發(fā)布時(shí)間：2018-05-02 14:34

  本文選題：低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 + 分揀微管連接蛋白��； 參考：《鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年02期

【摘要】：目的:探討低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP4)和分揀微管連接蛋白17(SNX17)在重癥肌無力(MG)患者肌細(xì)胞中相互作用關(guān)系。方法:分別構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET30a-LRP4胞內(nèi)區(qū)和真核表達(dá)載體p EASY-Blunt M2-SNX17,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量約為17 800的His-LRP4胞內(nèi)區(qū),在HEK293T細(xì)胞中誘導(dǎo)表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量約為53 000的Myc-SNX17。利用抗Myc單克隆抗體磁珠與抗His單克隆抗體磁珠進(jìn)行雙向免疫共沉淀(Co-IP),以驗(yàn)證LRP4、SNX17兩種蛋白分子是否存在相互作用。結(jié)果:成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pE T30a-LRP4胞內(nèi)區(qū)和真核表達(dá)載體pE ASY-Blunt M2-SNX17;抗Myc單克隆抗體磁珠與His-LRP4混合后不發(fā)生共沉淀,如再與Myc-SNX17混合則可發(fā)生共沉淀;抗His單克隆抗體磁珠與Myc-SNX17混合后不發(fā)生共沉淀,再與His-LRP4胞內(nèi)區(qū)混合可發(fā)生共沉淀。結(jié)論:原核表達(dá)的LRP4胞內(nèi)區(qū)蛋白與真核表達(dá)的SNX17體外可發(fā)生直接結(jié)合。
[Abstract]:Aim: to investigate the interaction between low density lipoprotein receptor associated protein (LRP4) and sorting microtubule junction protein 17 (SNX17) in myocytes of patients with myasthenia gravis (MG). Methods: prokaryotic expression vector p ET30a-LRP4 intracellular region and eukaryotic expression vector p EASY-Blunt M2-SNX17 were constructed, respectively. The His-LRP4 region with relative molecular weight of 17 800 was induced in Escherichia coli BL21 DE3. Myc-SNX17 was induced to express about 53 000 relative molecular weight in HEK293T cells. Two-way co-immunoprecipitation was carried out by using Myc monoclonal antibody beads and anti- monoclonal antibody magnetic beads in order to verify the existence of interaction between LRP4 and SNX17 protein molecules. Results: the prokaryotic expression vector pE T30a-LRP4 intracellular region and eukaryotic expression vector pE ASY-Blunt M2-SNX17 were successfully constructed, and the anti-Myc monoclonal antibody magnetic beads did not co-precipitate with His-LRP4, but if mixed with Myc-SNX17, coprecipitation occurred. There was no coprecipitation in the mixture of His monoclonal antibody beads and Myc-SNX17, but coprecipitation occurred in the intracellular region of His-LRP4. Conclusion: prokaryotic expression of LRP4 protein and eukaryotic expression of SNX17 can directly bind in vitro.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;鄭州大學(xué)醫(yī)藥科學(xué)研究院神經(jīng)免疫學(xué)研究室;鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系;鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院普胸外科;河南中醫(yī)藥大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院康復(fù)辦公室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目81471545 河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目計(jì)劃16A320010;17A320046 河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目1721023010298 河南省高�？萍紕�(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目16IRTSTHN022
【分類號(hào)】：R746.1

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本文編號(hào)：1834312