發(fā)布時間：2018-05-09 06:59

  本文選題：朊病毒病 + 朊病毒　； 參考：《中國疾病預防控制中心》2017年博士論文

【摘要】：阮病毒病(prion diseases),是一類侵襲人類及多種動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性腦病,潛伏期長,100%致死率。人類的朊病毒病包括克雅氏病(CJD)、致死性家族性失眠癥(FFI)、庫魯病(Kuru)、吉斯特曼-施特勞斯綜合征(GSS)等。其中克雅氏病分為散發(fā)型克雅氏病(sCJD)、遺傳型克雅氏病(gCJD)、醫(yī)源型克雅氏病(iCJD)、以及變異型克雅氏病(vCJD)。朊病毒病的感染因子是朊病毒,這是一種不含有核酸、具有自我復制能力的感染性蛋白。朊病毒是由體內(nèi)正常表達的具有GP1錨的朊蛋白(PrpC)發(fā)生錯誤折疊,變?yōu)橹虏⌒问诫貌《?PrPSc)。PrPC與PrPSc的氨基酸序列完全相同,只是二級結(jié)構(gòu)不同。目前朊病毒病確診診斷需要在腦組織中發(fā)現(xiàn)PrPSc,但腦組織不容易獲得。我國絕大部分患者是根據(jù)臨床表現(xiàn)、臨床檢測以及實驗室檢測結(jié)果做出臨床克雅氏病診斷。因此需要一種使用其他組織或體液的方法來檢測PrPSc,做出準確診斷。實時震動誘導蛋白擴增(RT-QuIC)方法利用PrPSc能夠誘導PrPC轉(zhuǎn)化的特點,在體外通過不斷的震蕩-孵育循環(huán),使PrPSc大量擴增,并通過硫黃素T(ThT)實時反映PrPSc的量。RT-QuIC方法具有高通量,高速度,靈敏度高,特異型高等特點。有報道RT-QuIC能夠檢測腦脊液中的PrPSc。相比腦組織檢測,更容易被患者接受。因此RT-QuIC方法對克雅氏病的診斷具有十分重要的意義。目前我國還沒有關于RT-QuIC的報道。在本研究中,我們首次建立了基于重組倉鼠PrP23-231片段的RT-QuIC方法,該方法能夠從1μl 10-8稀釋度的倉鼠263K腦勻漿中檢測出PrPSc。同時我們對幾種可能影響RT-QuIC方法的因素進行探索。我們發(fā)現(xiàn) lxPBS,170mM 氯化鈉(NaCl),1OOmM EDTA,10μM ThT,lng SDS,10μg重組蛋白以及10μl的腦脊液體積是更加理想的RT-QuIC條件。應用RT-QuIC方法,我們探索不同朊病毒毒株的反應特點。在毒株準備上,除了實驗室已經(jīng)擁有263K倉鼠毒株,139A、ME7小鼠毒株,以及SMB-S15細胞。我們還試圖制備SMB-S15細胞染毒小鼠毒株。我們使用S15細胞去染毒不同品系(CD1、Balb/C、C57)小鼠,經(jīng)過大約170天左右,所有染毒小鼠均表現(xiàn)出了朊病毒病。通過對腦組織切片檢測,也發(fā)現(xiàn)了典型的神經(jīng)病理學改變。用三種小鼠腦組織繼續(xù)染毒下一代,其潛伏期縮短為150天左右。結(jié)果表明本研究成功獲得了三種S15細胞染毒的小鼠毒株。不同毒株的RT-QuIC反應性不同。首先對于我們的RT-QuIC反應,由于使用了倉鼠重組PrP23-231片段,因此263K倉鼠來源毒株的反應效率是最好的,優(yōu)于小鼠來源和細胞來源;其次,同樣是S15細胞來源的腦組織和細胞勻漿比較,動物腦組織的反應效率要優(yōu)于細胞勻漿。我們使用RT-QuIC方法還對不同朊病毒病患者腦脊液的反應特點進行了探索。首先是散發(fā)型克雅氏病。我們對70例克雅氏病臨床診斷患者,以及48例不支持克雅氏病診斷患者的腦脊液樣本進行了檢測�？搜攀喜∨R床診斷患者顯示出了更高的陽性率(57.14%),同時在更早的時間內(nèi)出現(xiàn)熒光值升高(50小時內(nèi)),更高的最大熒光強度(大于25000 rfu)。與之對比,不支持克雅氏病診斷患者中只有少數(shù)樣本結(jié)果陽性,并且熒光值升高的時間在50小時之后,最大熒光強度在25000 rfu以內(nèi)。在我國最常見的三種遺傳型克雅氏病分別是FFI、T188K突變、以及E200K突變。這三種遺傳型克雅氏病的臨床表現(xiàn)、臨床檢查結(jié)果、實驗室檢查結(jié)果、以及神經(jīng)病理學都有明顯的不同。在本研究中,我們還探索了這三種遺傳型克雅氏病患者腦脊液在RT-QuIC上的反應特性。我們總共檢測了 24例FFI、25例T188K以及16例E200K患者的樣本。其中16.7%的FFI、52%的T188K、以及62.5%的E200K表現(xiàn)出RT-QuIC反應陽性結(jié)果。通過計算陽性結(jié)果的熒光值上升時間和最大熒光強度,我們發(fā)現(xiàn)E200K擁有最早的熒光值上升時間,以及最大的熒光強度,其次為T188K,而FFI樣本則表現(xiàn)出非常低的RT-QuIC反應性。另外統(tǒng)計學分析顯示RT-QuIC的陽性結(jié)果與14-3-3蛋白、腦部核磁以及腦電圖有明顯的相關性。通過本研究,建立了我國第一個RT-QuIC方法。該方法可以應用于不同朊病毒毒株的PrPSc檢測,同時也能夠?qū)Σ煌貌《静』颊吣X脊液中的PrPSc進行檢測。對未來我國克雅氏病的監(jiān)測診斷有重大意義。
[Abstract]:In this study , PrPSc can be detected by RT - Quic method , which is characterized by high flux , high speed , high sensitivity and high specificity . The results showed that the reaction efficiency of three kinds of brain tissue was better than that of mouse source and cell . The results showed that the reaction efficiency of different strains was better than that of mouse source and cell . In this study , we found that E200K has the earliest fluorescence value rise time and the maximum fluorescence intensity , and the maximum fluorescence intensity , followed by T188K , and E200K mutation . In this study , we have found that E200K has the earliest fluorescence value rise time and the maximum fluorescence intensity .

