本文選題：Npas4 + 癲癇　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：第一部分Npas4在癲癇模型大鼠腦中的表達(dá)研究 目的：研究Npas4在氯化鋰-匹羅卡品點(diǎn)燃的癲癇模型大鼠腦組織中表達(dá)的時(shí)空變化規(guī)律，探討與癲癇發(fā)作關(guān)系。 方法: 1、選取成年雄性SD大鼠共64只，隨機(jī)分成1個(gè)對(duì)照組（n=8）和7個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M（亞組：6小時(shí)，24小時(shí)，72小時(shí)，7天，14天，30天和60天；各組n=8）腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品構(gòu)建點(diǎn)燃顳葉癲癇動(dòng)物模型。 2、分別用免疫熒光雙標(biāo)，免疫組化及Western blot技術(shù)檢測Npas4在點(diǎn)燃后不同時(shí)間點(diǎn)海馬及皮質(zhì)等腦組織中的表達(dá)的時(shí)間及空間的變化和發(fā)展規(guī)律。 結(jié)果： 1、免疫熒光雙標(biāo)檢測Npas4的表達(dá)部位：點(diǎn)燃后大鼠海馬神經(jīng)元胞核和胞漿中Npas4均有表達(dá)，但在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中不表達(dá)。 2、免疫組化檢測Npas4的表達(dá)水平：免疫組化結(jié)果顯示Npas4主要在神經(jīng)元胞核中表達(dá)，極少部分在神經(jīng)元胞漿表達(dá)。Npas4主要在皮質(zhì)和海馬中表達(dá)，在海馬主要在CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)的神經(jīng)元中表達(dá)。與正常對(duì)照組相比，在模型組中，可以觀察到在點(diǎn)燃后6小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)、7天表達(dá)增高（P0.05），在24小時(shí)達(dá)高峰，在30天和60天時(shí)表達(dá)明顯降低（P0.05）。 3、Western blot檢測Npas4蛋白的表達(dá)規(guī)律：Npas4在急性期顯著增高，從6h時(shí)間點(diǎn)開始增高，在24h達(dá)高峰，從第7天開始降低，與正常組相比，在恢復(fù)期（7d、14d）和慢性期（30d、60d）表達(dá)明顯降低（P0.05）。 結(jié)論：在癲癇模型大鼠腦中Npas4在急性期表達(dá)增加，在恢復(fù)期和慢性期表達(dá)降低，這些變化提示Npas4可能參與了癲癇的發(fā)生和發(fā)展過程。 第二部分Npas4在癲癇模型大鼠癇性發(fā)作中的機(jī)制 目的：通過siRNA干擾技術(shù)特異性抑制Npas4表達(dá)后，探討降低Npas4表達(dá)對(duì)大鼠癲癇發(fā)作的影響。 方法：選擇雄性的健康成年的SD大鼠32只，隨機(jī)分成4個(gè)組（n=8），分別為正常對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組、空載體組、siRNA干擾組。除正常對(duì)照組外，其它三組利用海馬立體定位儀對(duì)大鼠海馬區(qū)域注射相應(yīng)藥物，注藥7天后腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品觀察各組大鼠的點(diǎn)燃率、潛伏期、發(fā)作頻率、持續(xù)時(shí)間等改變。 結(jié)果： 1.大鼠癲癇發(fā)作潛伏期觀察:各組大鼠腹腔注射匹羅卡品（40mg/kg）后觀察行為學(xué)結(jié)果顯示，各組發(fā)作潛伏期：正常組（26.40±6.10）min、鹽水組（26.50±4.89）min、空載體組（28.80±3.96）min和siRNA干擾組(15.71±3.86)min，siRNA干擾組平均發(fā)作潛伏期較三個(gè)對(duì)照組縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），三個(gè)對(duì)照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.大鼠癇性發(fā)作頻率統(tǒng)計(jì)：通過統(tǒng)計(jì)各組大鼠注射匹羅卡品后2小時(shí)內(nèi)的發(fā)作頻率結(jié)果顯示：各組大鼠Racine評(píng)分4級(jí)及以上的癇性發(fā)作次數(shù)秩均值分別為：正常組9.30次，生理鹽水組8.75次，空載體組10.40次，siRNA干擾組17.86次。Npas4干預(yù)組發(fā)作次數(shù)明顯增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 3.大鼠癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間觀察：統(tǒng)計(jì)大鼠Racine評(píng)分4級(jí)及以上發(fā)作持續(xù)時(shí)間，各組的平均持續(xù)時(shí)間如下：正常組（11.67±4.13）min，生理鹽水組（10.40±3.85）min，空載體組（10.40±4.88）min，siRNA干擾組（19.86±7.43）min。前三組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），siRNA干擾組發(fā)作持續(xù)時(shí)間較前三組延長，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 4.大鼠癇性發(fā)作的點(diǎn)燃率統(tǒng)計(jì)：觀察四組大鼠注射匹羅卡品2小時(shí)后的發(fā)作率分別為：正常組62.5%，生理鹽水組75%，，空載體組62.5%，siRNA干擾組87.5%。siRNA干擾組發(fā)作率較前三組增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 5.siRNA干預(yù)后Npas4蛋白表達(dá): siRNA干預(yù)后7天WB結(jié)果顯示siRNA干擾組中Npas4蛋白表達(dá)量較正常組、生理鹽水組、空載體組明顯降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論：siRNA特異性抑制Npas4表達(dá)后，匹羅卡品誘發(fā)的大鼠癇性發(fā)作的潛伏期減短，發(fā)作頻率、持續(xù)時(shí)間、點(diǎn)燃率均增高。Npas4在癲癇發(fā)病中可能起抑制作用。
[Abstract]:The first part is the expression of Npas4 in the brain of epileptic rats.
Objective: To study the spatiotemporal variation of Npas4 expression in the brain tissue of epileptic rats kindled by lithium pilocarpine, and to explore the relationship between seizure and seizure.
Method:
1, 64 adult male SD rats were randomly divided into 1 control groups (n=8) and 7 experimental model groups (subgroup: 6 hours, 24 hours, 72 hours, 7 days, 14 days, 30 days and 60 days; each group n=8) was intraperitoneally injected with lithium pilocarpine to build the kindling temporal lobe epilepsy animal model.
2, the time and space of the expression of Npas4 in the hippocampus and cortex in different time points after kindling were detected by double immunofluorescence, immunohistochemistry and Western blot, respectively.
Result錛

本文編號(hào)：1782366