本文選題：膠質瘤 + 長鏈非編碼　； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2014年博士論文

【摘要】：目的：明確lincRNA-ROR在膠質瘤組織及瘤旁正常腦組織中的表達水平。在此基礎上進一步研究lincRNA-ROR在膠質瘤細胞及膠質瘤干細胞中的生物學功能，探索其在膠質瘤發(fā)生發(fā)展中可能的分子作用機制。 方法： 1. q-PCR法檢測lincRNA-ROR在膠質瘤組織及瘤旁正常腦組織中的表達水平。收集26例膠質瘤患者腫瘤及瘤旁正常腦組織手術標本，運用q-PCR技術檢測lincRNA-ROR在膠質瘤組織及瘤旁腦組織的表達水平。并檢測與lincRNA-ROR相關的兩個基因SOX11及KLF4的表達相關性情況。 2.構建LincRNA-RoR shRNA質粒，將其轉染至膠質瘤細胞系中，q-PCR技術檢測lincRNA-ROR表達情況，下調(diào)lincRNA-RoR的表達后檢測lincRNA-RoR對膠質瘤細胞及膠質瘤干細胞生物學特性的影響。膠質瘤細胞系培養(yǎng)48小時后使用CD133標記腫瘤干細胞，用流式細胞儀檢測CD133+的膠質瘤干細胞數(shù)量；MTS分析法檢測U87細胞增殖情況，連續(xù)3天檢測細胞增殖能力；膠質瘤細胞系培養(yǎng)7天后，干細胞成球實驗檢測下調(diào)lincRNA-RoR后干細胞成球能力。 3.構建lincRNA-RoR真核表達載體，將其轉染至膠質瘤細胞系中，q-PCR技術檢測lincRNA-ROR表達情況。上調(diào)lincRNA-RoR的表達后檢測lincRNA-RoR對膠質瘤細胞及膠質瘤干細胞生物學特性的影響。膠質瘤細胞系培養(yǎng)48小時后使用CD133標記腫瘤干細胞，用流式細胞儀檢測CD133+的膠質瘤干細胞數(shù)量；MTS分析法檢測U87細胞增殖情況，連續(xù)3天檢測細胞增殖能力；膠質瘤細胞系培養(yǎng)7天后，干細胞成球實驗檢測過表達lincRNA-RoR后干細胞成球能力。4.檢測lincRNA-RoR表達下調(diào)及上調(diào)后KLF4的表達情況。 結果： 1. lincRNA-RoR在膠質瘤組織中的表達明顯低于在瘤旁腦組織中的表達。 2. lincRNA-RoR與KLF4mRNA在膠質瘤組織中的表達呈負相關。與SOX11mRNA在膠質瘤組織中的表達呈正相關。 3.成功的構建LincRNA-RoR shRNA質粒，將LincRNA-RoR shRNA質粒穩(wěn)定的轉染到U87膠質瘤細胞。下調(diào)LincRNA-RoR表達后流式細胞儀檢測CD133+的膠質瘤干細胞數(shù)量明顯增加；MTS分析法檢測顯示U87膠質瘤細胞的增殖能力明顯增強，且隨著時間的推移，，增殖程度越加明顯；成球實驗顯示膠質瘤干細胞成球數(shù)量明顯增加。 4.成功的構建了PcDNA-lincRNA-RoR質粒，將PcDNA-lincRNA-RoR質粒穩(wěn)定的轉染到U87膠質瘤細胞。上調(diào)LincRNA-RoR表達后流式細胞儀檢測CD133+的膠質瘤干細胞數(shù)量明顯下降；MTS分析法檢測顯示U87膠質瘤細胞的增殖能力受到抑制，且隨著時間的推移，增殖程度逐漸下降；成球實驗顯示膠質瘤干細胞成球數(shù)量明顯減少。 5.下調(diào)lincRNA-RoR表達后U87膠質瘤細胞KLF4mRNA表達明顯降增高。上調(diào)lincRNA-RoR表達后U87膠質瘤細胞KLF4mRNA表達明顯降下降。 結論：本研究初步證實了重編程相關的基因lincRNA-RoR可能是一個新的膠質瘤抑制基因。在膠質瘤組織及膠質瘤細胞系中的表達降低，在膠質瘤細胞中過表達lincRNA-RoR可以抑制膠質瘤細胞增殖及膠質瘤干細胞自我更新能力；部分的抑制了的KLF4mRNA表達，可能與KLF4相互調(diào)節(jié)而起作用。
[Abstract]:Objective: to clarify the expression level of lincRNA-ROR in glioma and normal brain tissue, and to further study the biological function of lincRNA-ROR in glioma cells and glioma stem cells, and to explore the possible molecular mechanism of the action in the development of glioma.