【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R742.9

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 韓陸奇,葉五曲;瘋牛病與人類新型克雅氏病[J];肉類研究;2002年03期

2 張見麟;克雅氏病監(jiān)測的最新進展[J];疾病監(jiān)測;2000年07期

3 楊艷蓉,于志杰,張宏;瘋牛病與人類克雅氏病的研究進展[J];預防醫(yī)學情報雜志;2002年02期

4 張亞光;瘋牛病與克雅氏病[J];河南職工醫(yī)學院學報;2004年01期

5 王國強;尹維民;張微微;;克雅氏病臨床診斷1例[J];解放軍醫(yī)學雜志;2008年03期

6 湯璐瑜;朱愷;;1例高度疑似克雅氏病的消毒與隔離[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2008年08期

7 王亞平;黃維惠;拱忠影;臧大維;;1例以視力障礙起病的克雅氏病[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2008年03期

8 駱文敏;陳新萍;李海紅;;1例克雅氏病病人的終末期護理[J];護理研究;2009年14期

9 楊永杰;;1例克雅氏病患者醫(yī)源性感染預防與控制[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2011年11期

10 朱清蘭;;克雅氏病的護理體會[J];青海醫(yī)藥雜志;2011年06期

相關會議論文 前9條

1 王金玲;林立文;鐘艷霞;;克雅氏病患者的護理方法[A];第十一屆全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編[C];2008年

2 鄭靖;林曉;江姿芳;朱秀蘭;;長生存“克雅氏病”一例報道及護理體會[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2013第十四次全國呼吸病學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

3 石琦;高晨;周偉;張寶云;陳建明;田蟬;姜惠英;韓俊;向妮娟;王曉芳;高永軍;董小平;;2006-2007年中國克雅氏病監(jiān)測情況[A];第二屆全國人畜共患病學術(shù)研討會論文集[C];2008年

4 王愛霞;王曉花;;散發(fā)型克雅氏病的護理[A];河南省外科創(chuàng)傷及災難救治護理�？浦R學術(shù)會議（神經(jīng)科學組）論文集[C];2011年

5 吳玲;方仁秀;;散發(fā)性克雅氏病臨床觀察與護理[A];全國外科、神經(jīng)內(nèi)外科護理學術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2007年

6 左憲華;姜昭;王雪松;;警惕和重視對克雅氏病的識別——附三例可能CJD報告[A];第九次全國神經(jīng)病學學術(shù)大會論文匯編[C];2006年

7 王桂榮;高晨;石琪;周偉;陳建明;董辰方;石崧;王新;韋艷;姜慧英;韓俊;董小平;;中國臨床診斷克雅氏病人腦脊液中tau蛋白濃度診斷價值的研究[A];第二屆全國人畜共患病學術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 俞曉飛;;一例散發(fā)型克雅氏病的臨床演變及磁共振DWI序列早期診斷價值[A];2012中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師分會神經(jīng)病學專家委員會學術(shù)年會論文匯編[C];2012年

9 徐淑菲;孔繁德;;一類傳染病——瘋牛病研究近況[A];福建省畜牧獸醫(yī)學會2009年學術(shù)年會論文集[C];2009年

相關重要報紙文章 前9條

1 毛磊;美國首現(xiàn)新型克雅氏病死亡病例[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 記者 薛嚴;韓首現(xiàn)克雅氏病死亡病例[N];科技日報;2011年

3 ;英克雅氏病患者數(shù)量存疑[N];中國醫(yī)藥報;2004年

4 鄭曉春;英科學家稱新型克雅氏病沒有流行[N];科技日報;2000年

5 記者 鄭曉春;可能再度爆發(fā)新型克雅氏病[N];科技日報;2001年

6 宋有濤 霍雅鵬;直面反自然規(guī)律的“惡果”：瘋牛病[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

7 農(nóng)業(yè)部動物檢疫所 劉雨田 鄒艷麗 侯廣宇;瘋牛病為何引起世人的高度關注[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2005年

8 高文英;食物鏈受污染的真相[N];中華讀書報;2000年

9 李梅 是明啟 黃愛群 徐錚奎;拒絕“瘋牛病”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2001年

相關博士學位論文 前2條

1 肖康;實時震動誘導蛋白擴增方法建立及初步應用[D];中國疾病預防控制中心;2017年

2 石琦;我國克雅氏病監(jiān)測及兩例遺傳型克雅氏病病例特征的研究[D];中國疾病預防控制中心;2010年

相關碩士學位論文 前3條

1 呂園;5例克雅氏病臨床分析并文獻復習[D];山東大學;2013年

2 張曉美;2013年我國克雅氏病監(jiān)測病例特征分析及隨訪合作程度影響因素的研究[D];中國疾病預防控制中心;2014年

3 王吉春;2008-2011年我國朊病毒病病人生存分析及2012年克雅氏病監(jiān)測病例特征研究[D];中國疾病預防控制中心;2013年

，

本文編號：1865037