本文選題：腦室出血 + 腦室損傷��； 參考：《吉林大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的： 觀察IVH后TGF-β1、MMP9及腦內(nèi)鐵代謝的變化，探討其在IVH后腦室損傷及細(xì)胞凋亡中的作用。方法： （1）健康雄性Wistar大鼠84只，隨機(jī)分為：正常組，鹽水對照組術(shù)后1d、3d、7d、28d，腦室注血組術(shù)后1d、3d、7d、28d共9組，130ul自體尾動脈血二次注射法制作大鼠右側(cè)側(cè)腦室出血模型，造模后不同時(shí)間點(diǎn)，大體標(biāo)本、掃描電鏡及HE染色法評價(jià)腦室損傷情況； （2）Wistar大鼠108只，隨機(jī)分為：正常組、鹽水對照組術(shù)后1d、3d、7d、28d，腦室注血組術(shù)后1d、3d、7d、28d共9組，熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測TGF-β1mRNA水平，Western blot法檢測MMP9表達(dá)變化； （3）Wistar大鼠25只，隨機(jī)分為鹽水對照組和腦室注血組術(shù)后1d、3d、7d、28d（n=5）。紅菲繞啉法測定血清及腦組織非血紅素鐵含量； （4）Wistar大鼠162只，隨機(jī)分為正常組、鹽水組術(shù)后1d、3d、7d、28d，腦室注血組術(shù)后1d、3d、7d、28d共9組，熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Western Blot及免疫熒光染色法檢測腦室周圍鐵蛋白（Fn）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1（TfR1）、二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1（DMT1）、鐵調(diào)節(jié)蛋白2（IRP2）、血紅素加氧酶1（HO1）表達(dá)變化；8-OHdG免疫熒光染色及Tunel法檢測細(xì)胞凋亡情況； （5）Wistar大鼠18只，隨機(jī)分為對照組、腦室出血后去鐵胺治療組和鹽水對照組。電鏡下觀察腦室壁結(jié)構(gòu)變化，Tunel法檢測細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果： （1）對照組腦室及其周圍組織無明顯變化，室管膜細(xì)胞排列整齊，組織結(jié)構(gòu)清晰，腦室注血組大鼠術(shù)后1d大體及HE染色見右側(cè)腦室內(nèi)充滿積血，腦室周圍白質(zhì)水腫，室管膜細(xì)胞排列紊亂，松散；術(shù)后3d側(cè)腦室積血減少，室管膜部分?jǐn)嗔�，，可見腦室膜細(xì)胞增生；術(shù)后28d膠質(zhì)細(xì)胞增生及室管膜斷裂均較明顯。電鏡下對照組纖毛致密，排列規(guī)則有序，基膜完整；腦室注血組纖毛紊亂、斷裂，基膜脫落逐漸加重。 （2）術(shù)后1天TGF-β1mRNA水平即明顯上升，顯著高于鹽水組（P0.01），術(shù)后3天TGF-β1mRNA水平較術(shù)后1d明顯下降（P0.001），但仍高于對照組（P0.05），術(shù)后7d TGF-β1mRNA水平再次上調(diào)，形成第二高峰，術(shù)后28dTGF-β1mRNA水平再次下降，但仍高于鹽水對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；術(shù)后1d MMP9蛋白含量即開始上升，與鹽水組比較差異具有顯著性（P0.05），隨術(shù)后時(shí)間延長，MMP9蛋白表達(dá)持續(xù)增加，至術(shù)后28天達(dá)高峰，術(shù)后28天MMP9蛋白含量與鹽水組比較差異顯著（P0.001）。 (3)IVH后血清鐵含量組間比較差異具有顯著性（P0.01），但各組與對照組相比均無差別。IVH術(shù)后1d腦鐵含量即明顯增加，術(shù)后7d表達(dá)量最高，之后持續(xù)高表達(dá)至術(shù)后28d。 (4)Tf mRNA水平隨術(shù)后時(shí)間延長有升高趨勢，術(shù)后1d即顯著高于對照組，術(shù)后3d達(dá)高峰，之后逐漸下降，28d時(shí)明顯低于對照組。Tf術(shù)后1d表達(dá)較對照組增多，3d達(dá)高峰，7d開始下降，至28d表達(dá)量明顯低于對照組（P0.01）。TfR1術(shù)后3d表達(dá)量下降，之后表達(dá)上調(diào)，術(shù)后28d與術(shù)后7d相比無明顯變化但均高于對照組。DMT1mRNA水平術(shù)后第1d明顯低于對照組（P0.01），隨術(shù)后時(shí)間延長繼續(xù)下降，術(shù)后7d表達(dá)量最低，術(shù)后28d較前恢復(fù)，與對照組比較無明顯變化。DMT1術(shù)后1d表達(dá)與對照組比較無明顯變化，之后隨時(shí)間延長表達(dá)量下降，至術(shù)后7d最低，明顯低于對照組，術(shù)后28d基本恢復(fù)正常，與對照組相比無明顯差異。IRP2mRNA水平術(shù)后第1d較對照組下降，之后持續(xù)下降至術(shù)后7d達(dá)到最低水平，術(shù)后28d較前恢復(fù)，但仍明顯低于對照組（P0.001）。IRP2蛋白術(shù)后1d表達(dá)與對照組比較無明顯變化，之后隨時(shí)間延長表達(dá)量下降，術(shù)后3d表達(dá)量最低，術(shù)后28d基本恢復(fù)正常，與對照組相比無明顯變化。