本文選題：強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良1型 + miR-146a�。� 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：目的：基于前期建立的強(qiáng)直性肌營養(yǎng)不良1型(myotonic dystrophy type 1, DM1)患者骨骼肌組織microRNA表達(dá)譜,篩選出差異表達(dá)的microRNA,檢測(cè)其中4個(gè)microRNA (miR-146a、miR-182、miR-200c 和 miR-885)在DM1患者及正常對(duì)照骨骼肌組織中的表達(dá)水平,同時(shí)檢測(cè)與肌肉組織發(fā)育和再生相關(guān)的niR-1、miR-133、 miR-206及種子區(qū)含有CAG重復(fù)序列的miR-103、miR-107勺表達(dá),比較其在DM1患者和對(duì)照骨骼肌組織中的表達(dá)差異,分析差異表達(dá)microRNA與DM1患者基本臨床參數(shù)之間的相關(guān)性。同時(shí)利用生物信息學(xué)方法,預(yù)測(cè)差異表達(dá)microRNA的靶基因,分析靶基因的功能,為DM1發(fā)病機(jī)制中microRNA作用的研究提供新的思路和依據(jù)。方法：1)選取2012年9月至2014年6月在解放軍總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科經(jīng)基因檢測(cè)確診的DM1患者12例,收集并整理DM1患者的臨床資料。通過肌肉活檢獲取肌肉標(biāo)本,酶組織化學(xué)染色進(jìn)行病理診斷;對(duì)照組肌肉標(biāo)本取自12例無神經(jīng)肌肉疾病且年齡和性別大致匹配的骨科手術(shù)患者。2)采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR (real-time polymerase chain reaction)技術(shù)檢測(cè)病例組及對(duì)照組骨骼肌組織中microRNA(miR-146a、miR-182、miR-200c、miR-885、miR-1、miR-133、miR-206、miR-103和miR-107)的相對(duì)表達(dá)水平。3)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：利用SPSS 20.0軟件,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,通過兩獨(dú)立樣本的T檢驗(yàn)方法比較病例組和對(duì)照組microRNA的表達(dá)差異,用方差分析比較microRNA的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的相關(guān)性,取雙側(cè)檢驗(yàn)p0.05作為判斷有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。4)利用生物信息學(xué)軟件TargetScan、 miRanda及PicTar預(yù)測(cè)nicroRNA的靶基因,并與前期篩選出的差異基因取交集,通過GO-analysis對(duì)交集基因進(jìn)行顯著性功能分析,根據(jù)P值進(jìn)行相關(guān)性排序。結(jié)果：1)DM1患者骨骼肌組織中miR-146a的相對(duì)表達(dá)量明顯低于對(duì)照組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.0030.05),其他microRNA的表達(dá)在兩組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。DM1患者骨骼肌組織中niR-146a的表達(dá)水平與性別、病程、MIRS評(píng)分之間無明顯相關(guān)性。2)利用TargetScan、miRanda及PicTar三種軟件預(yù)測(cè)miR-146a靶基因并與前期實(shí)驗(yàn)篩選出的1950個(gè)差異基因比對(duì),對(duì)17個(gè)交集基因做GO-analysis,根據(jù)p值(p0.05)經(jīng)過顯著性篩選,結(jié)果顯示交集基因主要參與神經(jīng)元分化、細(xì)胞凋亡的負(fù)性調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程。結(jié)論：miR-146a在DM1患者骨骼肌組織中低表達(dá),但其差異水平與患者性別、病程和MIRS評(píng)分均無相關(guān)性。通過生物信息學(xué)分析,miR-146a可能通過參與神經(jīng)元分化、細(xì)胞死亡等重要的生物學(xué)過程而在DM1的致病過程中發(fā)揮作用,為DM1發(fā)病機(jī)制中microRNA作用的研究提供新的思路和依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression of microRNA in skeletal muscle of patients with myotonic dystrophy type 1 (DM1). The differentially expressed microRNAs were screened out, and the expression levels of four microRNA miR-146aanmiR-182 miR-200c and miR-885) were detected in skeletal muscle tissues of DM1 patients and normal controls. The expression of niR-1 miR-133 related to muscle tissue development and regeneration, miR-206 and miR-103 miR-103miR-107 in the seed region were detected. To compare the difference of expression of microRNA between DM1 patients and control group, and to analyze the correlation between the differential expression of microRNA and the basic clinical parameters of DM1 patients. At the same time, bioinformatics was used to predict the differential expression of target genes of microRNA, and to analyze the function of target genes, so as to provide a new idea and basis for the study of the role of microRNA in the pathogenesis of DM1. Methods from September 2012 to June 2014, 12 patients with DM1 diagnosed by gene test in Department of Neurology, General Hospital of PLA were selected and collected and sorted out the clinical data of DM1 patients. Muscle specimens were obtained by muscle biopsy and pathological diagnosis was performed by enzyme histochemical staining. Muscle specimens of control group were collected from 12 patients without neuromuscular disease and matched roughly with age and sex.) Real-time PCR real-time polymerase chain reaction) technique was used to detect miR-146amiR-182 miR-200cmiR-885mcmiR-885 and miR-133miR-206 miR-103 and miR-107 in skeletal muscle tissue of patients and control group. Statistical analysis: using SPSS 20.0 software, The data were expressed as mean 鹵standard deviation. The difference of microRNA expression was compared between the two independent samples by T test, and the correlation between the expression of microRNA and clinical parameters was compared by ANOVA. The target genes of nicroRNA were predicted by the bioinformatics software Target Scan. miRanda and PicTar. The target genes were intersected with the differentially selected genes, and the significant sexual function of the intersecting genes was analyzed by GO-analysis. The correlation was sorted according to P value. Results the relative expression of miR-146a was significantly lower in skeletal muscle tissue of patients than that of control group (P < 0.05). There was no significant difference in the expression of other microRNA between the two groups. The expression level and sex of niR-146a in skeletal muscle of patients with DM1 were significantly lower than those of the control group, and there was no significant difference in the expression of other microRNA between the two groups. There was no significant correlation between Mirs scores. 2) Target ScanmiRanda and PicTar were used to predict miR-146a target genes and compared with 1950 differentially selected genes in previous experiments. GO-analysis was performed on 17 intersecting genes according to p value (p < 0.05). The results showed that the intersecting genes were mainly involved in the biological processes such as neuronal differentiation, negative regulation of apoptosis and so on. Conclusion the low expression of miR-146a was found in skeletal muscle of patients with DM1, but there was no correlation between the difference level and gender, course of disease and MIRS score. Through bioinformatics analysis, miR-146a may play a role in the pathogenesis of DM1 by participating in important biological processes such as neuronal differentiation and cell death, which provides a new idea and basis for the study of the role of microRNA in the pathogenesis of DM1.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R746.2

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本文編號(hào)：1962692