【摘要】：目的：研究新生大鼠缺氧缺血性腦損傷（Hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）后海馬組織中神經(jīng)元細(xì)胞的損傷情況，通過(guò)觀察不同時(shí)間點(diǎn)及各組間細(xì)胞死亡、自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)，初步探討雷帕霉素對(duì)HIBD后神經(jīng)元存活的干預(yù)作用。 方法：采用7日齡新生SD（Sprague Dawley）大鼠，根據(jù)改良Rice-Vannucci法建立HIBD模型。將新生大鼠隨機(jī)分為雷帕霉素干預(yù)組（Ra組）、缺氧缺血組（HIBD組）及假手術(shù)組（Sham組）。選取HIBD模型制成后0h、6h、12h、24h、48h及72h六個(gè)時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)Western blot法測(cè)定海馬組織中Cleaved caspase-3、Beclin-1、LC3蛋白濃度的變化；采用免疫組織化學(xué)法染色觀察海馬組織Cleaved caspase-3染色情況，結(jié)合HE染色及尼氏染色從細(xì)胞層面了解海馬區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生缺氧缺血損傷后的轉(zhuǎn)歸情況，并探討應(yīng)用自噬激動(dòng)劑雷帕霉素對(duì)其發(fā)揮的干預(yù)作用及可能機(jī)制。 結(jié)果： 1、HE染色結(jié)果： 1.1Sham組腦組織海馬區(qū)域6個(gè)時(shí)間點(diǎn)HE染色后光鏡下觀察：海馬區(qū)域組織染色均勻、結(jié)構(gòu)清晰，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，胞質(zhì)染色為淡紅色，胞核染色為藍(lán)色； 1.2HIBD組腦組織HE染色后光鏡下觀察：缺氧缺血側(cè)海馬神經(jīng)細(xì)胞變性及壞死的程度隨時(shí)間的延長(zhǎng)而加重，表現(xiàn)為海馬區(qū)域組織結(jié)構(gòu)紊亂、間質(zhì)水腫，神經(jīng)細(xì)胞腫脹甚至壞死，胞核出現(xiàn)深染、固縮、碎裂，核仁消失，伴有不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)； 1.3Ra組腦組織HE染色后光鏡下觀察：缺氧缺血側(cè)海馬神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)變性及部分神經(jīng)細(xì)胞壞死，但程度及范圍均較HIBD組輕； 2、Western-blot結(jié)果： 2.1Beclin-1蛋白：與Sham組相比，HIBD組該蛋白自0h起表達(dá)迅速升高，至24h達(dá)高峰，且每個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均顯著高于Sham組(P0.05)；與HIBD組相比，Ra組該蛋白表達(dá)趨勢(shì)與HIBD組一致，且每個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均高于HIBD組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 2.2LC3II：與Sham組相比，HIBD組及Ra組的該蛋白表達(dá)在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)均高于Sham組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；HIBD組及Ra組該蛋白均從0h起開(kāi)始上升，且Ra組的表達(dá)在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于HIBD組，除外12h這一時(shí)間點(diǎn)外，，其它5個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 2.3Cleaved caspase-3蛋白：與Sham組相比，HIBD組及Ra組該蛋白的表達(dá)除0h無(wú)明顯增加外，其余5個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與HIBD組相比，Ra組該蛋白表達(dá)在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均低于HIBD組，但只有6h及12h具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 3、Cleaved caspase-3蛋白免疫組織化學(xué)染色結(jié)果： Sham組海馬區(qū)域各個(gè)時(shí)間點(diǎn)染色均較淺；與HIBD組相比，Ra組染色僅在6h及12h淺于HIBD組，且平均光密度值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，其余時(shí)間點(diǎn)兩組無(wú)顯著差異(P0.05)； 4、尼氏染色結(jié)果： 與Sham組相比，HIBD組及Ra組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均存在不同程度的海馬區(qū)域結(jié)構(gòu)紊亂、神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少、細(xì)胞核碎裂、溶解及尼氏小體崩解及丟失，隨時(shí)間延長(zhǎng)而加重；根據(jù)尼氏染色計(jì)數(shù)神經(jīng)細(xì)胞丟失數(shù)目，與HIBD組相比，Ra組均少于HIBD組，隨時(shí)間延長(zhǎng)結(jié)果差異性越顯著，以48h及72h最明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 結(jié)論： 1、HIBD后海馬組織區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞損傷，表現(xiàn)為核溶解及碎裂，部分細(xì)胞分界模糊，并且牽涉到凋亡、自噬及壞死三種形式； 2、在本實(shí)驗(yàn)中提前腹腔注射雷帕霉素，在HIBD早期能夠抑制海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡，保護(hù)細(xì)胞質(zhì)膜完整性，減輕炎癥反應(yīng)； 3、適度激活自噬對(duì)新生大鼠發(fā)生HIBD后對(duì)海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞具有一定保護(hù)作用；
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743

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本文編號(hào)：2269141