本文選題：帕金森病 + 組蛋白去乙�；敢种苿�　； 參考：《新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文

【摘要】：背景帕金森病(Parkinson's disease, PD)是第二大常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病,以黑質(zhì)紋狀體多巴胺含量減少,中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元缺失為主要特征。目前,帕金森病的治療主要是維持膽堿能和多巴胺能的平衡,緩解運(yùn)動(dòng)癥狀,尚沒(méi)有治愈的方法。氧化應(yīng)激和凋亡學(xué)說(shuō)是帕金森發(fā)病機(jī)制中最重要的學(xué)說(shuō),有研究表明PD病人的黑質(zhì)總是處于一種高度氧化應(yīng)激狀態(tài)。表觀遺傳機(jī)制組蛋白乙酰化和去乙�；谂两鹕『推渌窠�(jīng)退行性疾病中起著非常重要的作用,組蛋白去乙酰化酶抑制劑(histone deacetylase inhibitor, HDACI)對(duì)神經(jīng)退行性疾病具有一定的保護(hù)作用。金屬硫蛋白(Metallothionein2,MT2)是一種氧化應(yīng)激抵抗因子,組蛋白去乙�；敢种苿┠苌险{(diào)MT2基因表達(dá)。多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(dopamine transporter, DAT)和囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)體(vesicular monoamine transporter, VMAT2)在維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多巴胺等單胺類物質(zhì)平衡中發(fā)揮著十分重要的作用。DAT和VMAT2啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化程度具有很大變異,從2%到90%,并與基因表達(dá)相關(guān),顯示表觀遺傳調(diào)控是DAT和VMAT2表達(dá)調(diào)控的重要機(jī)制。因此,組蛋白去乙�；敢种苿┦欠裢ㄟ^(guò)上調(diào)MT2、DAT和VMAT2的表達(dá)進(jìn)而對(duì)帕金森病產(chǎn)生保護(hù)作用,其表達(dá)變化是否通過(guò)表觀遺傳機(jī)制實(shí)現(xiàn)?這些有待與我們進(jìn)一步研究。 目的探討組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)帕金森病細(xì)胞模型的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制 方法研究對(duì)象：多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組(DMSO)、模型組(0.5μM魚(yú)藤酮、1mM MPP+,24h)丁酸鈉干預(yù)組(1mM、2mM、5mM,48h) 1.采用四甲基偶氮嘩鹽(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞活性,INT顯色檢測(cè)LDH的釋放,DCFH-DA熒光標(biāo)記探針流式檢測(cè)細(xì)胞活性氧代謝物(reactive oxygen species, ROS), PI(propidium iodide)流式檢測(cè)亞二倍體峰(sub G1peak)。 2.采用Real Time PCR的方法檢測(cè)MT2mRNA的表達(dá)。 3.采用重亞硫酸鹽測(cè)序PCR的方法檢測(cè)MT2、DAT和VMAT2基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化變化。 4.采用染色質(zhì)免疫共沉淀的方法檢測(cè)MT2、DAT和VMAT2基因啟動(dòng)子區(qū)域H3ac變化,最后進(jìn)行real time定量PCR分析。 結(jié)果1.HDACI對(duì)魚(yú)藤酮和MPP+致多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞株損傷的影響。 (1)魚(yú)藤酮和MPP+能顯著降低多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞株活性。 (2) HDACI顯著降低多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞株活性氧水平。 (3) HDACI顯著降低魚(yú)藤酮和MPP+誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞株凋亡 2. HDACI上調(diào)MT2mRNA表達(dá)。 3. HDACI降低MT2、DAT、VMAT2基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化率。 4. HDACI增加MT2、DAT、VMAT2基因啟動(dòng)子區(qū)域H3ac水平。 結(jié)論HDACI(丁酸鈉)對(duì)帕?xí)【哂斜Ｗo(hù)作用,是通過(guò)表觀遺傳機(jī)制上調(diào)MT2和單胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:Background Parkinsonian disease (PD) is the second most common neurodegenerative disease characterized by a decrease in dopamine content in the substantia nigra and a loss of dopamine neurons in the substantia nigra. At present, the treatment of Parkinson's disease is mainly to maintain the balance of cholinergic and dopaminergic, alleviate motor symptoms, there is no cure. Oxidative stress and apoptosis are the most important theories in the pathogenesis of Parkinson's disease. Some studies have shown that the substantia nigra of PD patients is always in a state of high oxidative stress. Histone acetylation and deacetylation play an important role in Parkinson's disease and other neurodegenerative diseases. Histone deacetylase inhibitor (histone deacetylase inhibitor, HDACI has a protective effect on neurodegenerative diseases. Metallothionein 2 (MT2) is an oxidative stress resistance factor and histone deacetylase inhibitor can up-regulate the expression of MT2 gene. Dopamine transporter (dopamine transporter, DAT) and vesicular transporter (vesicular monoamine transporter, VMAT2) play a very important role in maintaining the balance of dopamine and other monoamines in the central nervous system. From 2% to 90% and related to gene expression, epigenetic regulation is an important mechanism of DAT and VMAT2 expression regulation. Therefore, does histone deacetylase inhibitor protect Parkinson's disease by upregulating the expression of MT2nDAT and VMAT2, and does its expression change through epigenetic mechanism? These need further study with us. Objective to investigate the protective effect of histone deacetylase inhibitor on Parkinson's disease cell model and its possible mechanism. Methods: dopaminergic nerve cell experimental group: control group (DMSO). The model group (0.5 渭 M rotenone 1 mm MPP 24 h) and sodium butyrate intervention group (1 mm M 2 mm MU 5 mm M + 48 h) 1. (reactive oxygen species, Ros and sub G1peak were detected by MTT colorimetry and sub G1peak, respectively. The expression of MT2 mRNA was detected by Real time PCR. The methylation changes of MT2DATand VMAT2 promoter region were detected by bisulfite sequencing PCR. 4. Chromatin immunoprecipitation was used to detect the H3ac changes in the promoter region of MT2DATand VMAT2 gene. Finally, real time quantitative PCR was used to detect the changes of H3ac in the promoter region of MT2DATand VMAT2 gene. Results 1. The effect of HDACI on the damage of dopaminergic nerve cell lines induced by rotenone and MPP. (1) rotenone and MPP significantly decreased the activity of dopaminergic nerve cell lines. (2) HDACI significantly decreased the activity of dopaminergic nerve cells. (3) HDACI significantly decreased the apoptosis of dopaminergic nerve cell lines induced by rotenone and MPP. HDACI upregulated MT2 mRNA expression. HDACI reduced the methylation rate of MT2 DATVMAT2 promoter region. 4. HDACI increased the level of H3ac in the promoter region of MT2 DATVMAT2 gene. Conclusion HDACI (sodium butyrate) has protective effect on Parsons disease, which is realized by upregulating the expression of MT2 and monoamine transporter by epigenetic mechanism.
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.5

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2058043