本文選題：腦卒中 + 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞�。� 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：研究目的：血腦屏障(BBB)破壞是導(dǎo)致缺血性腦卒中嚴(yán)重后果的主要因素之一。組織纖溶酶原激活物(tPA)作為唯一被認(rèn)可的缺血性腦卒中的溶栓治療藥物,在溶栓治療缺血性腦卒中的同時(shí),可以惡化BBB的破壞,進(jìn)而導(dǎo)致出血轉(zhuǎn)換(Hemorrhagic transformation,HT)的發(fā)生。因此非常有必要開發(fā)新型的BBB保護(hù)藥物,減少缺血再灌注損傷,提高tPA治療的安全性。我們近期的研究表明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)輸注移植可以通過保護(hù)BBB從而有效保護(hù)缺血性腦卒中后腦組織。本研究旨在進(jìn)一步探討調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)輸注移植是否同樣可以通過有效保護(hù)BBB,而減少tPA溶栓治療導(dǎo)致的出血轉(zhuǎn)換,提高其使用安全性,并進(jìn)一步探討Tregs對(duì)缺血性腦卒中損傷后血腦屏障的保護(hù)作用機(jī)制。研究方法：缺血性腦卒中模型采用小鼠MCAO缺血2h再灌注模型。tPA(10mg/kg)在MCAO后通過股靜脈緩慢(20分鐘)注入受體鼠體內(nèi)。從供體小鼠血和脾臟內(nèi)分離提取Treg細(xì)胞,注完tPA后立即將Treg細(xì)胞注入受體小鼠股靜脈內(nèi)。腦出血量用血紅蛋白分光光度計(jì)法定量。MCAO術(shù)后24小時(shí)評(píng)價(jià)血腦屏障的完整性。腦組織梗死或缺損體積檢測(cè)以及神經(jīng)功能評(píng)價(jià)持續(xù)至術(shù)后21天。為了探究Treg對(duì)BBB的保護(hù)作用機(jī)制,我們?cè)隗w外實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用transwell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)或者細(xì)胞直接共培養(yǎng)系統(tǒng)將Treg細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分開或者混合共培養(yǎng)。局灶性缺血性腦卒中模型采用缺血60分鐘小鼠MCAO模型。從供體小鼠(野生型或者PD-L1-/-型)體內(nèi)分離提取Treg細(xì)胞(2x106),在MCAO再灌2h后靜脈注入受體小鼠。術(shù)后1天或3天進(jìn)行MMP-9表達(dá)量,BBB完整性以及腦梗死的評(píng)價(jià)。研究結(jié)果：小鼠MCAO模型缺血性腦卒中2小時(shí)再灌注后靜脈注入tPA,術(shù)后24小時(shí)在缺血區(qū)可以看到明顯的出血轉(zhuǎn)換。Treg細(xì)胞輸注移植后可以顯著減少tPA引發(fā)的缺血性腦卒中后出血轉(zhuǎn)換。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),Treg輸注移植可以減少血漿滲出至腦組織的IgG以及外源性Evens blue的量,另外免疫組織熒光染色結(jié)果顯示,Treg輸注移植還有助于保存緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1和Claudin-7等的完整性,這些結(jié)果說明Treg輸注移植可以有效減少tPA溶栓治療誘發(fā)的BBB的破壞。通過明膠酶譜方法和免疫熒光染色發(fā)現(xiàn),Treg通過減少外周血和腦內(nèi)MMP-9的水平和活性,達(dá)到有效抑制BBB破壞的保護(hù)作用。同時(shí),Treg輸注移植還可有效減少局灶性缺血性腦卒中tPA溶栓治療后腦組織梗死或缺損體積,并能顯著改善神經(jīng)功能,持續(xù)至術(shù)后21天。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Treg細(xì)胞抑制中性粒細(xì)胞源性MMP-9的作用必須通過細(xì)胞-細(xì)胞直接接觸實(shí)現(xiàn)。當(dāng)Tregs經(jīng)過PD-L1中和抗體預(yù)處理或者中性粒細(xì)胞經(jīng)過PD-1中和抗體預(yù)處理后,Treg細(xì)胞抑制MMP-9的作用消除。體內(nèi)試驗(yàn)中,Treg細(xì)胞用PD-L1中和抗體預(yù)處理,或者取自PD-L1基因敲除小鼠體內(nèi)的Treg細(xì)胞靜脈輸注入MCAO受體小鼠體內(nèi)1天后,血液中中性粒細(xì)胞表達(dá)MMP-9沒有得到明顯抑制。另外,在PD-L1功能完整的受體小鼠,Treg細(xì)胞保護(hù)血腦屏障的作用效果明顯,但是在PD-L1功能缺陷的受體小鼠,Treg細(xì)胞保護(hù)血腦屏障的作用效果不明顯,PD-L1功能缺陷可消除Treg細(xì)胞的腦保護(hù)作用,影響MCAO后3天的神經(jīng)功能改善。研究結(jié)論：我們研究結(jié)果表明Treg輸注移植能有效減少缺血性腦卒中tPA溶栓再灌治療導(dǎo)致的BBB破壞以及出血轉(zhuǎn)換。Treg細(xì)胞療法很有潛力成為提高tPA溶栓再灌治療安全性的有效輔助策略。此外,我們的研究還發(fā)現(xiàn)PD-L1通過介導(dǎo)Treg細(xì)胞對(duì)中性粒細(xì)胞源性MMP-9的抑制作用,在Treg細(xì)胞輸注移植介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)作用中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。
[Abstract]:In order to study the protective effect of Treg on ischemic stroke , it is necessary to develop new BBB protective drugs , reduce the damage of blood brain barrier and improve the safety of blood brain barrier .

【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：1877791