本文選題：慢性腦缺血 + FeCl_3��； 參考：《濟(jì)南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的慢性腦缺血(chronic cerebral ischemia,CCI)是指由于各類致病因素引起的長(zhǎng)期腦組織血供受阻(低于40~60ml/100g/min)而引起的疾病,是臨床的常見(jiàn)病、多發(fā)病,在臨床上可見(jiàn)病人持續(xù)性或進(jìn)行性學(xué)習(xí)記憶能力下降,是導(dǎo)致血管性癡呆、Bins wanger病、老年性癡呆等多種臨床常見(jiàn)腦血管病的根本因素。目前隨著社會(huì)老齡化,臨床發(fā)病率逐年增加,CCI已成為醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)課題之一。本研究通過(guò)建立最佳濃度的三氯化鐵CCI模型,研究CCI發(fā)生發(fā)展過(guò)程中大鼠腦組織中AKT信號(hào)通路和LINGO-1及自噬的變化,探討其可能的機(jī)制,并通過(guò)肢體缺血后處理的干預(yù)作用來(lái)觀察對(duì)腦組織的改善作用,旨在完善CCI的病理生理及調(diào)控機(jī)制和治療方法,為CCI的治療尋找新的治療靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程1.CCI動(dòng)物模型的模型按體重均衡原則將120只SPF級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、頸總動(dòng)脈結(jié)扎組、FeCl_3 20%組、35%組、50%組和70%組,每組20只,雌雄各半。結(jié)扎組大鼠采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(permanent occlusion of bilateral common carotid arteries,BCCA)法建立CCI模型,FeCl_3組大鼠采用不同濃度FeCl_3溶液誘導(dǎo)BCCA形成血栓方法建立CCI模型。觀察各組動(dòng)物的死亡率、神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、學(xué)習(xí)記憶能力、血栓重量以及頸總動(dòng)脈和腦組織的病理學(xué)改變,從而篩選出最佳濃度的三氯化鐵CCI動(dòng)物模型。2.肢體缺血后處理對(duì)CCI大鼠腦組織中AKT信號(hào)通路和LINGO-1及自噬的影響按照體重均衡原則將70只SPF級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=10)、模型組(n=30)和治療組(n=30),雌雄各半。采用50%FeCl_3誘導(dǎo)大鼠BCCA形成血栓法建立CCI動(dòng)物模型。模型組大鼠根據(jù)造模后飼養(yǎng)時(shí)間的不同分為1wk、2wk、3wk組,每組10只。治療組根據(jù)造模后肢體缺血后處理時(shí)間的不同分為1wk、2wk、3wk組,每組10只。造模組大鼠每天雙后肢加壓,早晚各一次;假手術(shù)組大鼠建模時(shí)使用0.9%的生理鹽水代替Fe Cl_3溶液。各組大鼠分別通過(guò)Y迷宮測(cè)試評(píng)估學(xué)習(xí)記憶能力;HE染色法觀察各組大鼠腦組織病理改變;免疫組織化學(xué)法(immunohistochemical,IHC)檢測(cè)和Western blotting(WB)腦組織中Akt、p-Akt 308、LINGO-1、LC3-B和Beclin-1的蛋白表達(dá)變化;熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative RCR,RT-qPCR)法檢測(cè)腦組織中AktmRNA、LC3-BmRNA、Beclin-1mRNA和LINGO-1m RNA的表達(dá)。另取70只大鼠(分組、手術(shù)同上)僅用吸有50%Fe Cl_3溶液(假手術(shù)組為生理鹽水)的小濾紙片環(huán)形貼敷左側(cè)頸總動(dòng)脈,右側(cè)頸總動(dòng)脈不做處理。肢體缺血后處理結(jié)束后,用MP100-16導(dǎo)生理信號(hào)采集分析系統(tǒng)檢測(cè)血壓、腦血流量和血管阻力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.不同濃度FeCl_3法建立CCI模型的比較(1)20%、35%和50%FeCl_3組大鼠死亡率(5%,15%,10%)與結(jié)扎組(45%)相比均顯著降低(c2=8.533,P=0.003;c2=4.286,P=0.038;c2=6.144,P=0.013)。(2)結(jié)扎組和FeCl_3組神經(jīng)功能評(píng)分與假手術(shù)組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。(3)不同濃度的FeCl_3對(duì)頸總動(dòng)脈和腦組織的病理和檢查結(jié)果顯示35%和50%FeCl_3均能形成較好的血栓型動(dòng)脈腔狹窄模型,且50%FeCl_3引起大鼠動(dòng)脈腔狹窄程度和腦組織損傷嚴(yán)重于35%FeCl_3。(4)35%FeCl_3組和50%FeCl_3組大鼠Y迷宮正確反應(yīng)次數(shù)與結(jié)扎組相無(wú)顯著差異(P0.05)。(5)20%FeCl_3組大鼠血栓重量較35%FeCl_3組和50%Fe Cl_3組顯著降低(P0.01),50%FeCl_3組和35%FeCl_3組無(wú)顯著差異(P0.05)。綜合上述結(jié)果,選用50%的FeCl_3建立CCI模型。2.FeCl_3法建立CCI模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力、腦血流量和組織病理學(xué)改變及肢體缺血后處理的干預(yù)作用(1)Y迷宮結(jié)果表明,分別與模型1wk、2wk、3wk組相比,治療1wk、2wk、3wk組大鼠學(xué)習(xí)能力均顯著增加(P0.05),且模型組和治療組均表現(xiàn)為增加趨勢(shì)。