【摘要】：第一部分急性腦出血患者血清中miR-130a的表達(dá)與腦水腫及疾病預(yù)后的相關(guān)性目的研究急性腦出血患者血清中miR-130a含量與血腫周邊水腫及預(yù)后的相關(guān)性。方法選取2012年至2013年武漢市6家醫(yī)院的急性自發(fā)性腦出血患者(≥18y；發(fā)病72h內(nèi)入院)為研究對(duì)象。排除幕下腦出血、腦室內(nèi)出血、血腫擴(kuò)大繼發(fā)性腦出血、腦出血行手術(shù)治療、近期腦梗塞(近3個(gè)月內(nèi))的患者及拒絕參加研究者。收集研究對(duì)象的基本人口學(xué)特征及相關(guān)臨床數(shù)據(jù)。采集研究對(duì)象發(fā)病后0-1天、2-3天、5-8天及9-14天的血清標(biāo)本及頭顱CT結(jié)果。采用Real-time PCR方法檢測(cè)血清中miR-130a的含量,軟件分析血腫及血腫周邊腦水腫的體積,美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表NIHSS和改良Rankin量表法評(píng)估患者發(fā)病后14天和90天疾病預(yù)后。結(jié)果腦出血患者血清中miR-130a的含量較對(duì)照組明顯升高;血清中miR-130a的水平在發(fā)病1天之內(nèi)達(dá)到高峰(P0.01),然后隨著時(shí)間的推移逐漸下降。發(fā)病1天內(nèi)的血腫體積中位數(shù)為7.33cm3(四分位數(shù)差,3.87-20.94cm3);發(fā)病2-3天時(shí)血腫體積中位數(shù)為8.71 cm3(四分位數(shù)差,5.53-14.43cm3);發(fā)病5-8天時(shí)血腫體積中位數(shù)為10.21 cm3(四分位數(shù)差,2.92-18.34cm3);發(fā)病9-14天時(shí)血腫體積中位數(shù)為6.38 cm3(四分位數(shù)差,4.19-9.26cm3)。發(fā)病1天時(shí)血腫周邊水腫體積中位數(shù)為17.41cm3(四分位數(shù)差,7.56-27.51 cm3)；發(fā)病2-3天時(shí)血腫周邊水腫體積中位數(shù)為17.81cm3(四分位數(shù)差,7.56-30.83cm3)；發(fā)病5-8天時(shí)血腫周邊水腫體積中位數(shù)為17.24 cm3(四分位數(shù)差,10.21-28.98cm3)：發(fā)病9-14天時(shí)血腫周邊水腫體積中位數(shù)為17.26cm3(四分位數(shù)差,16.70-27.85cm3)。發(fā)病1天及2-3天時(shí)miR-130a的水平和血腫周邊水腫體積顯著相關(guān)(R2days 0-1=0.62,R2days 2-3=0.70;P0.01)。發(fā)病5-8天時(shí)二者相關(guān)性較弱(R2days 5-8=0.41,P0.05),至發(fā)病9-10天時(shí)二者已無(wú)相關(guān)性(R2days9-14=0.16,P0.05)。校準(zhǔn)基線血腫體積后,發(fā)病3天內(nèi)miR-130a水平與血腫周邊水腫體積之間的相關(guān)性仍然顯著(βdays0-3=0.541,P0.01)。血腫體積和血腫周邊水腫體積的相關(guān)系數(shù)R2在發(fā)病1-8天內(nèi)隨著時(shí)間推移逐漸升高(R2days0-1=0.60,P0.01;R2days2-3=0.65, P0.01;R2days5-8=0.89,P0.05),而將miR-130a水平和血腫體積作為2個(gè)獨(dú)立的變量,應(yīng)用多元線性回歸方程分析顯示,發(fā)病3天之內(nèi)其與血腫周邊水腫大小的相關(guān)系數(shù)R2進(jìn)一步提高(R2days0-1=0.729,R2days2-3=0.887:P0.01)�；�水平的miR-130a水平和NHISS評(píng)分呈現(xiàn)正相關(guān)(R2=0.56,P0.01),而上述相關(guān)性在腦深部出血(20/30)和腦葉出血(10/30)的亞組患者中同樣顯著(R2分別為0.62和0.57,二者P值均小于0.01)。當(dāng)把基線血腫體積大小和基線miR-130a水平整合進(jìn)入線性回歸方程時(shí),基線miR-130a的水平與NIHSS評(píng)分仍相關(guān)(β=0.703,P0.01,β腦深部出血=0.479, P0.01; β腦葉出血=0.756,P0.05)。但在對(duì)腦葉出血亞組患者進(jìn)行多元線性回歸分析時(shí)顯示,上述相關(guān)性欠佳(R2=0.433,P0.05)。同時(shí),基線miR-130a水平和mRS評(píng)分的良好相關(guān)性只出現(xiàn)在深部血腫的患者中(R2=0.602,P0.01),即使是在校準(zhǔn)了基線的血腫體積后,上述相關(guān)性仍然存在(β=0.533,P0.05)。結(jié)論腦出血后患者血清中的miR-130a水平升高；升高的miR-130a與血腫周邊水腫體積呈正相關(guān)：腦深部血腫患者血清中的miR-130a水平可以提示預(yù)后。第二部分miR-130a通過(guò)破壞血腦屏障影響腦出血后腦水腫目的探討大鼠腦出血模型中血清、血腫周邊組織中miR-130a的表達(dá)及其在腦出血腦水腫中的作用。方法采用膠原酶基底節(jié)注射制備大鼠腦出血模型。實(shí)時(shí)-定量PCR方法檢測(cè)大鼠血清和血腫周邊腦組織中的miR-130a水平。干濕重稱量法檢測(cè)大鼠腦水腫的程度。伊文氏蘭檢測(cè)大鼠血腦屏障通透性的改變。側(cè)腦室注射miR-130a的抑制物miR-130a inhibitors后評(píng)估大鼠腦水腫的含量、血腦屏障通透性和動(dòng)物行為學(xué)評(píng)分的變化。結(jié)果大鼠血腫周邊組織中miR-130a的水平在腦出血1天內(nèi)顯著升高并達(dá)到峰值,與對(duì)照組相比miR-130a含量上升2.5倍(Pday10.05),隨后miR-130a水平隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降(Pday 30.05),到第7天時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平。