【摘要】：目的分析家族性CNS HB家系的流行病學(xué)及臨床特點(diǎn),闡述診治方法的可行性,探尋發(fā)病機(jī)制。方法（1）對(duì)一個(gè)家族性CNS HB的38名家族成員進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，體格檢查和影像學(xué)篩查。（2）對(duì)該家族中7名CNS HB患者的病史、臨床表現(xiàn)、影像學(xué)資料及診斷治療方法、隨訪進(jìn)行描述和分析。（3）應(yīng)用光鏡、電鏡及免疫組織化學(xué)染色對(duì)4例進(jìn)行手術(shù)的CNS HB患者的腫瘤組織和6例外傷腦組織(作為對(duì)照)進(jìn)行病理學(xué)檢查。（4）抽取該CNS HB家系共38位成員及30例健康對(duì)照者的外周血，提取DNA和RNA，用PCR方法擴(kuò)增VHL基因外顯子1及2并進(jìn)行測(cè)序；用Real-time PCR法測(cè)定外周血細(xì)胞中VHL mRNA表達(dá)水平。(5)對(duì)所獲取的CNS HB的腫瘤組織和對(duì)照組正常腦組織進(jìn)行蛋白質(zhì)提取、酶解，應(yīng)用Label-free蛋白組學(xué)方法進(jìn)行定量分析，同時(shí)對(duì)篩選出的差異蛋白進(jìn)行生物信息分析。結(jié)果（1）該家系成員中現(xiàn)存有7例發(fā)病，年齡14～53歲，平均36.5歲，外顯率10/38(26.3％)，男性發(fā)病比女性多見(6：4)，CNSHB占90%，且多發(fā)性HBs占20%；遺傳可能來自父系(I2成員)。（2）7例患者均未合并其它部位病變，其中6例為實(shí)質(zhì)性腫瘤，2例為囊性腫瘤；5例患者的腫瘤位于小腦半球、延髓和腦干旁，1例位于頸部脊髓，1例位于視網(wǎng)膜；4例患者共進(jìn)行7次顯微手術(shù)，切除血管母細(xì)胞瘤10枚，術(shù)后隨訪8年；先證者在術(shù)后6年異位復(fù)發(fā)，未予處理，繼續(xù)隨訪；1例進(jìn)行激光治療視網(wǎng)膜血管瘤；2例癥狀不明顯進(jìn)行隨訪在隨訪中未見新發(fā)病灶，原病灶也未增大；復(fù)發(fā)率為42.8%（3/7）。（3）病理學(xué)特征：HE染色可見腫瘤由豐富的毛細(xì)血管和間質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成，胞漿呈空泡狀或泡沫狀，未見異型核的瘤細(xì)胞。波形蛋白、血管內(nèi)皮生長因子受體、α抑制素、烯醇化酶染色在HB間質(zhì)細(xì)胞均呈強(qiáng)陽性表達(dá)； CD31、CD34及vimentin在HB內(nèi)皮細(xì)胞均呈強(qiáng)陽性表達(dá)；但是膠質(zhì)纖維酸性蛋白、角蛋白抗原、上皮膜抗原染色在CNS HB表達(dá)均呈陰性。Ki-67標(biāo)記指數(shù)，除1例第二次手術(shù)為2％，余均為l％。電鏡觀察：可見內(nèi)皮細(xì)胞呈扁平形，較幼稚，細(xì)胞核較大，染色淡，胞漿內(nèi)可見到Weibel-Palade小體；周細(xì)胞位于內(nèi)皮細(xì)胞外側(cè)，靠近血管腔，體積較內(nèi)皮細(xì)胞小，核呈卵圓形，細(xì)胞漿較少，細(xì)胞周圍有一層完整的基底膜包繞。間質(zhì)細(xì)胞呈橢圓形，表面不規(guī)則，細(xì)胞核大，染色深，細(xì)胞漿中有豐富的脂滴空泡。(4)在此CNS HB家系成員中，7位發(fā)病者在VHL外顯子1均測(cè)出位為5’端非編碼區(qū)第19位核苷酸發(fā)生A→G的突變；與健康對(duì)照組相比，VHL基因mRNA表達(dá)水平明顯降低，其中家系成員中已發(fā)病者VHL基因mRNA表達(dá)水平(0.062)與未發(fā)病者(0.26)比下降更為明顯。(5)分離鑒定出CNS HB組可信蛋白和肽段分別為385和2195個(gè)；正常組可信蛋白和肽段分別是663和3662個(gè)。定量分析、差異匹配篩選出差異蛋白只在CNS HB中表達(dá)的有3個(gè)（vimentin、TPM4及SERPING1）；在HB和對(duì)照組織中都表達(dá)的13個(gè)蛋白質(zhì)中，有3個(gè)蛋白在HB組織中表達(dá)上調(diào)（HBB、ALB及HBD）、11個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)（如HSP、ATP、PEBP1、FTL、SOD2、PARK7、KRT1Keratin、Putative等）；只在對(duì)照組織中表達(dá)的有3個(gè)蛋白（Tubulin beta-4chain、14-3-3及CA1）。在GO功能分析中，參與生物過程（Biological Process，BP）分析提示，生物學(xué)過程正負(fù)調(diào)控、刺激應(yīng)答、生物粘附、免疫系統(tǒng)過程的功能明顯增強(qiáng)和代謝過程、發(fā)育過程、信號(hào)傳遞、細(xì)胞進(jìn)程功能的降低與家族性CNS HB形成有關(guān)。在基因分子功能（Molecular Function,MF）分析得出，生物趨化活性功能只在腫瘤組出現(xiàn)；而翻譯調(diào)節(jié)活性功能在腫瘤組中缺失；在細(xì)胞成分分析（CC）結(jié)果顯示在CNS HB組織中細(xì)胞外區(qū)、細(xì)胞外基質(zhì)中的蛋白數(shù)量明顯高于對(duì)照組；而神經(jīng)突觸部分和神經(jīng)元突觸則明顯低于正常對(duì)照組。