發(fā)布時(shí)間：2018-07-24 15:33

【摘要】：脊髓性肌萎縮癥(Spinal Muscular Atrophy, SMA)是最常見的致死性神經(jīng)肌肉疾病,由運(yùn)動神經(jīng)元生存基因SMN1(Survival Motor Neuron1)的功能缺失型突變引起,其具體機(jī)制尚不清楚。有研究表明,SMN1影響U snRNP (small nuclear RiboNucleoProtein)的組裝,U snRNP是執(zhí)行RNA剪接的主要分子復(fù)合物,RNA剪接缺陷可能是造成SMA的原因。 目的： 研究SMNl的秀麗隱桿線蟲同源基因smmn-1在RNA剪接中的功能以及smmn-1與識別3’剪接位點(diǎn)的重要剪接因子uaf-1的相互作用。 方法： 1.tos-1是一個(gè)敏感的線蟲內(nèi)源性剪接報(bào)告基因。我們利用RT-PCR檢測了smn-1的無效突變smn-1(ok355△)對tos-1剪接的影響,并通過RNAi減少smmn-1的表達(dá),確認(rèn)tos-1的剪接變化。同時(shí),利用tos-13’剪接位點(diǎn)突變質(zhì)粒注射產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的smn-1(ok355△)線蟲,研究強(qiáng)3’剪接位點(diǎn)的識別是否需要smn-1。 2.smn-1(ok355△)線蟲發(fā)育停滯在幼蟲晚期,壽命縮短,并伴有運(yùn)動缺陷。為了分析smmn-1與uaf-1的相互作用,我們檢測了相關(guān)線蟲的壽命和三個(gè)運(yùn)動指標(biāo),包括bodybends、thrashing和咽部pumping。 3.U snRNA是U snRNP的核心組分,參與RNA剪接的U snRNA有五種,分別為U1、U2、U4、U5和U6snRNA。因此我們利用RT-qPCR檢測了smn-1(ok355A)突變體中U snRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.smn-1(ok355△)突變改變tos-1的剪接,tos-1中弱3’剪接位點(diǎn)的識別需要smn-1,弱3’剪接位點(diǎn)的識別不需要smn-1。 2.uaf-1突變延長smn-1(ok355△)突變體的壽命并改善其運(yùn)動功能。 3.在smn-1(ok355△)突變體中,我們檢測到U1和U5snRNA的表達(dá)下降,U2、U4和U6snRNA的表達(dá)上升。 結(jié)論： 在線蟲中,RNA的正常剪接需要smn-1, smn-1是一個(gè)重要的剪接因子；uaf-1是smn-1的修飾基因,兩者相互作用調(diào)節(jié)線蟲壽命和運(yùn)動功能；smn-1(ok355△)突變影響參與RNA剪接的重要分子UsnRNA的表達(dá)。
[Abstract]:Spinal muscular atrophy (Spinal Muscular Atrophy, SMA) is the most common fatal neuromuscular disease caused by the deletion of motor neuron survival gene (SMN1 (Survival Motor Neuron1). Some studies have shown that the RNA splicing defects of SMMN1, a major molecular complex that performs RNA splicing, may be the cause of SMA. Aim: to study the function of SMNl homologous gene smmn-1 in RNA splicing and the interaction between smmn-1 and uaf-1, an important splicing factor that recognizes 3 'splicing sites. Methods: 1.tos-1 is a sensitive endogenous splicing reporter gene of nematodes. We use RT-PCR to detect the effect of smn-1 (ok355) on tos-1 splicing and confirm the change of tos-1 splicing by reducing the expression of smmn-1 by RNAi. At the same time, the mutant plasmid of tos-13 'splicing site was injected to produce transgenic smn-1 (ok355) nematode. Whether the identification of strong 3'splicing sites required smn-1. 2.smn-1 (ok355) nematode development was stopped in the late larval stage, and the life span of 2.smn-1 (ok355) nematode was shortened. Accompanied by motion defects. In order to analyze the interaction between smmn-1 and uaf-1, we examined the longevity and three movement indexes of nematodes, including body bendsthrashing and pharyngeal pumping.3.U snRNA is the core component of U snRNP. There are five kinds of U snRNA involved in RNA splicing, which are U1U2U2U4U5 and U6snRNA. Therefore, we used RT-qPCR to detect the expression of U snRNA in smn-1 (ok355A) mutants. Results: 1.smn-1 (ok355) mutation required smn-1 to recognize weak 3 'splicing sites in tos-1 splicing tos-1, while smn-1 was not required for weak 3' splicing sites. 2.uaf-1 mutation prolonged the life span of smn-1 (ok355) mutants and improved them. Motor function. In smn-1 (ok355) mutants, we found that the expression of U1 and U5snRNA decreased and the expression of U2U4 and U6snRNA increased. Conclusion: Smn-1 is required for the normal splicing of smn-1 in online worms. Smn-1 is an important splicing factor, which is a modified gene of smn-1. The interaction between them regulates the longevity and motor function of nematodes. Smn-1 (ok355) mutation affects the expression of UsnRNA, an important molecule involved in RNA splicing.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R746.4

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本文編號：2141832