【摘要】：目的探討載脂蛋白E（ApoE）對實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎（EAE）小鼠中的金屬蛋白酶9（MMP-9）及其對血腦屏障通透性的影響。 方法用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白多肽（MOG35-55）為抗原分別誘導(dǎo)C57BL/6J種屬的野生型（WT）和ApoE基因敲除型（ApoE-/-）小鼠建立EAE模型，設(shè)立E-WT組和E-ApoE-/-組；并分別建立正常對照組（C），C-WT組和C-ApoE-/-組。各組小鼠通過尾靜脈注射伊文思藍(lán)（EB）并測定腦組織中EB滲透含量來評估BBB通透性。取腦組織做石蠟切片，，行HE染色觀察炎性浸潤情況，免疫組化法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）的表達(dá)。分別應(yīng)用實(shí)時熒光定量RT-PCR、Western blot檢測腦組織中MMP-9、TIMP-1和緊密連接蛋白Occludin、Claudin-5的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用明膠酶譜分析MMP-9活性的表達(dá)。 結(jié)果與E-WT組小鼠比較，E-ApoE-/-組小鼠在EAE發(fā)病后平均評分、峰值評分明顯升高（P0.05），而潛伏期比較無明顯統(tǒng)計(jì)意義（P0.05）；E-ApoE-/-組的中樞神經(jīng)組織炎癥細(xì)胞侵潤明顯，同時腦組織中EB的含量也顯著高于E-WT組（P0.05）。與正常組小鼠相比，E-ApoE-/-和E-WT組的腦組織中的occludin和claudin-5的mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯減少（P0.05）；而E-ApoE-/-組的腦組織中的occludin和claudin-5的mRNA和蛋白表達(dá)水均低于E-WT組（P0.05）。另外與正常組小鼠相比，E-ApoE-/-組和E-WT組腦組織中的MMP-9的mRNA、蛋白表達(dá)水和活性表達(dá)均明顯升高（P0.05），而E-ApoE-/-組高于E-WT組（P0.05）；與正常組小鼠相比，E-ApoE-/-組和E-WT組腦組織中的TIMP-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低（P0.05），E-ApoE-/-組表達(dá)稍低于E-WT組（P0.05）。 結(jié)論ApoE的缺乏會惡化EAE的病情進(jìn)展，并加重血腦屏障完整性的破壞從而促進(jìn)炎性細(xì)胞侵潤，而造成血腦屏障完整性破壞的機(jī)制可能與增加MMP-9的表達(dá)和增強(qiáng)其活性密切相關(guān)，說明ApoE在EAE發(fā)病過程中對維持血腦屏障完整性起保護(hù)作用，這可能成為MS/EAE另一個治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of apolipoprotein E (ApoE) on metalloproteinase-9 (MMP-9) and blood-brain barrier permeability in (EAE) mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Methods the wild-type (WT) and ApoE knockout type (ApoE-/-) mice of C57BL/6J species were induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein polypeptide (MOG35-55) as antigen to establish EAE model, E-WT group and E-ApoE-r- group, and normal control (C) C-WT group and C-ApoE-r-group respectively. The permeability of BBB was evaluated by intravenous injection of Evans blue (EB) and determination of EB osmotic content in brain tissue. The expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) was detected by immunohistochemical method. The mRNA transcription and protein expression of MMP-9,TIMP-1 and Occludin,Claudin-5 in brain tissue were detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR,Western blot. The expression of MMP-9 activity was analyzed by gelatinase spectrum. Results compared with the E-WT group, the average score and peak score of the E-ApoE-r- group were significantly higher than those of the E-WT group (P0.05), but there was no significant statistical significance in the latency comparison (P0.05). At the same time, the content of EB in brain tissue was significantly higher than that in E-WT group (P0.05). Compared with normal group, the expression of mRNA and protein of occludin and claudin-5 in brain tissue of E-WT group and E-ApoE-r- group were significantly decreased (P0.05), while the mRNA and protein expression of occludin and claudin-5 in E-ApoE-r- group were lower than those in E-WT group (P0.05). In addition, compared with the normal group, the expression of MMP-9 mRNA, protein in the brain tissue of the E-ApoE-r-group and E-WT group was significantly higher than that of the normal group (P0.05), but the expression of mRNA, protein in E-ApoE-r-group was higher than that in the E-WT group (P0.05). Compared with the normal group, the mRNA and protein expression of TIMP-1 in the brain tissue of the E-ApoE-r-group and E-WT group were decreased (P0.05), and the expression of E-ApoE-r- group was slightly lower than that of the E-WT group (P0.05). Conclusion the deficiency of ApoE can aggravate the progression of EAE and aggravate the damage of the integrity of blood-brain barrier, thus promoting the infiltration of inflammatory cells. The mechanism of the damage of blood-brain barrier integrity may be closely related to the increase of MMP-9 expression and the enhancement of its activity. It is suggested that ApoE plays a protective role in maintaining the integrity of blood-brain barrier during the pathogenesis of EAE, which may be another therapeutic target for MS/EAE.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R744.3

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2222966