【摘要】：第一部分脊神經(jīng)結(jié)扎神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠脊髓背角自噬的變化 目的：建立大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎神經(jīng)病理性疼痛模型,并觀察大鼠脊髓背角自噬的變化。 方法：雄性SD大鼠(200g-220g)60只,隨機(jī)分為兩組(n=30)：假手術(shù)組(sham組)和脊神經(jīng)結(jié)扎組(SNL組)。SNL組大鼠行左側(cè)腰5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù),sham組大鼠僅暴露并分離左側(cè)腰5脊神經(jīng)。測定各組大鼠術(shù)前1d(基礎(chǔ)值)和術(shù)后1,3,5,7d機(jī)械痛閾(PWT)和熱痛閾(PWL)。每組大鼠于術(shù)后1,3,5,7d隨機(jī)取6只處死,Western blot法檢測大鼠左側(cè)腰5脊髓背角微管相關(guān)輕鏈蛋白3(LC3)和泛素結(jié)合蛋白p62的表達(dá)。SNL組大鼠在術(shù)后第7d隨機(jī)取4只處死,取左側(cè)腰5脊髓背角行p62/NeuN、p62/GFAP、p62/CD11b雙重免疫熒光標(biāo)記染色。 結(jié)果：和sham組相比,SNL組大鼠PWT和PWL分別在術(shù)后第1天和第3天明顯降低,并持續(xù)到第7天(P0.05),脊髓LC3-Ⅱ、p62表達(dá)明顯增高(P0.05)。雙重免疫熒光標(biāo)記染色結(jié)果顯示p62與NeuN、CD11b共表達(dá)。 結(jié)論：成功建立了大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎神經(jīng)病理性疼痛模型,脊髓背角神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞自噬受損可能參與了脊神經(jīng)結(jié)扎引起的大鼠神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和發(fā)展。 第二部分調(diào)節(jié)自噬對神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓背角白介素-1β的影響 目的：研究上調(diào)或抑制自噬對神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓背角白介素-1β的影響。 方法：雄性SD大鼠(200g-220g)60只,隨機(jī)分為4組(n=15)：假手術(shù)組(sham組),脊神經(jīng)結(jié)扎組(SNL組),雷帕霉素處理組(Rap組)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)處理組(3-MA組)。各組大鼠經(jīng)L4-5鞘內(nèi)置管后,SNL組、Rap和3-MA組大鼠行左側(cè)腰5脊神經(jīng)結(jié)扎術(shù),sham組大鼠分離左側(cè)腰5脊神經(jīng)但不結(jié)扎。Rap組和3-MA組大鼠于SNL術(shù)后30min分別經(jīng)鞘內(nèi)置管給予雷帕霉素0.1μg和3-MA30μg; sham組和SNL組大鼠則給與等容溶劑(5%DMSO10μl)。每日一次,連續(xù)7天。測定各組大鼠術(shù)前1d(基礎(chǔ)值)和術(shù)后1,3,5,7d機(jī)械痛閾(PWT)和熱痛閾(PWL)。7d后處死大鼠,各組取6只Western blot檢測大鼠左側(cè)腰5脊髓背角微管相關(guān)輕鏈蛋白3(LC3)和泛素結(jié)合蛋白p62的表達(dá)；取3只大鼠在透射電鏡下觀察左側(cè)脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞自噬體；取6只大鼠ELISA法檢測大鼠左側(cè)腰5脊髓背角白介素-1p(IL-1β)水平。 結(jié)果：和sham組相比,SNL組大鼠PWT和PWL明顯降低(P0.05),脊髓LC3-Ⅱ、 p62及IL-1β表達(dá)明顯增高(P0.05)。和SNL組相比,Rap組大鼠PWT、PWL、脊髓LC3-Ⅱ和小膠質(zhì)細(xì)胞自噬體明顯升高(P0.05),p62和IL-1β表達(dá)明顯降低(P0.05)；而3-MA組大鼠PWT、PWL、脊髓LC3-Ⅱ和小膠質(zhì)細(xì)胞自噬體明顯降低(P0.05),p62和IL-1β表達(dá)明顯增高(P0.05)。 結(jié)論：上調(diào)自噬能減輕神經(jīng)病理性疼痛,而抑制自噬加重神經(jīng)病理性疼痛；其機(jī)制與脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞自噬對脊髓背角IL-1β水平的影響有關(guān)。 