發(fā)布時間：2018-05-12 07:57

  本文選題：腦卒中 + 調節(jié)性T細胞��； 參考：《復旦大學》2014年博士論文

【摘要】：研究目的：血腦屏障(BBB)破壞是導致缺血性腦卒中嚴重后果的主要因素之一。組織纖溶酶原激活物(tPA)作為唯一被認可的缺血性腦卒中的溶栓治療藥物,在溶栓治療缺血性腦卒中的同時,可以惡化BBB的破壞,進而導致出血轉換(Hemorrhagic transformation,HT)的發(fā)生。因此非常有必要開發(fā)新型的BBB保護藥物,減少缺血再灌注損傷,提高tPA治療的安全性。我們近期的研究表明調節(jié)性T細胞(Tregs)輸注移植可以通過保護BBB從而有效保護缺血性腦卒中后腦組織。本研究旨在進一步探討調節(jié)性T細胞(Tregs)輸注移植是否同樣可以通過有效保護BBB,而減少tPA溶栓治療導致的出血轉換,提高其使用安全性,并進一步探討Tregs對缺血性腦卒中損傷后血腦屏障的保護作用機制。研究方法：缺血性腦卒中模型采用小鼠MCAO缺血2h再灌注模型。tPA(10mg/kg)在MCAO后通過股靜脈緩慢(20分鐘)注入受體鼠體內。從供體小鼠血和脾臟內分離提取Treg細胞,注完tPA后立即將Treg細胞注入受體小鼠股靜脈內。腦出血量用血紅蛋白分光光度計法定量。MCAO術后24小時評價血腦屏障的完整性。腦組織梗死或缺損體積檢測以及神經功能評價持續(xù)至術后21天。為了探究Treg對BBB的保護作用機制,我們在體外實驗中運用transwell細胞培養(yǎng)系統(tǒng)或者細胞直接共培養(yǎng)系統(tǒng)將Treg細胞和中性粒細胞分開或者混合共培養(yǎng)。局灶性缺血性腦卒中模型采用缺血60分鐘小鼠MCAO模型。從供體小鼠(野生型或者PD-L1-/-型)體內分離提取Treg細胞(2x106),在MCAO再灌2h后靜脈注入受體小鼠。術后1天或3天進行MMP-9表達量,BBB完整性以及腦梗死的評價。研究結果：小鼠MCAO模型缺血性腦卒中2小時再灌注后靜脈注入tPA,術后24小時在缺血區(qū)可以看到明顯的出血轉換。Treg細胞輸注移植后可以顯著減少tPA引發(fā)的缺血性腦卒中后出血轉換。進一步研究發(fā)現(xiàn),Treg輸注移植可以減少血漿滲出至腦組織的IgG以及外源性Evens blue的量,另外免疫組織熒光染色結果顯示,Treg輸注移植還有助于保存緊密連接相關蛋白ZO-1和Claudin-7等的完整性,這些結果說明Treg輸注移植可以有效減少tPA溶栓治療誘發(fā)的BBB的破壞。通過明膠酶譜方法和免疫熒光染色發(fā)現(xiàn),Treg通過減少外周血和腦內MMP-9的水平和活性,達到有效抑制BBB破壞的保護作用。同時,Treg輸注移植還可有效減少局灶性缺血性腦卒中tPA溶栓治療后腦組織梗死或缺損體積,并能顯著改善神經功能,持續(xù)至術后21天。體外實驗結果顯示Treg細胞抑制中性粒細胞源性MMP-9的作用必須通過細胞-細胞直接接觸實現(xiàn)。當Tregs經過PD-L1中和抗體預處理或者中性粒細胞經過PD-1中和抗體預處理后,Treg細胞抑制MMP-9的作用消除。體內試驗中,Treg細胞用PD-L1中和抗體預處理,或者取自PD-L1基因敲除小鼠體內的Treg細胞靜脈輸注入MCAO受體小鼠體內1天后,血液中中性粒細胞表達MMP-9沒有得到明顯抑制。另外,在PD-L1功能完整的受體小鼠,Treg細胞保護血腦屏障的作用效果明顯,但是在PD-L1功能缺陷的受體小鼠,Treg細胞保護血腦屏障的作用效果不明顯,PD-L1功能缺陷可消除Treg細胞的腦保護作用,影響MCAO后3天的神經功能改善。研究結論：我們研究結果表明Treg輸注移植能有效減少缺血性腦卒中tPA溶栓再灌治療導致的BBB破壞以及出血轉換。Treg細胞療法很有潛力成為提高tPA溶栓再灌治療安全性的有效輔助策略。此外,我們的研究還發(fā)現(xiàn)PD-L1通過介導Treg細胞對中性粒細胞源性MMP-9的抑制作用,在Treg細胞輸注移植介導的神經保護作用中發(fā)揮至關重要的作用。
[Abstract]:In order to study the protective effect of Treg on ischemic stroke , it is necessary to develop new BBB protective drugs , reduce the damage of blood brain barrier and improve the safety of blood brain barrier .

【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

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