【摘要】：目的蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)是一種致死致殘率極高的出血性卒中類型。SAH后早期腦損傷(early brain injury,EBI)是指發(fā)病后72h內(nèi)發(fā)生的整個腦組織的直接病理損害。載脂蛋白E(apolipoprotien E,apo E)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的載脂蛋白,不僅參與脂質(zhì)代謝,還通過調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥反應(yīng)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。Apo E蛋白受體結(jié)合區(qū)擬肽COG1410具有和apo E全蛋白相同的受體結(jié)合能力,并且可自由透過血腦屏障,是一種有轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景的神經(jīng)保護(hù)劑。Apo E在SAH后的神經(jīng)保護(hù)作用鮮有文獻(xiàn)報道。本研究在SAH小鼠模型和體外培養(yǎng)的BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞中驗證apo E和COG1410在SAH后EBI和神經(jīng)炎癥反應(yīng)中的作用,并初步探討相關(guān)機(jī)制。方法1.C57BL/6J野生(wild type,WT)和APOE敲除(APOE knock out,APOE-/-)小鼠分別用血管內(nèi)穿刺法建立假手術(shù)和SAH模型,檢測SAH后內(nèi)源性apo E在72h內(nèi)的表達(dá)變化。建模后24h用轉(zhuǎn)棒試驗評估神經(jīng)功能,TUNEL法檢測皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡,免疫組織化學(xué)法和7.0T MRI檢測白質(zhì)損傷,免疫組織化學(xué)法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞活化,ELISA檢測IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá),western blot檢測JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化,比較WT和APOE-/-小鼠SAH后EBI和神經(jīng)炎癥反應(yīng)的差異。2.C57BL/6J野生小鼠建立SAH模型,分別靜脈注射COG1410和生理鹽水對照,用體重變化、轉(zhuǎn)棒試驗和神經(jīng)功能評分評估COG1410神經(jīng)保護(hù)作用的最佳劑量和時間窗。建模后24h用TUNEL法檢測皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡,免疫組織化學(xué)法和7.0T MRI檢測白質(zhì)損傷,免疫組織化學(xué)法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞活化,ELISA檢測IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá),western blot檢測JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化,驗證COG1410減輕EBI和神經(jīng)炎癥反應(yīng)的作用。3.體外培養(yǎng)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞株用血紅蛋白(hemoglobin,Hb)誘導(dǎo)活化,COG1410作用24h后Griess法檢測一氧化氮(nitric oxide,NO)釋放,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,western blot檢測JNK磷酸化。驗證COG1410對小膠質(zhì)細(xì)胞活化和極化的影響。將Hb和Hb+COG1410處理BV-2的條件培養(yǎng)基作用于HT-22神經(jīng)元細(xì)胞株,流式細(xì)胞術(shù)檢測HT-22細(xì)胞凋亡。JNK抑制劑SP600125作用Hb激活的BV-2細(xì)胞,Griess法檢測NO釋放,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,探討COG1410影響B(tài)V-2細(xì)胞活化和極化的可能機(jī)制。結(jié)果1.SAH后6h開始,內(nèi)源性apo E表達(dá)增多。APOE-/-小鼠24h存活率和轉(zhuǎn)棒時間均低于WT小鼠,APOE-/-小鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡和白質(zhì)損傷較WT小鼠加重。APOE-/-小鼠SAH后24h小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平、IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá),JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化水平均高于WT小鼠。2.SAH后注射COG1410的最低有效劑量是2mg/kg,有效時間窗是SAH后2h以內(nèi),可顯著改善小鼠神經(jīng)功能。COG1410可減輕SAH后皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡和白質(zhì)損傷,降低小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞M1型極化,并促進(jìn)M2型極化,減少腦內(nèi)IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá),抑制JNK、c-Jun、NF-κB磷酸化。3.COG1410可抑制Hb激活的BV-2細(xì)胞釋放NO,并可抑制BV-2細(xì)胞M1型極化,并促進(jìn)M2型極化。與Hb單獨處理的BV-2細(xì)胞相比,COG1410處理后的BV-2細(xì)胞條件培養(yǎng)基可減少HT-22神經(jīng)元凋亡。COG1410可抑制BV-2細(xì)胞JNK磷酸化,而JNK抑制劑SP600125可抑制BV-2細(xì)胞NO釋放和M1型極化,但對M2型極化無影響。結(jié)論內(nèi)源性apo E和apo E擬肽COG1410可抑制SAH后皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡、白質(zhì)損傷和神經(jīng)炎癥反應(yīng),改善小鼠神經(jīng)功能。COG1410可通過抑制JNK信號通路抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化和M1型極化,并減輕對神經(jīng)元的損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.35

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本文編號：2306883