第三部分調(diào)節(jié)自噬對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角神經(jīng)元凋亡的影響 目的：研究調(diào)節(jié)自噬對神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角神經(jīng)元凋亡的影響 方法：實(shí)驗(yàn)1.30只SD大鼠鞘內(nèi)置管后隨機(jī)分為3組(n=10)：假手術(shù)組(sham組),脊神經(jīng)結(jié)扎組(SNL組),雷帕霉素處理組(Rap組)。Sham組大鼠分離左側(cè)腰5脊神經(jīng)但不結(jié)扎,Rap組大鼠于SNL術(shù)后30min經(jīng)鞘內(nèi)置管給予雷帕霉素0.1μg,Sham組和SNL組大鼠則給予等容溶劑(5%DMSO10μl)。藥物每日鞘內(nèi)注射一次,連續(xù)7天。 實(shí)驗(yàn)2.30只SD大鼠鞘內(nèi)置管后隨機(jī)分為3組(n=10)：假手術(shù)組(sham組),脊神經(jīng)結(jié)扎組(SNL組),3-甲基腺嘌呤(3-MA)處理組(3-MA組)。Sham組大鼠分離左側(cè)腰5脊神經(jīng)但不結(jié)扎,3-MA組大鼠于SNL術(shù)后30min經(jīng)鞘內(nèi)置管給予3-MA30μg。Sham組和3-MA組大鼠則給予等容溶劑(5%DMSO10μl)。藥物每日鞘內(nèi)注射一次,連續(xù)3天。 實(shí)驗(yàn)1和實(shí)驗(yàn)2分別于SNL術(shù)后7d和3d處死大鼠并取左側(cè)腰5脊髓背角。各組取3只透射電鏡下觀察神經(jīng)元,剩余7只大鼠用Western blot法檢測脊髓背角活化的caspase3和NeuN表達(dá)。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)1：和sham組相比,電鏡下SNL組大鼠脊髓背角神經(jīng)元受損明顯,caspase3明顯增高(P0.05),NeuN明顯降低(P0.05)；和SNL相比,電鏡下Rap組脊髓背角神經(jīng)元受損較輕,自噬體增多,caspase3明顯降低(P0.05),NeuN明顯增高(P0.05)。 實(shí)驗(yàn)2：和sham組相比,電鏡下SNL組大鼠脊髓背角神經(jīng)元受損明顯,caspase3明顯增高(P0.05),而NeuN未見明顯變化；和SNL相比,電鏡下3-MA組大鼠脊髓背角神經(jīng)元受損加劇,自噬體減少,caspase3明顯降低(P0.05),NeuN明顯增高(P0.05)。 結(jié)論：誘導(dǎo)自噬能減輕SNL大鼠脊髓背角神經(jīng)元凋亡,抑制自噬則增加SNL大鼠脊髓背角神經(jīng)元凋亡。自噬可能通過對脊髓背角神經(jīng)元凋亡的影響而影響SNL大鼠痛閾。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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1 杜雯;孫益;;小膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)病理性疼痛中的作用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年01期

2 鄭海燕;王興芬;孫保存;;自噬與凋亡相互關(guān)系的分子機(jī)制探討[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年01期

3 金小高;羅愛林;王金韜;張廣雄;萬麗;安珂;徐穎;田玉科;;脊髓神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞激活在三種神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型脊髓水平致痛機(jī)制中的作用[J];中華麻醉學(xué)雜志;2006年01期

4 張延波;李生興;陳溪萍;楊麗;張運(yùn)閣;劉冉;陶陸陽;;大鼠腦外傷后自噬被激活并在早期對受損神經(jīng)元起保護(hù)作用(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年03期

5 傅開元,張非煜,候波,俞燕芳,馬緒臣,張震康;福爾馬林致炎癥疼痛動物脊髓后角神經(jīng)元凋亡[J];中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

6 王萍;田玉科;;神經(jīng)病理性疼痛脊髓機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

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本文編號：2259582