Method:
1. q-PCR method was used to detect the expression level of lincRNA-ROR in glioma tissue and normal brain tissue adjacent to the tumor. 26 cases of glioma and normal brain tissue around the tumor were collected and the expression level of lincRNA-ROR in glioma tissue and paratatal tissue was detected by q-PCR technique. And two genes related to lincRNA-ROR were detected, SOX11 and KLF 4 of the correlation of expression.
2. LincRNA-RoR shRNA plasmid was constructed and transfected into glioma cell line, q-PCR technique was used to detect the expression of lincRNA-ROR, and the expression of lincRNA-RoR was downregulated to detect the effect of lincRNA-RoR on the biological characteristics of glioma cells and glioma stem cells. After the culture of glioma cell line, the CD133 was used to mark the tumor stem cells with the flow formula. The number of CD133+ glioma stem cells was detected by cytometer, and the proliferation of U87 cells was detected by MTS analysis, and the cell proliferation ability was detected for 3 days. After 7 days of glioma cell line culture, the ball formation test was used to detect the ability of down-regulation of lincRNA-RoR stem cells.
3. construct lincRNA-RoR eukaryotic expression vector, transfect it into glioma cell line and detect the expression of lincRNA-ROR by q-PCR technique. After up regulation of lincRNA-RoR expression, the effects of lincRNA-RoR on the biological characteristics of glioma cells and glioma stem cells were detected. After 48 hours culture of glioma cell line, the use of CD133 to mark tumor stem cells was used. The number of glioma stem cells in CD133+ was detected by flow cytometry; the proliferation of U87 cells was detected by MTS analysis, and cell proliferation was detected for 3 days. After 7 days of culture of glioma cell lines, the expression of lincRNA-RoR expression was detected and the expression of KLF4 after the expression of lincRNA-RoR was detected by.4. of stem cells after the expression of lincRNA-RoR in the stem cell formation test. Condition.
Result:
1. the expression of lincRNA-RoR in glioma tissue was significantly lower than that in tumor adjacent brain tissue.
2. the expression of lincRNA-RoR was negatively correlated with KLF4mRNA expression in glioma tissues, and positively correlated with the expression of SOX11mRNA in glioma tissues.
3. LincRNA-RoR shRNA plasmid was successfully constructed, and LincRNA-RoR shRNA plasmid was transfected into U87 glioma cells steadily. The number of CD133+ glioma stem cells increased significantly after the down-regulation of LincRNA-RoR expression, and MTS analysis showed that the proliferation energy of U87 glioma cells increased significantly and increased with time. The growth of glioma stem cells was significantly increased.
4. successfully constructed the PcDNA-lincRNA-RoR plasmid and transfected the PcDNA-lincRNA-RoR plasmid into U87 glioma cells steadily. After up regulation of LincRNA-RoR expression, the number of glioma stem cells in CD133+ was significantly decreased, and the proliferation ability of U87 glioma cells was inhibited by MTS analysis, and as time went on, The proliferation of glioma stem cells decreased significantly.
5. after downregulation of lincRNA-RoR expression, the expression of KLF4mRNA in U87 glioma cells increased significantly. After upregulated lincRNA-RoR expression, the expression of KLF4mRNA in glioma cells decreased significantly.
Conclusion: This study has preliminarily confirmed that reprogramming related gene lincRNA-RoR may be a new glioma suppressor gene. The expression in glioma and glioma cell lines is reduced. Overexpression of lincRNA-RoR in glioma cells can inhibit the proliferation of glioma cells and the self-renewal capacity of glioma stem cells; The expression of KLF4mRNA may play a role in regulating KLF4.
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

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本文編號：2080969