發(fā)布時間：2018-05-24 17:49

  本文選題：Wistar大鼠 + C6膠質(zhì)瘤細胞��； 參考：《中國人民解放軍醫(yī)學院》2014年博士論文

【摘要】：第一部分Wistar大鼠C6膠質(zhì)瘤模型的建立 目的：通過立體定位技術建立大鼠C6膠質(zhì)瘤模型。觀察大鼠成瘤后的生長狀態(tài)、生存期、病理變化等。確立大鼠腦膠質(zhì)瘤模型建立的有效方法，提高成瘤率，為進一步的實驗研究提供基礎。 材料和方法：雄性Wistar大鼠135只，體重200-300g，應用大鼠立體定位儀，將大鼠C6膠質(zhì)瘤細胞進行體外培養(yǎng)后接種于鼠腦右側(cè)尾狀核頭，接種細胞量為1-2×106/10μl/只。接種第5天進行磁共振掃描檢測成瘤率。 結(jié)果：接種中意外死亡5只，接種后第1、2天意外死亡8只，98只大鼠磁共振掃描可見腫瘤生長，存活大鼠成瘤率為80.3%。各組大鼠接種后皮毛失去光澤，活動量減少，食物和水的攝入減少，并有腹瀉等癥狀；接種2周后部分大鼠開始出現(xiàn)體重減輕，偏癱，鼻出血、眼周淤血等癥狀；第3周后癥狀明顯加重，開始出現(xiàn)據(jù)食水等現(xiàn)象，接種后第2周末開始發(fā)生死亡，至第60天全部死亡。 結(jié)論：C6膠質(zhì)瘤模型的建立方法基本上比較成熟，成瘤率較高，可以滿足大規(guī)模的實驗研究。為盡可能的提高成瘤率，細胞株選擇和培養(yǎng)是關鍵。原代的膠質(zhì)母細胞瘤細胞，可以較好的保證細胞的抗原性。細胞培養(yǎng)方面，要選用對數(shù)生長期的細胞進行種植，細胞生長活躍，更利于膠質(zhì)瘤模型的建立。動物麻醉掌握好劑量，避免麻醉過量引起動物死亡。接種腫瘤細胞要嚴格無菌操作，避免移植感染。 第二部分替莫唑胺腦靶向藥物組合在大鼠膠質(zhì)瘤模型中的療效評價 目的：制備替莫唑胺(temozolomide，TMZ)腦靶向藥物組合，并通過MRI、生存期觀察和病理學改變初步評價其在大鼠C6膠質(zhì)瘤模型的治療效果。 材料和方法：隨機選取術后第5天經(jīng)MR檢測確認的成瘤大鼠72只，隨機分為6組，1-6分別為：空白組、靜脈注射TMZ組、口服TMZ組和經(jīng)鼻腔腦靶向藥組低、中、高劑量組，每組12只。分別用生理鹽水、TMZ靜脈注射、灌胃以及腦靶向藥物組合低、中、高劑量對大鼠C6膠質(zhì)瘤模型治療后，MR檢查大鼠的腫瘤體積變化，觀察大鼠生存期和病理學的改變。 結(jié)果：Wistar大鼠均得到了清晰的MRI影像。1-6組各組在治療前后的體積增長值分別為66.25±9.18mm3,35.08±4.16mm3,37.17±5.36mm3,11.17±1.28mm3,18.0±2.39mm3，and11.33±2.49mm3，各組間差異有統(tǒng)計學意義，各組TMZ治療均有效（P=0.001），靜脈注射和口服TMZ組未見明顯差異(p=0.861)，各劑量TMZ腦靶向藥物組合無明顯差異(p=0.067)，低劑量TMZ腦靶向藥物組合治療后腫瘤體積增長明顯低于靜脈注射TMZ組（P=0.034）和口服TMZ組（P=0.035），提示腦靶向藥物組合能抑制腫瘤的生長。1-6組的中位生存期分別為21.5d,18.5d,21.5d,37.5d,45.5d,和30.0d，3組腦靶向藥物組合的生存期無統(tǒng)計學差異(P=0.642)，但明顯較其他三組延長(以低劑量組為例，P=0.001, P=0.02, P=0.02)。HE染色證實各組大鼠均接種了膠質(zhì)瘤，TMZ腦靶向藥組較其他各組PCNA表達減少，TUNEL凋亡增加。 結(jié)論：TMZ腦靶向藥物組合能抑制膠質(zhì)瘤腫瘤細胞的生長，延長動物的生存期，或許可以作為治療膠質(zhì)瘤新的有效劑型， TMZ腦靶向藥物組合的研究對于人類腦膠質(zhì)瘤的治療有良好前景。 第三部分定量磁共振動態(tài)增強掃描對替莫唑胺腦靶向藥物組合治療大鼠膠質(zhì)瘤的初步評價 目的：通過大鼠C6腦膠質(zhì)瘤模型經(jīng)TMZ腦靶向藥物組合治療前后對照，探討腦膠質(zhì)瘤磁共振灌注成像的動態(tài)量化研究的可行性及價值。并進一步證實TMZ腦靶向藥物組合的治療效果。 材料和方法：隨機選取10只大鼠建立膠質(zhì)瘤大鼠模型，術后第5天進行磁共振掃描，序列包括T1map和T1動態(tài)增強掃描。發(fā)現(xiàn)一只大鼠未成瘤。結(jié)束后從其余大鼠中隨機選取兩只處死、取腦并固定。術后第6天經(jīng)鼻腔給予TMZ腦靶向藥物組合治療，給藥劑量為4mg/kg/d，連續(xù)5天。術后第11天重復進行磁共振動態(tài)增強掃描后隨機處死治療后的大鼠2只并取腦固定。Image J后處理軟件處理圖像數(shù)據(jù)資料，得到Ktrans偽彩圖和FV偽彩圖，計算腫瘤Ktrans值和Vp值，并進行統(tǒng)計學分析。治療前后各2只大鼠標本進行HE染色和VEGF免疫組化。 結(jié)果：計算出治療前后的ktrans值均數(shù)分別為0.103±0.058/min，0.042±0.031/min。利用配對t檢驗，，證明治療前后ktrans值的差別有統(tǒng)計學意義（P=0.027）。Vp值均數(shù)分別為0.210±0.126/min，0.136±0.058/min，治療前后Vp值的差異無明顯統(tǒng)計學意義（p=0.117）。HE染色顯示治療后細胞密度減低，VEGF染色治療組腫瘤細胞胞漿陽性率小于非治療組。 結(jié)論： TMZ腦靶向藥物抑制腫瘤血管生成，其治療以后ktrans值減小，二者改變相符，說明ktrans值能在一定程度上反應腫瘤血管的通透性，腦膠質(zhì)瘤磁共振灌注成像的動態(tài)量化研究是可行的。病理、免疫組化及ktrans值都進一步證實了TMZ腦靶向藥物治療膠質(zhì)瘤的有效性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41;R-332

【共引文獻】

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本文編號：1929987