【摘要】：目的:最近研究發(fā)現(xiàn),在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中多梳蛋白家族在表觀遺傳學(xué)水平發(fā)揮著轉(zhuǎn)錄抑制作用并與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),與此同時(shí)一些長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNAs)被發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)膠質(zhì)瘤異常表達(dá)并與腫瘤的分級(jí)和分型相互關(guān)聯(lián)。通過分析惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中長(zhǎng)鏈非編碼RNA表達(dá)變化以及上調(diào)和下調(diào)神經(jīng)系統(tǒng)多梳蛋白1(NSPc1)表達(dá)后候選互作lncRNAs的表達(dá)變化,鑒定在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87中可能與NSPc1存在功能性相互作用的lncRNAs分子。方法:首先,檢測(cè)不同惡性程度的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系H4、U251、U87中NSPc1的表達(dá)差異并實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)候選互作lncRNAs的表達(dá)水平;然后,利用10-6mol/L的維甲酸誘導(dǎo)U87細(xì)胞分化,檢測(cè)NSPc1基因在誘導(dǎo)分化過程中的表達(dá)變化,同時(shí)分析在U87細(xì)胞分化過程中候選lncRNAs的表達(dá)變化;隨即,通過lipo2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染上調(diào)或敲低NSPc1基因的表達(dá),同時(shí)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后U87細(xì)胞中候選lncRNAs的表達(dá)變化。隨后,通過細(xì)胞增殖能力實(shí)驗(yàn)和RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)技術(shù)鑒定篩選出在U87細(xì)胞內(nèi)與NSPc1可能存在功能性相互作用關(guān)系的lncRNAs分子。結(jié)果:1不同神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中,NSPc1表達(dá)量與細(xì)胞系的惡性程度成正相關(guān),各候選互作lncRNAs的表達(dá)水平存在顯著差異。2在惡性度較高的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87的0~10天維甲酸誘導(dǎo)分化過程中,NSPc1的表達(dá)先下降再升高,在第6天達(dá)到最低;各候選lncRNAs的表達(dá)呈逐漸下降趨勢(shì)。3在U87細(xì)胞中上調(diào)或下調(diào)NSPc1的表達(dá)量后,多個(gè)候選互作lncRNAs的表達(dá)發(fā)生顯著變化,其中MALAT1、ANRIL變化尤其明顯。4在U87細(xì)胞中敲低MALAT1、ANRIL后,細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制,細(xì)胞的凋亡比例增加。5 RIP技術(shù)發(fā)現(xiàn)U87細(xì)胞內(nèi)MALAT1、ANRIL等lncRNAs分子與NSPc1蛋白存在相互作用的關(guān)系,并且在細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中NSPc1對(duì)ANRIL的富集量與NSPc1的表達(dá)量呈正相關(guān)。結(jié)論:1 NSPc1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達(dá),并與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性度成正相關(guān)。2 MALAT1、ANRIL能促進(jìn)U87細(xì)胞的增長(zhǎng),抑制細(xì)胞的凋亡。3 NSPc1與MALAT1、ANRIL相互作用,并且ANRIL在U87細(xì)胞分化過程中與NSPc1存在功能性相互作用。
[Abstract]:Objective: recent studies have found that the multicomb protein family plays a transcriptional inhibitory role at the epigenetic level in glioma cells and is closely related to the genesis and development of glioma. At the same time, some long-chain non-coding RNA (lncRNAs) have been found to be abnormal in gliomas and correlated with tumor grading and typing. The changes of long chain noncoding RNA expression in U87 cells induced by malignant glioma and the expression of candidate interacted lncRNAs after up-regulating and down-regulating the expression of multicomb protein 1 (NSPc1) in the nervous system were analyzed. The functional interaction between U87 and NSPc1 was identified. Methods: first, we detected the difference of NSPc1 expression in different malignant glioma cell line H4U251U87 and detected the expression level of candidate interacted lncRNAs by real-time quantitative PCR, and then differentiated U87 cells by 10 ~ (-6) mol / L retinoic acid. The expression of NSPc1 gene in U87 cells was detected, and the expression of candidate lncRNAs was analyzed during the differentiation of U87 cells. Then, the expression of NSPc1 gene was up-regulated or down-regulated by lipo2000 liposome transfection. The expression of candidate lncRNAs in U87 cells was also detected before and after transfection. Subsequently, the functional interaction between NSPc1 and U87 cells was identified by cell proliferation assay and RNA-binding protein immunoprecipitation (RIP) technique. Results the expression of NSPc1 in different glioma cell lines was positively correlated with the malignancy of the cell lines. There was significant difference in the expression level of LNSPcRNAs among the candidates. 2 the expression of NSPc1 decreased at first and then increased during the differentiation of U87 glioma cell line U87 on the 10th day after induction of retinoic acid, and reached the lowest level on the 6th day. After upregulation or down-regulation of NSPc1 expression in U87 cells, the expression of multiple candidate interacted lncRNAs changed significantly, especially after MALAT1 ANRIL was knocked down in U87 cells. The growth of U87 cells was inhibited and the proportion of cell apoptosis increased. 5 RIP technique showed that there was interaction between LNSPcRNAs and NSPc1 protein in U87 cells, such as MALAT1 and ANRIL. The enrichment of ANRIL by NSPc1 was positively correlated with the expression of NSPc1. Conclusion the expression of 1 / 1 NSPc1 in gliomas is positively correlated with the malignancy of gliomas. 2 MALAT1 ANRIL can promote the growth of U87 cells and inhibit the interaction between MALAT1 and MALAT1 ANRIL. And ANRIL has functional interaction with NSPc1 during U87 cell differentiation.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2133530