本文選題：神經(jīng)干細胞 + 分化　； 參考：《蘭州大學》2017年碩士論文

【摘要】：新生小鼠神經(jīng)干細胞的體外分離培養(yǎng)及誘導分化鑒定目的:建立小鼠神經(jīng)干細胞分離培養(yǎng)體系,并對其分化產(chǎn)物進行鑒定分析。方法:無血清懸浮培養(yǎng)技術對新生C57BL/6小鼠海馬神經(jīng)干細胞進行分離培養(yǎng)及傳代,第三代神經(jīng)干細胞分別行Brd U、Ed U標記,Brd U/Nestin/Hochest33258染色鑒定所培養(yǎng)細胞“干性”,血清促分化培養(yǎng)后,NSE、GFAP熒光染色鑒定神經(jīng)干細胞分化產(chǎn)物。Brdu/Hochest33342及Edu/Hochest33342雙標陽性細胞計數(shù),比較Brd U和Ed U增殖標記效率。結果:新生小鼠海馬源性神經(jīng)干細胞在體外可懸浮生長傳代,巢蛋白染色陽性,血清誘導分化后可以產(chǎn)生特異性烯醇化酶、膠質纖維酸性蛋白陽性細胞。Brd U標記組與Ed U標記組陽性細胞數(shù)相比較,有統(tǒng)計學差異(p0.05)。結論:證實本實驗采用的體外分離培養(yǎng)技術所獲得的神經(jīng)干細胞具有自我更新復制增殖及多潛能分化能力。Ed U標記效率更高,更為靈敏方便。新生小鼠海馬神經(jīng)干細胞的冰凍保存與復蘇目的:觀察不同冰凍保存液冷凍保存不同時間的神經(jīng)干細胞復蘇后,其存活率、增殖能力。方法:采用兩種冰凍保存液進行神經(jīng)干細胞凍存,分別在凍存后1、3、6個月復蘇細胞,臺盼藍染色檢測復蘇后活細胞率,CCK8法檢測復蘇后1-7d神經(jīng)干細胞的增殖能力。結果:同一種冰凍保存液凍存不同時間的細胞復蘇后其活細胞率沒有明顯統(tǒng)計學差異(p0.05),相同凍存時間兩種冰凍保存液凍存的細胞復蘇后其活細胞率均具有統(tǒng)計學差異(p0.05)。CCK-8檢測不同冰凍保存液及不同凍存時間保存的細胞復蘇后其增殖能力,第6天各組之間均具有統(tǒng)計學差異(p0.05)。結論:兩種配方冰凍保存液均可用于神經(jīng)干細胞凍存,但凍存時間越久,細胞增殖能力可能會有所下降。神經(jīng)干細胞移植治療缺血性腦卒中的研究目的:觀察移植NSCs對急性缺血性腦卒中小鼠損傷后的修復作用,并探討其作用機制。方法:光化學誘導方法構建小鼠急性腦缺血模型后進行神經(jīng)干細胞移植。造模前1d,移植后1d、3d、7d、14d、21d、28d、35d進行加速轉棒及前肢抓力測試;免疫熒光染色觀察NSCs分化為神經(jīng)元、星形膠質細胞情況。結果:加速轉棒測試:B、C兩組相比較無統(tǒng)計學差異(p0.05),B、D兩組在移植后1d無明顯統(tǒng)計學差異(p0.05),移植后第3d(▲p0.05),其余各時間點(☆p0.01)。前肢抓力測試發(fā)現(xiàn)各時間點B、C兩組無統(tǒng)計學差異(p0.05),B、D兩組在移植后1d無明顯統(tǒng)計學差異(p0.05),其余各時間點均存在明顯統(tǒng)計學差異(☆p0.01)。免疫熒光染色結果:移植后5d可見Edu/GFAP、Edu/NG-2雙陽性細胞。移植后14d可見Edu/GFAP、Edu/MAP-2雙陽性細胞。移植后28d、35d可見Edu/GFAP、Edu/MAP-2、Edu/Neu N雙陽性細胞。結論:外源性的NSCs移植可在體內存活分化為神經(jīng)元及星形膠質細胞,發(fā)揮神經(jīng)再生及修復作用促進缺血性腦卒中后行為功能恢復。去小膠質細胞協(xié)同神經(jīng)干細胞移植治療缺血性腦卒中目的:觀察比較單純移植NSCs和去小膠質細胞協(xié)同移植神經(jīng)干細胞在缺血性腦卒中的治療效果,并探討其作用機制。方法:A、B兩組都進行外源性神經(jīng)干細胞移植,同時B組在建模后當天開始口服PLX3397,連續(xù)7d,兩組分別于建模前后進行加速轉棒、前肢抓力、自發(fā)活動測試;移植后3d進行Ed U、Nestin,14d進行Ed U、GFAP、MAP-2染色觀察NSCs分化情況。結果:加速轉棒測試:A、B兩組在移植后7d、14d、21d、28d、35d相比較有統(tǒng)計學差異(▲p0.05),前肢抓力測試發(fā)現(xiàn)A、B兩組在移植后14d、21d、28d、35d相比較有統(tǒng)計學差異(▲p0.05;☆p0.01),A、B兩組自發(fā)活動總路程無統(tǒng)計學差異(p0.05)。免疫熒光染色結果顯示在移植后第3天A、B兩組外源性神經(jīng)干細胞均有存活,同時B組存活數(shù)量觀察上優(yōu)于A組。結論:去小膠質協(xié)同神經(jīng)干細胞移植對于外源性的神經(jīng)干細胞存活分化更為有利,其在行為恢復方面也有著更好的效果。
[Abstract]:In vitro isolation, culture and differentiation of neural stem cells from newborn mice and identification of differentiation and differentiation of neural stem cells in mice and identification and analysis of their differentiation products. Methods: serum-free suspension culture was used to isolate and subculture hippocampal neural stem cells of newborn C57BL/6 mice and the third generation of neural stem cells were separated. Brd U, Ed U markers and Brd U/Nestin/Hochest33258 staining were used to identify the "dry" cells of the cultured cells. After serum differentiation and culture, NSE, GFAP fluorescence staining was used to identify the number of.Brdu/Hochest33342 and Edu/Hochest33342 double standard positive cells in the differentiation products of neural stem cells. The stem cells could be suspended in vitro, the nestin staining was positive, and the specific enolase could be produced after the differentiation of the serum. The.Brd U marker group of glial fibrillary acidic protein positive cells was compared with the number of positive cells in the Ed U marker group (P0.05). Conclusion: it is proved that the isolation and culture techniques used in this experiment have been obtained. Neural stem cells have the ability of self renewal, replication, replication, proliferation and pluripotency, the.Ed U marker is more efficient and more sensitive and convenient. The cryopreservation and resuscitation of neural stem cells in the hippocampus of newborn mice: the survival rate and proliferation ability of different frozen preservation solution for different time cryopreservation of neural stem cells. Two frozen preservation solutions were stored for neural stem cells in 1,3,6 months after cryopreservation, trypan blue