【摘要】：目的研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞中NOTCH受體是否作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Smad4信號(hào)通路下游靶分子而被TGF-β/Smad4直接調(diào)節(jié)。方法利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western印跡實(shí)驗(yàn)研究TGF-β對(duì)notch1、notch4基因表達(dá)的調(diào)節(jié),利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)研究TGF-β對(duì)notch1、notch4基因啟動(dòng)子活性的調(diào)節(jié),利用染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)研究notch1、notch4基因啟動(dòng)子與SMAD蛋白之間的相互作用。結(jié)果 TGF-β1和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)的刺激在轉(zhuǎn)錄水平上促進(jìn)notch1和notch4表達(dá)。它們還促進(jìn)SMAD4與notch4基因啟動(dòng)子上SMAD結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合。在敲低SMAD4或notch4基因啟動(dòng)子SMAD結(jié)合位點(diǎn)突變的情況下,notch4的表達(dá)失去對(duì)TGF-β1和BMP4的反應(yīng)性。結(jié)論腦血管內(nèi)皮細(xì)胞中SMAD4介導(dǎo)的TGF-β/BMP信號(hào)直接上調(diào)NOTCH受體表達(dá)。
[Abstract]:Aim to investigate whether the NOTCH receptor is directly regulated by TGF- 尾 / Smad4 as a downstream target of TGF- 尾 / Smad4 signaling pathway in endothelial cells. Methods the regulation of notch1notch4 gene expression by TGF- 尾 and the activity of notch1notch4 gene promoter by luciferase reporter gene were studied by real-time quantitative PCR- 尾 Western blotting and luciferase reporter gene assay respectively, and TGF- 尾 was used to study the effect of TGF- 尾 on the activity of notch1nnotch4 gene promoter. The interaction between notch1notch4 gene promoter and SMAD protein was studied by chromatin immunoprecipitation assay. Results TGF- 尾 1 and bone morphogenetic protein 4 (BMP4) stimulated the expression of notch1 and notch4 at the transcriptional level. They also promote the binding of SMAD4 to SMAD binding sites on the promoter of notch4 gene. The expression of notch4 lost its responsiveness to TGF- 尾 1 and BMP4 under the condition of knockout of SMAD binding site mutation of SMAD4 or notch4 promoter. Conclusion SMAD4 mediated TGF- 尾 / BMP signal directly up-regulates the expression of NOTCH receptor in cerebrovascular endothelial cells.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31301203,81370596,91439128)
【分類號(hào)】：R743

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本文編號(hào)：2165774