應(yīng)用COG分析（蛋白相鄰類的聚簇）得出結(jié)果是：“核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)”（B類）與“細(xì)胞動(dòng)力學(xué)”（N類）功能只在CNS HB組織中發(fā)現(xiàn)；但是“細(xì)胞周期調(diào)控”、“細(xì)胞分裂”和“染色體分解”（D類）、“輔酶的轉(zhuǎn)運(yùn)和新陳代謝”（H類）、“次級(jí)代謝生物合成”和“轉(zhuǎn)運(yùn)及分解代謝”（Q類），這些功能只在正常對(duì)照組中出現(xiàn)，因此我們推測(cè)家族性CNS HB的發(fā)生、發(fā)展、易反復(fù)復(fù)發(fā)可能與B類和N類功能表達(dá)上調(diào)，D類的失控、H類和Q類的功能異常相關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)高遷移率族蛋白1、組蛋白H2A、SERPING l、原肌球蛋白α-4、波形蛋白僅在CNS HB中表達(dá)，這5個(gè)蛋白可能是直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程：高遷移率族蛋白1和原肌球蛋白4可能是通過促進(jìn)細(xì)胞遷移、分化和樹突狀細(xì)胞的高表達(dá)、調(diào)節(jié)蛋白酶活性等來促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤及復(fù)發(fā)；H2A高表達(dá)和PCBPl的調(diào)節(jié)活性的喪失，激活缺氧信號(hào)通路，上調(diào)HIF-la，促使間質(zhì)細(xì)胞向外分泌EPO及VEGF和α-珠蛋白mRNA的不穩(wěn)定，促進(jìn)HB的形成。SERPINGl基因在CNS HB中顯著上調(diào)可能是促進(jìn)該腫瘤生長及瘤周水腫的原因之一。PURA所起到的轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)節(jié)活性在CNSHB中的缺失或失調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、生長異常、神經(jīng)元變性壞死、血管平滑肌和α-肌動(dòng)蛋白基因的轉(zhuǎn)錄活性不能被抑制，而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。結(jié)論（1）.家族性中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管母細(xì)胞瘤是嚴(yán)重危害患者及其家族成員的一種具有遺傳性的VHL病;發(fā)病年齡較輕，多發(fā)病灶，易復(fù)發(fā)，對(duì)于每個(gè)懷疑有家族史的CNSHB患者都要對(duì)其家系成員進(jìn)行普查，包括影像學(xué)、基因生物學(xué)及蛋白組學(xué)檢測(cè)。（2）.家族性中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管母細(xì)胞瘤即VHL病的正確診斷需要結(jié)合家族史、臨床表現(xiàn)、MRI檢查和病理學(xué)檢測(cè)以及VHL基因檢測(cè)。一旦確診為VHL病，則要終生隨訪。（3）.家族性CNS HB患者的發(fā)病與VHL基因的突變有關(guān)，外周血VHL基因mRNA表達(dá)水平的下降可能可做為該病的診斷依據(jù)及預(yù)后判斷指標(biāo)之一。（4）.顯微手術(shù)切除是CNS HB主要治療手段，立體定向放射治療可作為補(bǔ)充治療方法，無明顯臨床癥狀的、病灶小的可進(jìn)行密切追蹤隨訪，生物免疫靶向治療研發(fā)可能是一種理想的輔助治療方法。（5）.在CNS HB組織的生物活動(dòng)過程中正負(fù)調(diào)控、刺激應(yīng)答、生物粘附、酶調(diào)節(jié)活性、結(jié)構(gòu)分子活性、免疫系統(tǒng)進(jìn)程等功能明顯上調(diào)，而且化學(xué)趨化活性、核染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能只存在于CNS HB腫瘤中；但是翻譯調(diào)節(jié)活性、細(xì)胞周期控制、代謝過程、發(fā)育過程、信號(hào)傳遞、細(xì)胞和染色體分裂等功能卻較正常腦組織是下調(diào)或喪失。在參與這些功能信息中最有代表性、并且是首次發(fā)現(xiàn)與CNS HB發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)蛋白有： HMGB1、TPM4、H2A、PCBPl、SERPINGl、PURA；另外Vimentin的高表達(dá)與CNS HB致病的關(guān)系密切，他與CNS HB干細(xì)胞起源有關(guān)，，這與文獻(xiàn)報(bào)道相似。（6）.家族性CNS HB發(fā)病是一個(gè)多因素參與、多通路共同作用的復(fù)雜病理過程。
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【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2258291