發(fā)布時間：2018-08-04 09:09

【摘要】：第一部分大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后內(nèi)源性硫化氫的生成及硫化氫對早期腦損傷的保護作用目的:探討蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)大鼠內(nèi)源性硫化氫(Hydrogen sulfide,H2S)主要生成途徑及H2S對SAH后早期腦損傷(Early brain injury,EBI)的影響。方法:雄性SD大鼠96只,按隨機數(shù)字表分為空白組、SAH組、SAH+Na HS低劑量組(SAH+Na HS-L 1.4mg/kg)、SAH+Na HS高劑量組(SAH+Na HS-H 5.6mg/kg),采用視交叉前池注血法制作SAH模型,48 h后處死。測定血漿、大腦皮層H2S含量,免疫組化雙染色分別觀察大腦皮層神經(jīng)元胱硫醚-β-合酶(Cystathionine-β-synthase,CBS)、3-巰基丙酮酸轉(zhuǎn)硫酶(3-merecaptopyruvate sulfurtransferase,MPST or 3-MST)定位,western blot檢測CBS、3-MST表達,測定新鮮腦組織活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)活性,測定腦組織含水量、伊文氏藍(Evans blue,EB)含量,TUNEL評價腦神經(jīng)細胞凋亡,記錄神經(jīng)認知功能評分。結(jié)果:CBS、3-MST在大腦皮層神經(jīng)元均有分布,SAH48h后CBS表達下調(diào),3-MST表達上調(diào),H2S含量下降,氧化應激指標ROS、MDA含量顯著升高,SOD、GSH-Px活性顯著下降,腦組織含水量、伊文氏藍含量顯著升高,Caspase 3蛋白表達顯著上調(diào),腦神經(jīng)細胞凋亡顯著增多,大鼠神經(jīng)認知功能評分顯著下降。高低劑量Na HS預處理可彌補SAH后內(nèi)源性H2S不足,可促使CBS、3-MST表達上調(diào),可使氧化應激指標ROS、MDA含量明顯下降,SOD、GSH-Px活性明顯增強,腦組織含水量、伊文氏藍含量明顯降低,腦神經(jīng)細胞凋亡明顯減少,大鼠神經(jīng)認知功能評分明顯改善,且高劑量效果優(yōu)于低劑量。結(jié)論:CBS/H2S、3-MST/H2S均參與SAH后內(nèi)源性H2S的生成,H2S對SAH后EBI具有保護作用,其作用具有劑量依賴性。第二部分硫化氫對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后急性腦血管痙攣的影響目的:探討硫化氫(H2S)對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后急性腦血管痙攣(a CVS)的影響,并對其可能機制初步探討。方法:48只雄性SD大鼠隨機均分為空白組、SAH組、Na HS低劑量組和高劑量組。造模48h后HE染色法、TUNEL與免疫組化雙染色分別觀察各組大鼠大腦前動脈A2段(ACA A2段)、大腦中動脈M1段(MCA M1段)部血管形態(tài)、管腔面積以及內(nèi)皮細胞凋亡,western blot檢測腦血管組織Caspase 3蛋白表達。結(jié)果:大鼠SAH模型,造模后ACAA2段管腔明顯狹窄,血管內(nèi)皮細胞凋亡明顯增加,凋亡蛋白Caspase 3表達明顯增強;Na HS干預可有效擴張血管、抑制內(nèi)皮細胞凋亡,顯著下調(diào)Caspase 3表達,且高劑量效果優(yōu)于低劑量。結(jié)論:H2S可有效擴張痙攣的腦血管,其保護功能可能是通過抑制腦血管內(nèi)皮細胞凋亡起作用,而且具有劑量依賴性。第三部分硫化氫對氧合血紅蛋白誘導的體外蛛網(wǎng)膜下腔出血模型的影響目的:研究硫化氫(H2S)對體外蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)的影響及其機制的初步探討。方法:氧合血紅蛋白(Oxygenated hemoglobin,Oxy Hb,10μΜ)模擬SAH刺激因素分別作用腦微血管內(nèi)皮細胞(brain microvascular endothelial cells,BMVECs)和神經(jīng)元(Neurons),以Na HS(15μM、30μM)預處理。24h后觀察細胞形態(tài),統(tǒng)計BMVECs、Neurons存活率,測定活性氧ROS含量,收集細胞western blot檢測Caspase 3表達。結(jié)果:Oxy Hb干預后存活神經(jīng)元顯著減少,活性氧(ROS)含量顯著升高,Caspase3表達顯著上調(diào);Na HS干預后存活神經(jīng)元顯著增多,ROS含量顯著下降,Caspase 3表達顯著下調(diào)。Oxy Hb干預后存活腦微血管內(nèi)皮細胞顯著減少,ROS含量顯著升高,Caspase 3表達顯著上調(diào);Na HS干預后存活腦微血管內(nèi)皮細胞顯著增多,ROS含量顯著下降,Caspase 3表達顯著下調(diào)。結(jié)論:在體外H2S通過抑制ROS生成改善SAH后BMVECs、Neurons凋亡。
[Abstract]:Partial hydrogen sulfide production after subarachnoid hemorrhage and the protective effect of hydrogen sulfide on early brain damage in rats after subarachnoid hemorrhage: To explore the main pathway of endogenous hydrogen sulfide (Hydrogen sulfide, H2S) in Subarachnoid hemorrhage (SAH) rats and the early brain injury after SAH (Early brain injury, EBI). Methods: 96 male SD rats were divided into blank group, SAH group, SAH+Na HS low dose group (SAH+Na HS-L 1.4mg/kg) and SAH+Na HS high dose group (SAH+Na HS-H 5.6mg/kg). Cortical neurons cystthiether beta synthase (Cystathionine- beta -synthase, CBS), 3- mercapto pyruvate thiotransferase (3-merecaptopyruvate sulfurtransferase, MPST or 3-MST) localization, Western blot detection CBS, the determination of fresh brain tissue active oxygen, malonic two aldehyde content and superoxide dismutase, glutathione peroxidase H-Px) activity, determination of brain tissue water content, Evans blue (EB) content, TUNEL evaluation of neuronal apoptosis and recording neurocognitive function score. Results: CBS, 3-MST in the cerebral cortex neurons are distributed, SAH48h CBS expression down, 3-MST expression up-regulated, H2S content decreased, oxidative stress index ROS, significant increase The activity of Px decreased significantly, the content of brain water content, the content of Evans blue significantly increased, the expression of