本文選題：膠質瘤 + 膠質母細胞瘤��； 參考：《山東醫(yī)藥》2017年27期

【摘要】：目的構建過表達CUE結構域蛋白2(CUEDC2)的人腦膠質瘤U251細胞系。方法 PCR擴增CUEDC2基因全長序列,將其連接于GV358載體質粒。酶切鑒定GV358-CUEDC后采用慢病毒包裝三質粒系統(tǒng)(GV358-CUEDC2、Helper 1.0、Helper 2.0)轉染293T細胞。轉染48、72 h后收集病毒上清并感染U251細胞。將U251細胞分為空白對照組、過表達CUEDC2組、空載體組。空白對照組不進行感染操作,過表達CUEDC2組、空載體組分別感染GV358-CUEDC和GV-vector。流式篩選后采用實時熒光定量PCR法檢測U251細胞中的CUEDC2 mRNA,采用Western blotting法檢測CUEDC2蛋白。結果 GV358-CUEDC酶切結果顯示在900 bp處有一條明顯條帶,CUEDC2測序結果與Gen Bank數(shù)據(jù)庫比對完全一致。流式篩選感染GV358-CUEDC慢病毒的U251細胞,得到陽性率95%以上的U251細胞。U251細胞在感染GV358-CUEDC2及GV-vector病毒后熒光顯微鏡下均可見綠色熒光�？瞻讓φ战M、空載體組、過表達CUEDC2組U251細胞中CUEDC2 mRNA相對表達量分別為5.290±0.663、0.823±0.059、1,CUEDC2蛋白相對表達量分別為0.48±0.020、0.51±0.015、0.92±0.150,過表達CUEDC2組CUEDC2 mRNA及蛋白相對表達量均高于空載體組和空白對照組(P均0.01)。結論成功構建了過表達CUEDC2的人腦膠質瘤U251細胞系。
[Abstract]:Objective to construct a human glioma U251 cell line overexpressing cue domain protein 2 (CUEDC2). Methods the full-length sequence of CUEDC2 gene was amplified by PCR and ligated into GV358 vector plasmid. GV358-CUEDC was digested and transfected into 293T cells by lentivirus packaging triple plasmid system (GV358-CUEDC2Helper 1.0 Helper 2.0). The virus supernatant was collected and infected with U251 cells for 72 h after transfection. U251 cells were divided into blank control group, overexpression CUEDC2 group and empty vector group. The blank control group was infected with GV358-CUEDC and GV-vectorrespectively. After flow screening, CUEDC2 mRNAs in U251 cells were detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and CUEDC2 protein was detected by Western blotting assay. Results the results of GV358-CUEDC digestion showed that there was an obvious band of CUEDC2 at 900 BP, which was completely consistent with the comparison of GenBank database. U251 cells infected with GV358-CUEDC lentivirus were screened by flow cytometry, and more than 95% of U251 cells. U251 cells showed green fluorescence under fluorescence microscope after GV358-CUEDC2 and GV-vector infection. The relative expression of CUEDC2 mRNA in U251 cells in blank control group, empty vector group and overexpression CUEDC2 group was 5.290 鹵0.663 3 + 0.823 鹵0.059 ~ (-1) and 0.48 鹵0.020 ~ 0.51 鹵0.015 ~ (0.92 鹵0.150), respectively. The relative expression of CUEDC2 mRNA and protein in over-expressed CUEDC2 group was higher than that in empty vector group and blank control group (P0.01). Conclusion A human glioma U251 cell line with overexpression of CUEDC2 was successfully constructed.
【作者單位】： 徐州醫(yī)科大學;
【分類號】：R739.41

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