本文選題：神經(jīng)母細(xì)胞瘤 + 細(xì)胞增殖��； 參考：《西南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma,NB)來(lái)源于交感神經(jīng)系統(tǒng),是一種常見(jiàn)的小兒顱外實(shí)體外周神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤,占兒童腫瘤發(fā)生率的8%~10%以及兒童癌癥死亡的15%。神經(jīng)母細(xì)胞瘤從良性神經(jīng)元到形成腫瘤的過(guò)程都具有異質(zhì)性,其較強(qiáng)的增殖和轉(zhuǎn)移能力是導(dǎo)致患者死亡的主要因素。神經(jīng)母細(xì)胞瘤的臨床表現(xiàn)各不相同,在晚期的病人中通常會(huì)發(fā)現(xiàn)其對(duì)包括手術(shù)、化療和放療等傳統(tǒng)的治療方法具有很強(qiáng)的抗性。本研究通過(guò)對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖和成瘤的初步探究為神經(jīng)母細(xì)胞瘤治療尋找新靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。約25%~30%的兒童神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者M(jìn)YCN基因有擴(kuò)增,且擴(kuò)增倍數(shù)越高預(yù)后效果越差。研究表明MYCN具有促進(jìn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖生長(zhǎng),抑制分化凋亡,促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移的作用。MINA(MYC induced nuclear antigen)屬于組蛋白去甲基化酶JMJD家族,具有H3K9me3去甲基化功能,在多種腫瘤中均有表達(dá),在細(xì)胞增殖與生長(zhǎng)中具有非常重要的作用。本文首次揭示了MYCN通過(guò)結(jié)合在MINA啟動(dòng)子區(qū)域調(diào)控神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖與成瘤,獲得的主要結(jié)果如下:1、MYCN和MINA在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的預(yù)后關(guān)系通過(guò)對(duì)R2數(shù)據(jù)平臺(tái)神經(jīng)母細(xì)胞瘤公共數(shù)據(jù)庫(kù)Versteeg中的88例神經(jīng)母細(xì)胞瘤臨床患者的統(tǒng)計(jì),利用Kaplan Meier分析,結(jié)果表明MYCN和MINA在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的預(yù)后密切相關(guān),MYCN低表達(dá)患者預(yù)后良好,而MYCN高表達(dá)患者預(yù)后較差,MINA表達(dá)也是如此。通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MYCN和MINA在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:MYCN在神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中普遍表達(dá),在BE(2)-C細(xì)胞中含量最高,在SHEP1細(xì)胞中含量最低,MINA在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況也是如此。2、探究MYCN和MINA對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及克隆形成能力的影響為檢測(cè)MYCN和MINA對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的影響,在MYCN本底高表達(dá)的BE(2)-C細(xì)胞中分別干涉MYCN和MINA,利用MTT和BrdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng),結(jié)果均顯示細(xì)胞增殖能力減弱,成瘤性降低。在干涉MYCN的BE(2)-C細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MINA,通過(guò)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)處理后的細(xì)胞增殖與成瘤情況,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖能力成瘤能力得到一定的恢復(fù)。我們?cè)贛YCN本底低表達(dá)的SHEP1細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MYCN后,利用MTT和BrdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng),結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)MYCN后SHEP1細(xì)胞生長(zhǎng)能力增強(qiáng),以及BrdU標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞增加。為進(jìn)一步探究MYCN和MINA對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的影響,在已過(guò)表達(dá)MYCN的SHEP1細(xì)胞中干涉MINA,結(jié)果顯示MINA干涉后,SHEP1細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制、BrdU標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞減少。利用Western blot實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn):在敲低MYCN的BE(2)-C細(xì)胞中MINA表達(dá)含量也降低,在過(guò)表達(dá)MYCN的SHEP1細(xì)胞中MINA含量升高。3、MYCN和MINA調(diào)節(jié)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖和成瘤的機(jī)制初探通過(guò)染色體免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)MYCN結(jié)合在MINA的啟動(dòng)子區(qū)域,且在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游593~472區(qū)域、1043~839區(qū)域和849~573區(qū)域結(jié)合能力較強(qiáng),因此,初步推測(cè)MYCN通過(guò)MINA調(diào)控神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、以及腫瘤的發(fā)生。
[Abstract]:紲炵粡姣嶇粏鑳?yōu)鐦?neuroblastoma,NB)鏉ユ簮浜庝氦鎰熺緇忕郴緇，

本文編號(hào)：1816036