【摘要】：目的研究內(nèi)皮細胞中NOTCH受體是否作為轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Smad4信號通路下游靶分子而被TGF-β/Smad4直接調(diào)節(jié)。方法利用實時熒光定量PCR、Western印跡實驗研究TGF-β對notch1、notch4基因表達的調(diào)節(jié),利用熒光素酶報告基因?qū)嶒炑芯縏GF-β對notch1、notch4基因啟動子活性的調(diào)節(jié),利用染色質(zhì)免疫共沉淀實驗研究notch1、notch4基因啟動子與SMAD蛋白之間的相互作用。結(jié)果 TGF-β1和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)的刺激在轉(zhuǎn)錄水平上促進notch1和notch4表達。它們還促進SMAD4與notch4基因啟動子上SMAD結(jié)合位點的結(jié)合。在敲低SMAD4或notch4基因啟動子SMAD結(jié)合位點突變的情況下,notch4的表達失去對TGF-β1和BMP4的反應性。結(jié)論腦血管內(nèi)皮細胞中SMAD4介導的TGF-β/BMP信號直接上調(diào)NOTCH受體表達。
[Abstract]:Aim to investigate whether the NOTCH receptor is directly regulated by TGF- 尾 / Smad4 as a downstream target of TGF- 尾 / Smad4 signaling pathway in endothelial cells. Methods the regulation of notch1notch4 gene expression by TGF- 尾 and the activity of notch1notch4 gene promoter by luciferase reporter gene were studied by real-time quantitative PCR- 尾 Western blotting and luciferase reporter gene assay respectively, and TGF- 尾 was used to study the effect of TGF- 尾 on the activity of notch1nnotch4 gene promoter. The interaction between notch1notch4 gene promoter and SMAD protein was studied by chromatin immunoprecipitation assay. Results TGF- 尾 1 and bone morphogenetic protein 4 (BMP4) stimulated the expression of notch1 and notch4 at the transcriptional level. They also promote the binding of SMAD4 to SMAD binding sites on the promoter of notch4 gene. The expression of notch4 lost its responsiveness to TGF- 尾 1 and BMP4 under the condition of knockout of SMAD binding site mutation of SMAD4 or notch4 promoter. Conclusion SMAD4 mediated TGF- 尾 / BMP signal directly up-regulates the expression of NOTCH receptor in cerebrovascular endothelial cells.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31301203,81370596,91439128)
【分類號】：R743

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本文編號：2165774