(2)血流檢測(cè)結(jié)果表明,堵塞一側(cè)頸總動(dòng)脈后,分別與模型1wk、2wk、3wk組相比,治療1wk、2wk、3wk組大鼠腦血流量均顯著增加(P0.05),腦血管阻力均顯著降低(P0.05),且模型組和治療組腦血流量均表現(xiàn)為增加趨勢(shì),腦血管阻力均表現(xiàn)為降低趨勢(shì),但血壓均無(wú)顯著性差異(P0.05)。(3)HE染色結(jié)果顯示,假手術(shù)組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)正常。模型組不同時(shí)相腦組織均有不同程度損傷,且成增加趨勢(shì)。治療組大鼠腦組織損傷明顯改善。3.肢體缺血后處理對(duì)CCI大鼠腦組織中AKT信號(hào)通路和LINGO-1及自噬的影響。(1)WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與假手術(shù)相比較,模型1wk、2wk、3wk組大鼠腦組織中p-Akt 308、LC3-B和Beclin-1蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.05),且逐漸增加;LIONG-1蛋白表達(dá)亦顯著性增加(P0.05)。分別與模型1wk、2wk、3wk組比較,治療1wk、2wk、3wk組大鼠腦組織中p-Akt 308、LC3-B和Beclin-1蛋白表達(dá)量均顯著升高(P0.05);LIONG-1蛋白表達(dá)量均顯著降低(P0.01),且隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低;Akt在各組中無(wú)明顯變化。(2)免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示,p-Akt 308、LC3-B、Beclin-1和LIONG-1在假手術(shù)組大鼠腦組織中幾乎沒(méi)有表達(dá),在模型組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織病變區(qū)域表達(dá)明顯增加;治療組大鼠腦組織中p-Akt 308、LC3-B、Beclin-1表達(dá)增加,LINGO-1表達(dá)減少。(3)RT-qPCR法結(jié)果表明,與假手術(shù)組比較,模型1w、2w、3w組大鼠腦組織中Aktm RNA、LC3-Bm RNA、Beclin-1mRNA和LIONG-1mRNA的表達(dá)均顯著升高(P0.05)。分別與模型1w、2w、3w組比較,治療1w、2w、3w組大鼠腦組織中Akt mRNA、LC3-BmRNA、Beclin-1mRNA的表達(dá)量均顯著增加(P0.01),且逐漸增加;LIONG-1m RNA的表達(dá)量均顯著降低,且隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低。結(jié)論1.FeCl_3法建立CCI動(dòng)物模型與結(jié)扎法效果相同并能提高模型成功率,且制備模型穩(wěn)定可靠其中50%FeCl_3引起大鼠頸總動(dòng)脈腔狹窄和腦組織損傷嚴(yán)重程度最佳,故選用50%FeCl_3建立CCI模型。2.LIP可提高CCI大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。3.LIP可進(jìn)一步提高對(duì)側(cè)頸總動(dòng)脈血流量,減小腦血管阻力。4.LIP可改善CCI所致大鼠腦組織病理學(xué)改變。5.LIP可通過(guò)降低LINGO-1含量、進(jìn)一步激活A(yù)kt信號(hào)通路和自噬來(lái)保護(hù)CCI引起的腦組織損傷。
[Abstract]:Objective : To establish a CCI model of CCI in rats with chronic cerebral ischemia ( CCI ) . The expression of AktmRNA , LC3 - BmRNA , Beclin - 1 , LC3 - B and Beclin - 1 in brain tissue were detected by HE staining . ( 2 ) The results of blood flow examination showed that the cerebral blood flow in the brain tissue of rats treated with sham operation was significantly increased ( P0.05 ) . The results showed that the expression of p - A304 , LC3 - B and Beclin - 1 in brain tissue of rats with sham operation group increased significantly ( P0.05 ) . The results showed that the expression of the mRNA , LC3 - BmRNA , Beclin - 1 mRNA and LIONG - 1 mRNA in the brain tissues of rats with sham - operated group increased significantly ( P0.01 ) . The results showed that the expression of the mRNA , LC3 - Bm RNA , Beclin - 1 mRNA and LIONG - 1 mRNA in brain tissue of rats with 1 w , 2w , 3w group were significantly increased ( P0.01 ) .
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1918562