術(shù)后1d HO1表達(dá)量較對照組明顯上升，3d略有下降，但與術(shù)后1d相比無顯著性差異；術(shù)后7d表達(dá)較3d明顯下降，術(shù)后28d表達(dá)仍高于正常組。 （5）8-OHdG在對照組陽性率較低，隨術(shù)后時(shí)間延長，陽性率持續(xù)增加，術(shù)后7d與28d相比無明顯差異，均明顯高于正常。海馬及腦室周圍組織Tunel染色變化基本一致，對照組陽性率較低，術(shù)后1d陽性率即較對照組增高，之后陽性表達(dá)持續(xù)增加，至術(shù)后28d陽性率最高。 （6）腦室出血后7d鹽水治療組電鏡下腦室頂璧纖毛變細(xì)、斷裂明顯，基膜脫落，基膜下組織裸露；DFO治療組纖毛斷裂減輕，基膜脫落不明顯；Tunel染色陽性率DFO治療組較鹽水組明顯降低。結(jié)論： （1）IVH后腦室周圍組織病理改變早期以水腫為主，后期增生逐漸明顯； （2）IVH后腦室損傷、擴(kuò)張可能與TGF-β1、MMP9表達(dá)失衡有關(guān)； （3）鐵代謝紊亂在IVH后腦室損傷及細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用； （4）去鐵胺治療能減輕IVH后腦室壁損傷及細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective:
To observe the changes of TGF- beta 1, MMP9 and iron metabolism in the brain after IVH, and to explore its role in ventricular injury and apoptosis after IVH.
(1) 84 healthy male Wistar rats were randomly divided into normal group, saline control group after operation 1D, 3D, 7d, 28d, 1D, 3D, 7d, 28d in the group of cerebral blood injection group 9 groups, 130ul autologous tail artery blood two injection method to make the right lateral ventricle hemorrhage model of rats, general specimen, scanning electron microscope and HE staining method to evaluate the damage of the ventricle ;
(2) 108 Wistar rats were randomly divided into normal group, 1D, 3D, 7d, 28d and 9 groups of 1D, 3D, 7d, 28d after operation in the saline control group, and the fluorescence real-time quantitative PCR method was used to detect TGF- beta 1mRNA level.
(3) 25 Wistar rats were randomly divided into saline control group and cerebral ventricular injection group (1D, 3D, 7d, 28d (n=5)). The content of non heme iron in serum and brain tissue was measured by red phenanthroline.
(4) 162 Wistar rats were randomly divided into normal group, 1D, 3D, 7d, 28d and 9 groups of 1D, 3D, 7d, 28d after operation in the saline group. The fluorescence real-time quantitative PCR, Western Blot and immunofluorescence staining were used to detect the ferritin around the ventricle, transferrin receptor 1, two valence metal ion transporter 1, and iron regulating protein 2. RP2), the expression of heme oxygenase 1 (HO1) was changed, 8-OHdG immunofluorescence staining and Tunel assay were used to detect apoptosis.
(5) 18 Wistar rats were randomly divided into the control group, the iron amine treatment group and the saline control group after the ventricular hemorrhage. The changes of the ventricular wall structure were observed under the electron microscope, and the apoptosis of the cells was detected by the Tunel method.
Result錛

本文編號：1804343