Caspase 3 protein was significantly up-regulated, the apoptosis of cerebral nerve cells increased significantly, and the neurocognitive function score of the rats decreased significantly. High and low dose Na HS preconditioning could make up the endogenous H2S deficiency after SAH, which could promote the up regulation of CBS and 3-MST, which could make the oxidative stress index RO The content of S, MDA decreased obviously, the activity of SOD, GSH-Px increased obviously, the water content of brain tissue, the content of Evans blue obviously decreased, the apoptosis of brain nerve cells decreased obviously, the neurocognitive function score of the rat was obviously improved, and the high dose effect was better than the low dose. Conclusion: CBS/H2S, 3-MST/ H2S are all involved in the production of endogenous H2S after SAH, H2S is guaranteed for SAH EBI. The effect of the second part of hydrogen sulfide on acute cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage in rats: To explore the effect of hydrogen sulfide (H2S) on acute cerebral vasospasm (a CVS) after subarachnoid hemorrhage (SAH) in rats and to discuss its possible mechanism. Methods: 48 male SD rats were randomly distributed They were divided into blank group, SAH group, Na HS low dose group and high dose group. HE staining method was used to build model 48h, TUNEL and immunohistochemical double staining were used to observe the A2 segment of the anterior cerebral artery (ACA A2 segment), M1 segment of the middle cerebral artery (MCA M1 segment), the area of the lumen and the apoptosis of endothelial cells, and to detect the 3 protein of the cerebral vascular tissue. Results: SAH model of rats, the ACAA2 segment of the cavity was obviously narrowed, the apoptosis of vascular endothelial cells increased obviously and the expression of apoptotic protein Caspase 3 was obviously enhanced. Na HS intervention could effectively dilate blood vessels, inhibit apoptosis of endothelial cells, reduce the expression of Caspase 3 significantly, and the effect of high dose is better than low dose. Conclusion H2S can effectively dilate spasmodic. Cerebral vascular, its protective function may be mediated by inhibiting apoptosis of cerebral vascular endothelial cells, and is dose-dependent. The effect of the third part of hydrogen sulfide on the model of subarachnoid hemorrhage induced by oxygenated hemoglobin in vitro: the study of the effect of hydrogen sulfide (H2S) on subarachnoid hemorrhage (SAH) in vitro and its mechanism Methods: Oxygenated hemoglobin (Oxy Hb, 10 micron) simulated SAH stimulation factors in the brain microvascular endothelial cells (brain microvascular endothelial cells, BMVECs) and neurons (Neurons). Western blot was collected to detect the expression of Caspase 3. Results: after Oxy Hb intervention, the survival neurons were significantly decreased, the content of active oxygen (ROS) was significantly increased, the expression of Caspase3 was significantly up-regulated, the survival neurons increased significantly after Na HS intervention, the ROS content was significantly decreased, Caspase 3 table significantly downregulated the survival of the microvascular endothelial cells after.Oxy. The content of ROS increased significantly and the expression of Caspase 3 increased significantly. After Na HS intervention, the survival of the cerebral microvascular endothelial cells increased significantly, the content of ROS decreased significantly, and the expression of Caspase 3 decreased significantly. Conclusion: H2S can improve the BMVECs of SAH after SAH and Neurons withering in vitro.
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R743.35

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本文編號：2163337