發(fā)布時間：2018-07-03 14:38

  本文選題：雷帕霉素 + 多發(fā)性硬化�。� 參考：《河北醫(yī)科大學》2016年碩士論文

【摘要】：目的:研究雷帕霉素對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠脾組織中Th17細胞比例及HIF-1α、GLUT1表達水平的影響,初步探討雷帕霉素對EAE小鼠的免疫調節(jié)作用和對Th17細胞分化的影響,以進一步闡明雷帕霉素的可能作用機制,為指導臨床用藥提供基礎實驗依據(jù)。方法:將C57BL/6小鼠隨機分為Rapa組、EAE組和正常對照組,以MOG35-55為抗原免疫建立EAE模型,正常對照組不予免疫。免疫當天記為第0天,自免疫第1天開始給藥,Rapa組小鼠給予雷帕霉素1mg/kg每日腹腔注射;正常對照組及EAE組小鼠每日給予等量生理鹽水腹腔注射。觀察小鼠的發(fā)病情況、體重變化及神經(jīng)功能評分。于免疫后第20天處死小鼠。以HE染色觀察小鼠脊髓組織炎性細胞浸潤情況;流式細胞術檢測小鼠脾組織Th17細胞比例;ELISA檢測小鼠脾細胞培養(yǎng)液上清液中IL-17A表達水平;Real-Time PCR測定小鼠脾組織HIF-1α及GLUT1 mRNA的表達水平。結果:1各組小鼠臨床表現(xiàn):正常對照組小鼠無發(fā)病;Rapa組小鼠與EAE組小鼠相比,其發(fā)病率、體重減輕程度及免疫后第20天的神經(jīng)功能評分均明顯降低(P0.05)。2各組小鼠脾組織中Th17細胞比例比較:免疫后第20天,EAE組Th17細胞比例較正常對照組明顯升高(P0.05),Rapa組Th17細胞比例較EAE組明顯降低(P0.05)。3各組小鼠脾細胞培養(yǎng)液上清液中的IL-17A濃度比較:免疫后第20天,EAE組小鼠脾細胞培養(yǎng)液上清液中的IL-17A濃度較正常對照組明顯升高(P0.05),Rapa組小鼠脾細胞培養(yǎng)液上清液中的IL-17A濃度較EAE組明顯降低(P0.05)。4各組小鼠脊髓組織HE染色光鏡下炎性病灶數(shù)比較:免疫后第20天,EAE組小鼠脊髓組織炎性病灶數(shù)較正常對照組明顯升高(P0.05),Rapa組小鼠脊髓組織炎性病灶數(shù)較EAE組明顯減少(P0.05)。5各組小鼠脾組織中HIF-1α及GLUT1 mRNA含量比較:免疫后第20天,EAE組小鼠脾組織中HIF-1α及GLUT1 mRNA與正常對照組相比表達明顯增多(P0.05),Rapa組小鼠脾組織中HIF-1α及GLUT1 mRNA與EAE組相比表達明顯降低(P0.05)。結論:1雷帕霉素通過抑制Th17細胞生成及相關促炎因子IL-17A分泌而起到對EAE的保護作用。2雷帕霉素對Th17細胞的調節(jié)作用和對EAE的保護作用是通過mTOR/HIF-1α通路起作用的。
[Abstract]:Aim: to study the effects of rapamycin on the percentage of Th17 cells and the expression of HIF-1 偽 -GLUT1 in spleen of (experimental autoimmune encephalomyelitis (experimental autoimmune) mice, and to explore the immunomodulatory effect of rapamycin on the immunomodulation and the differentiation of Th17 cells in the mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. To further elucidate the possible mechanism of rapamycin and provide a basic experimental basis for guiding clinical drug use. Methods: C57BL / 6 mice were randomly divided into Rapa group, EAE group and normal control group. The mice in Rapa group were given rapamycin 1mg/kg daily intraperitoneal injection since the first day of immunization, and normal control group and EAE group were given the same amount of normal saline daily intraperitoneal injection. The incidence, body weight and neurological function of mice were observed. Mice were killed on the 20th day after immunization. The infiltration of inflammatory cells in the spinal cord of mice was observed by HE staining, the expression of IL-17A in the supernatant of mouse splenocytes was detected by flow cytometry, and the expression of HIF-1 偽 and GLUT1 mRNA in spleen tissue was detected by Real-time PCR. Results the clinical manifestations of mice in different groups were as follows: compared with EAE group, the incidence of non-disease-free Rapa mice in normal control group was higher than that in EAE group. The percentage of Th17 cells in spleen tissue of mice was significantly decreased on the 20th day after immunization (P0.05): Th17 cell ratio in the EAE group was significantly higher than that in the control group on the 20th day after immunization (P 0.05) Th17 cells in the Rapa group were significantly higher than those in the control group (P0.05). The percentage of IL-17A in the supernatant of spleen cell culture medium in each group was significantly lower than that in the EAE group (P0.05). The concentration of IL-17A in the supernatant of spleen cell culture medium in EAE group was significantly higher than that in the control group on the 20th day after immunization. (P0.05) the concentration of IL-17A in spleen cell supernatant in Rapa group was significantly higher than that in the control group (P0.05). The concentration of IL-17A in supernatant of cell culture medium was significantly lower than that in EAE group (P0.05). 4 comparison of the number of inflammatory foci in spinal cord tissue under HE staining in each group: the number of inflammatory lesions in spinal cord tissue in EAE group was significantly higher than that in normal control group on the 20th day after immunization. The expression of HIF-1 偽 and GLUT1 mRNA in spleen tissue of mice in Rapa group was significantly lower than that in EAE group (P0.05): the expression of HIF-1 偽 and GLUT1 mRNA in spleen tissue of EAE group was significantly higher than that in normal control group on the 20th day after immunization. The expression of HIF-1 偽 and GLUT1 mRNA in spleen tissue of Rapa group was significantly lower than that in EAE group (P0.05). Conclusion the protective effects of rapamycin on EAE by inhibiting Th17 cell generation and the secretion of IL-17A. 2 the regulatory effect of rapamycin on Th17 cells and the protective effect of rapamycin on EAE may be mediated by the mTOR-HIF-1 偽 pathway.
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R744.5

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