本文選題：窖蛋白-1 + 星形膠質(zhì)細胞�。� 參考：《南京大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：胞膜窖(caveolae)是細胞膜表面的微小凹陷區(qū)域,窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是胞膜窖的主要結(jié)構(gòu)蛋白。既往研究報道指出Cav-1參與了缺血性腦卒中后細胞信號傳導的調(diào)節(jié),對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護作用,但是這一保護機制目前仍不清楚。本研究旨在探討Cav-1對體外培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細胞糖氧剝奪(oxygen-glucose deprivation, OGD)損傷的影響極其作用機制。方法：原代培養(yǎng)出生24 h內(nèi)的SD大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞,建立OGD損傷模型,將細胞分為對照組和OGD組,OGD組給予星形膠質(zhì)細胞6h的OGD和24 h的再灌注損傷。用免疫熒光的方法檢測星形膠質(zhì)細胞Cav-1表達,實時熒光定量PCR和Western blot的方法檢測星形膠質(zhì)細胞OGD后24 h Cav-1表達的變化。根據(jù)小干擾RNA (small interference RNA, siRNA)的原理,將Cav-1 siRNA轉(zhuǎn)染入星形膠質(zhì)細胞,抑制Cav-1在星形膠質(zhì)細胞中的表達,或給予外源性窖蛋白-1腳手架區(qū)肽段(caveolin-1 scaffolding domain peptide, C1-SD82-101)增強細胞中Cav-1的表達后,采用細胞計數(shù)試劑盒-8 (cell counting kit-8, CCK-8)的方法檢測OGD損傷前后星形膠質(zhì)細胞的存活率,采用Western blot的方法檢測細胞中細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK1/2)及磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2 (phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2, pERK1/2)的水平。使用MEK抑制劑(U0126)抑制細胞中ERK1/2信號通路后采用CCK-8的方法檢測星形膠質(zhì)細胞存活率。結(jié)果：Cav-1在大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞普遍表達。與對照組相比,OGD組星形膠質(zhì)細胞Cav-1表達量下降(P0.05)。抑制星形膠質(zhì)細胞中Cav-1的表達后,與非OGD組相比,OGD組星形膠質(zhì)細胞存活率下降(P0.05)。給予外源性C1-SD82-101(10uM)增強星形膠質(zhì)細胞內(nèi)Cav-1的表達后,與對照組相比,OGD組星形膠質(zhì)細胞存活率升高(P0.05)。同時我們發(fā)現(xiàn),給予外源性C1-SD82-101組與未給予C1-SD82-101組相比,OGD后細胞存活率升高,并且細胞內(nèi)pERK1/2表達明顯升高,然而給予MEK抑制劑(U0126)后,Cav-1對星形膠質(zhì)細胞的保護作用不再存在。結(jié)論：Cav-1對SD大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞存在保護作用,這一保護作用機制可能與Cav-1參與了OGD后星形膠質(zhì)細胞ERK1/2信號通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。
[Abstract]:Objective: caveolae1 is a small hollow area of cell membrane surface and Cav-1 is the main structural protein of cellar. Previous studies have shown that Cav-1 is involved in the regulation of cellular signal transduction after ischemic stroke and has a protective effect on the central nervous system, but this protective mechanism is still unclear. The aim of this study was to investigate the effects of Cav-1 on oxygen-glucose deprivation (OGDN) injury of cultured rat astrocytes in vitro. Methods: primary cultured cerebral cortex astrocytes of SD rats within 24 hours were cultured and OGD injury models were established. The cells were divided into two groups: control group and OGD group. Astrocytes were given OGD for 6 h and reperfusion injury for 24 h in OGD group. The expression of Cav-1 in astrocytes was detected by immunofluorescence, and the changes of Cav-1 expression in astrocytes at 24 h after OGD were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot. According to the principle of small interfering RNAs, Cav-1 siRNA was transfected into astrocytes to inhibit the expression of Cav-1 in astrocytes, or exogenous cellar protein 1 scaffold region peptide fragment caveolin-1 scaffolding domain peptide, C1-SD82-101) enhanced the expression of Cav-1 in astrocytes. The survival rate of astrocytes before and after OGD-induced injury was detected by cell count kit -8 cell counting kit-8 (CCK-8). The levels of extracellular signal-regulated kinase 1 / 2 (ERK1 / 2) and phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1 / 2 (pERK1 / 2) were detected by Western blot. MEK inhibitor U0126) was used to inhibit ERK1 / 2 signaling pathway and then CCK-8 was used to detect the survival rate of astrocytes. Results: Cav-1 was widely expressed in astrocytes of cerebral cortex of rats. Compared with the control group, the expression of Cav-1 in astrocytes decreased in OGD group. After inhibiting the expression of Cav-1 in astrocytes, the survival rate of astrocytes in OGD group was lower than that in non-OGD group. Exogenous C1-SD82-101UM) enhanced the expression of Cav-1 in astrocytes, and the survival rate of astrocytes in OGD group was higher than that in control group (P 0.05). At the same time, we found that the survival rate and the expression of pERK1 / 2 in exogenous C1-SD82-101 group were higher than those in non-C1-SD82-101 group, but the protective effect of Cav-1 on astrocytes was no longer present after MEK inhibitor (U0126). Conclusion: Cav-1 has protective effect on astrocytes in cerebral cortex of SD rats. This protective mechanism may be related to the regulation of ERK1 / 2 signaling pathway in astrocytes after OGD.
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

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本文編號：1994589