發(fā)布時(shí)間：2018-06-05 19:09

  本文選題：HMGB1 + 腦�。� 參考：《上海交通大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：背景：外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitorcells, EPCs）的數(shù)量與功能和心腦血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后密切相關(guān)。人臍帶血內(nèi)皮祖細(xì)胞移植能夠明顯改善實(shí)驗(yàn)性卒中動物模型的預(yù)后。但腦血管疾病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對缺血性卒中是否有效，以及內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療卒中的作用機(jī)制目前尚未明確。有研究顯示，，腦缺血后膠質(zhì)細(xì)胞高遷率族蛋白1（high mobility group box1, HMGB1）上調(diào)能促進(jìn)內(nèi)源性內(nèi)皮祖細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)血管單元的修復(fù)和重建。HMGB1是否對外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞治療缺血性卒中的作用產(chǎn)生關(guān)鍵影響，目前尚未見報(bào)道。 目的：（1）研究共培養(yǎng)條件下，小膠質(zhì)細(xì)胞HMGB1對內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞因子的表達(dá)及其內(nèi)皮保護(hù)作用的影響；（2）研究腦血管疾病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞治療缺血性卒中模型的作用，以及腦缺血后HMGB1上調(diào)對外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞治療作用的影響，探索內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療缺血性卒中的作用及其機(jī)制。 材料和方法：采用密度梯度離心-貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)外周血晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞。以脂多糖激活小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞。利用transwell體系進(jìn)行內(nèi)皮祖細(xì)胞和BV2細(xì)胞的共培養(yǎng)。采用熒光定量PCR檢測共培養(yǎng)對內(nèi)皮祖細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響。用內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)上清液處理人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞，觀察內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)上清液對人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖及成管作用的影響。用外周血晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療短暫性大腦中動脈栓塞（transient middle cerebral artery occlusion, tMCAO）的小鼠。采用慢病毒GFP標(biāo)記外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞并進(jìn)行示蹤。觀察內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對卒中模型神經(jīng)血管修復(fù)以及神經(jīng)行為學(xué)功能康復(fù)的影響。用甘草酸（glycyrrhizin，GL）抑制卒中后腦內(nèi)的HMGB1表達(dá)上調(diào)，觀察HMGB1對外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞治療作用的影響。 結(jié)果：脂多糖激活的BV2細(xì)胞/內(nèi)皮祖細(xì)胞共培養(yǎng)可上調(diào)內(nèi)皮祖細(xì)胞的白介素-8（IL-8）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、胰島素樣生長因子-1（IGF-1）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）以及成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）表達(dá)（p 0.05）。HMGB1抑制劑甘草酸只能阻斷共培養(yǎng)對內(nèi)皮祖細(xì)胞的白介素-8上調(diào)（p 0.05），而對血管內(nèi)皮生長因子、胰島素樣生長因子-1、造血生長因子及成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)無明顯抑制作用（p0.05）。與脂多糖激活的BV2細(xì)胞共培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細(xì)胞上清液可明顯提高人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞的活力，并促進(jìn)其體外成管能力（p0.05），抑制BV2細(xì)胞HMGB1或采用siRNA下調(diào)內(nèi)皮祖細(xì)胞的白介素-8表達(dá)能夠阻斷內(nèi)皮祖細(xì)胞上清液對人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用。動物實(shí)驗(yàn)顯示，內(nèi)皮祖細(xì)胞移植能夠增加短暫性大腦中動脈栓塞模型術(shù)后14天時(shí)梗死周圍區(qū)的血管密度、減小萎縮體積，并改善神經(jīng)行為學(xué)功能（p0.05），外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞可向缺血梗死周圍區(qū)遷移，但未發(fā)現(xiàn)外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞與梗死周圍區(qū)血管發(fā)生整合。腹腔注射甘草酸（10毫克/公斤/天）可抑制卒中后HMGB1上調(diào)，從而阻斷外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞對短暫性大腦中動脈栓塞的治療作用。 結(jié)論：腦血管疾病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞移植可促進(jìn)缺血性卒中動物的組織修復(fù)，內(nèi)皮祖細(xì)胞的治療機(jī)制可能與內(nèi)皮祖細(xì)胞在缺血局部分泌生長因子功能有關(guān)。卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞增加HMGB1分泌是介導(dǎo)外源性內(nèi)皮祖細(xì)胞發(fā)揮治療作用的重要因素。
[Abstract]:Background: the number and function of peripheral blood endothelial progenitor cells (endothelial ProgenitorCells, EPCs) are closely related to the risk and prognosis of cardiovascular and cerebrovascular diseases. Human umbilical cord blood inner skin progenitor cells transplantation can significantly improve the prognosis of experimental animal models of stroke. Whether stroke is effective, and the mechanism of endothelial progenitor cell transplantation for stroke is not clear. Studies have shown that the up-regulation of the high migration rate of glial cells 1 (high mobility group box1, HMGB1) after cerebral ischemia can promote the repair of endogenous endothelial progenitor cells mediated neurovascular units and the reconstruction of.HMGB1 to the external endothelium. The key role of progenitor cells in the treatment of ischemic stroke has not been reported.