staining was used to detect the living cell rate after resuscitation, and the proliferation ability of 1-7d neural stem cells after resuscitation was detected by CCK8 method. Results: the living cell rate of the same cryopreservation solution after the cryopreservation was not significantly worse after the cryopreservation. Different (P0.05), the same frozen storage time two frozen storage cells resuscitated the living cells after the resuscitation, the living cell rates were statistically different (P0.05).CCK-8 detection of different frozen preservation solution and the storage time preserved cells after the recovery of their proliferation ability, sixth days of statistical difference between groups (P0.05). Conclusion: two kinds of frozen preservation solution It can be used for cryopreservation of neural stem cells, but the longer the cryopreservation time, the cell proliferation ability may decrease. The purpose of neural stem cell transplantation in the treatment of ischemic stroke: To observe the repair effect of transplanted NSCs on acute ischemic stroke in mice and to explore its mechanism. 1D, 1D, 3D, 7d, 14d, 7d, 14d, 21d, 28d, 35d were used to carry out the acceleration stick and forelimb grasping force test, and the immunofluorescence staining was used to observe the differentiation of NSCs into neurons and astrocytes. Results: there was no statistical difference between the B, C two groups (P0.05). No significant statistical difference (P0.05), post transplant 3D (P0.05), and the rest of the time point (P0.01). The forelimb grasping force test found no statistical difference (P0.05) at all time points B, C two groups, B, D two groups after transplantation, there was no significant statistical difference (P0.05), the rest of the time points were significant statistical differences (P0.01). Immunofluorescence staining results: Migration After transplantation, Edu/GFAP, Edu/NG-2 double positive cells were found. Edu/GFAP, Edu/MAP-2 double positive cells were found in 14d after transplantation. Edu/GFAP, Edu/MAP-2, Edu/Neu N double positive cells were seen in 28d after transplantation. Conclusion: exogenous transplantation can survive in vivo and differentiate into neurons and astrocytes, and play the role of nerve regeneration and repair to promote ischemia in the body. Behavioral function recovery after cerebral apoplexy. The treatment of ischemic stroke with microglia and neural stem cell transplantation for the treatment of ischemic stroke: compare the therapeutic effects of simple transplantation of NSCs and microglia transplantation of neural stem cells in ischemic stroke, and explore its mechanism of action. Methods: A, B two groups are performed exogenous neural stem cells. At the same time, group B began to take orally PLX3397 and continuous 7d on the same day after modeling. The two groups carried out acceleration rods, forelimb grasping force, spontaneous activity test before and after modeling, and 3D carried out Ed U, Nestin, 14d for Ed U, GFAP, MAP-2 staining to observe the differentiation. There were statistical differences (P0.05). The test of forelimb grasping force found that A, B two were compared with 14d, 21d, 28d, and 35d, and there was no statistical difference (P0.05) in the total spontaneous activity of the group of A and B two (P0.05). The results of immunofluorescence staining showed that the two groups of exogenous neural stem cells were alive at third days after transplantation. The survival number is superior to that of the A group. Conclusion: microglia synergistic neural stem cell transplantation is more beneficial to the survival and differentiation of exogenous neural stem cells, and it also has a better effect on the recovery of behavior.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3

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本文編號：1972643