(附一家系報(bào)道)[J];安徽醫(yī)學(xué);2012年06期

3 洪銘范,胡紀(jì)原,胡文彬,楊任民;肝豆?fàn)詈俗冃缘闹嗅t(yī)辨證分型[J];安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年01期

4 吳志英,慕容慎行,王檸,方玲,林珉婷;中國人肝豆?fàn)詈俗冃曰虻?4、18和5號(hào)外顯子突變及多態(tài)研究[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;1997年05期

5 馬民,陳利國,屈援,張春玲,苗俊英,孫兆貴;高血壓病、2型糖尿病血瘀證與非血瘀證患者白細(xì)胞中c-fos基因表達(dá)的研究[J];新中醫(yī);2004年05期

6 程楠;陸兵勛;杜益剛;王訓(xùn);胡紀(jì)源;胡文彬;李凱;韓詠竹;潘速躍;楊任民;;中國人Wilson病患者基因高頻突變位點(diǎn)的快速檢測(cè)[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2009年04期

7 劉曉青,張建明,顧學(xué)范,吳潔,張雅芬,薛和平,許燮萍,鮑克容,陳瑞冠;Wilson病ATP7B基因Arg778Leu突變與臨床表型之相關(guān)性探討[J];中華兒科雜志;1999年06期

8 黃帆,梁秀齡,王瑩,徐評(píng)議,楊春水,閻振文;肝豆?fàn)詈俗冃曰駻rg778Leu突變與臨床表現(xiàn)關(guān)系研究[J];中華神經(jīng)科雜志;2000年05期

9 吳志英,王檸,林珉婷,方玲,慕容慎行;Wilson病基因全長外顯子的突變檢測(cè)和分析[J];中華神經(jīng)科雜志;2001年03期

10 楊靜芳;梁秀齡;馬守忠;王麗娟;陳嶸;陳彪;;74例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠥TP7B基因七種新突變的發(fā)現(xiàn)[J];中華神經(jīng)科雜志;2006年10期

本文編號(hào)：2308025