Objective: (1) to study the effect of microglia HMGB1 on the expression of endothelial progenitor cells and the protective effect of endothelial progenitor cells in co culture. (2) the effect of peripheral blood endothelial progenitor cells on ischemic stroke model in patients with cerebrovascular disease and the effect of HMGB1 on the treatment of external endothelial progenitor cells after cerebral ischemia To explore the role and mechanism of endothelial progenitor cell transplantation in the treatment of ischemic stroke.
Materials and methods: the endothelial progenitor cells of peripheral blood were isolated and cultured by density gradient centrifugation and adherent culture. BV2 cells were activated by lipopolysaccharide. The co culture of endothelial progenitor cells and BV2 cells was carried out by Transwell system. The effects of co culture on the expression of cytokines in endothelial progenitor cells were detected by fluorescence quantitative PCR. Endothelial progenitor cells culture supernatant to treat human umbilical vascular endothelial cells, and observe the effect of culture supernatant of endothelial progenitor cells on the proliferation and tube role of human umbilical vascular endothelial cells in vitro. The treatment of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) by peripheral blood endothelial progenitor cells transplantation Mice were labeled with exogenous endothelial progenitor cells using lentivirus GFP. The effect of endothelial progenitor cell transplantation on neurovascular repair and neurobehavioral function rehabilitation in stroke model was observed. The up regulation of HMGB1 expression in the brain after stroke was inhibited with glycyrrhizic acid (glycyrrhizin, GL), and the effect of HMGB1 on the treatment of exogenous endothelial progenitor cells was observed. Ringing.
Results: the co culture of lipopolysaccharide activated BV2 cells / endothelial progenitor cells can increase the interleukin -8 (IL-8) of endothelial progenitor cells, vascular endothelial growth factor (VEGF), insulin-like growth factor -1 (IGF-1), hepatocyte growth factor (HGF) and fibroblast growth factor (FGF) expression (P 0.05).HMGB1 inhibitor Glycyrrhizic acid can only block co culture. The interleukin -8 of endothelial progenitor cells up-regulated (P 0.05), but did not inhibit the expression of vascular endothelial growth factor, insulin-like growth factor -1, hematopoietic growth factor and fibroblast growth factor (P0.05). The endothelial progenitor cells co cultured with lipopolysaccharide activated BV2 cells could significantly improve the survival of human umbilical vascular endothelial cells. Force, and promoting the ability of in vitro tube formation (P0.05), inhibition of BV2 cell HMGB1 or the use of siRNA to reduce the expression of interleukin -8 in endothelial progenitor cells by siRNA can block the effect of endothelial progenitor cell supernatant on human umbilical vascular endothelial cells. Animal experiments showed that endothelial progenitor cell transplantation could increase the 14 day peduncle of transient middle cerebral artery embolization. The density of blood vessels in the surrounding area, reducing the volume of atrophy, and improving the neurobehavioral function (P0.05). Exogenous endothelial progenitor cells can migrate to the surrounding area of the ischemic infarct, but there is no integration of the exogenous endothelial progenitor cells with the vessels around the infarct. The intraperitoneal injection of glycyrrhizin (10 mg / kg / day) can inhibit the up regulation of HMGB1 after stroke and thus hindrance. The effect of exogenous endothelial progenitor cells on transient middle cerebral artery occlusion.
Conclusion: the transplantation of peripheral blood endothelial progenitor cells in patients with cerebrovascular disease can promote the tissue repair of ischemic stroke animals. The therapeutic mechanism of endothelial progenitor cells may be related to the function of endothelial progenitor cells in the partial secreting growth factor of the ischemic apoplexy. The increase of HMGB1 secretion in microglia after stroke is mediated by exogenous endothelial progenitor cells to play a therapeutic role. An important factor.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1983107