同樣,大鼠血清中miR-130a的水平呈現(xiàn)出與上述變化規(guī)律同樣的趨勢(shì)(Pday 10.01;P day30.05)。上述miR-130a的變化趨勢(shì)與大鼠腦出血側(cè)半球腦組織的含水量的變化趨勢(shì)一致(Pday 10.01; Pday30.01)。 miR-130a inhibitorss可以顯著下調(diào)內(nèi)源性的miR-130a的水平(P0.01)；同時(shí),miR-130a inhibitorss可以降低腦出血后腦組織含水量(P0.05),減輕血腦屏障的破壞(P0.05),改善大鼠腦出血后的神經(jīng)功能(P0.05)。結(jié)論膠原酶誘導(dǎo)的大鼠腦出血模型中,血腫周邊組織和血清中miR-130a的水平表達(dá)上調(diào)。miR-130a的升高和大鼠腦水腫的嚴(yán)重程度正相關(guān)。側(cè)腦室下調(diào)miR-130a的水平后,大鼠血腦屏障通透性改善、腦水腫程度減輕、以及動(dòng)物行為學(xué)評(píng)分提高。第三部分腦出血后miR-130a破壞血腦屏障的機(jī)制目的探討miR-130a加劇血腦屏障破壞的分子機(jī)制。方法原代培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,miR-130a類似物miR-130a mimic轉(zhuǎn)染后觀察單層腦微血管內(nèi)皮通透性的改變。采用凝血酶、氯化亞鐵及血紅素處理腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,實(shí)時(shí)-熒光定量PCR檢測(cè)miR-130a的變化。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)表達(dá)miR-130a后,分別用實(shí)時(shí)-熒光定量PCR和免疫印跡western-blot檢測(cè)小凹蛋白cav-1和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2,-9的變化。大鼠腦出血模型中,側(cè)腦室注射miR-130a的抑制物miR-130a inhibitors,分別用實(shí)時(shí)-熒光定量PCR和免疫印跡western-blot檢測(cè)小凹蛋白cav-1和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2,-9的變化。結(jié)果miR-130a mimic轉(zhuǎn)染上調(diào)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的miR-130a水平后,FITC標(biāo)記的葡聚糖dextran通過(guò)單層腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的能力增強(qiáng)(P0.05)。凝血酶劑量依賴性上調(diào)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中miR-130a的表達(dá)(P0.01),氯化亞鐵在高濃度時(shí)上調(diào)miR-130a的表達(dá),而血紅素對(duì)miR-130a的表達(dá)無(wú)影響。凝血酶刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞后,miR-130a的表達(dá)無(wú)明顯變化。當(dāng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞和凝血酶的抑制劑(阿加曲班)共培養(yǎng)時(shí),凝血酶誘導(dǎo)的miR-130a高表達(dá)被部分拮抗(P0.05)。腦出血后血腫周邊組織中MMP-2和MMP-9 mRNA的表達(dá)顯著升高(P0.01),而MMP-2和MMP-9mRNA的上調(diào)可被miR-130a的抑制物miR-130a inhibitorsss部分逆轉(zhuǎn)(P0.05)。小凹蛋白cav-1的水平在腦出血后1天的大鼠血腫周邊組織中的表達(dá)顯著下降(P0.05),然后隨著時(shí)間推移逐漸上升(P0.05),與miR-130a的表達(dá)趨勢(shì)相反。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)表達(dá)miR-130a后,小凹蛋白cav-1的水平顯著下降,而MMP-2,-9水平表達(dá)上調(diào)(P0.05)。 cav-1的折疊域肽cavtratin和miR-130a共處理內(nèi)皮細(xì)胞后,miR-130a誘導(dǎo)的MMP-2,-9的過(guò)表達(dá)被抑制(P0.05)。凝血酶處理腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞后,cav-1的水平表達(dá)下調(diào),而MMP-2,-9水平表達(dá)上調(diào)。凝血酶刺激腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞后cav-1及MMP-2,-9的變化,可以被miR-130a抑制物miR-130a inhibitorss或凝血酶抑制物阿加曲班所逆轉(zhuǎn)。結(jié)論miR-130a的升高可導(dǎo)致單層腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加;凝血酶呈劑量依賴性地誘導(dǎo)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞上調(diào)miR-130a水平;miR-130a通過(guò)作用于小凹蛋白cav-1/基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2,-9通路引起血腦屏障通透性的增加。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.34

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本文編號(hào)：2301329