本文選題：單壁碳納米角 + 膠質(zhì)瘤細(xì)胞�。� 參考：《中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文

【摘要】：目的：研究單壁碳納米角(SWNHs)是通過(guò)何種途徑來(lái)對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖過(guò)程進(jìn)行抑制,并誘導(dǎo)其凋亡過(guò)程。方法：1.利用鋪有不同濃度SWNHs的6孔板或培養(yǎng)皿接種人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞,培養(yǎng)一定時(shí)間后,通過(guò)普通電子倒置顯微鏡和共聚焦激光顯微鏡來(lái)對(duì)細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)目進(jìn)行觀察。2. BrdU檢測(cè)SWNHs對(duì)細(xì)胞增殖和有絲分裂的影響；SWNHs對(duì)U251細(xì)胞增殖和活力的影響分別用XTT法和CCK8法來(lái)定量地評(píng)價(jià)。3. SWNHs對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)；Western Blot法分析SWNHs材料導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白.4.使用Seahorse XF24分析儀測(cè)量不同濃度SWNHS對(duì)U251細(xì)胞氧氣消耗量的影響,采用生物發(fā)光法進(jìn)行ATP生產(chǎn)分析,及通過(guò)發(fā)光法檢測(cè)不同濃度SWNHS培養(yǎng)后的U251細(xì)胞的產(chǎn)生NAD的影響,全面評(píng)估SWNHS對(duì)U251細(xì)胞的線粒體功能影響。結(jié)果：1.人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞分別和具有濃度梯度的SWNHs材料共同培后,在設(shè)定的時(shí)間用倒置顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察,結(jié)果提示隨著SWNHs濃度的增加,U251細(xì)胞數(shù)量呈逐漸減少,細(xì)胞不能完全正常貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞變圓固縮,甚至有些細(xì)胞死亡后漂浮在培養(yǎng)液中；共聚焦激光顯微鏡觀察結(jié)果示U251細(xì)胞的核發(fā)生固縮,且生成大量的核小體碎片。2.根據(jù)XTT法和CCK8法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,證明了SWNHs抑制U251細(xì)胞增殖存在時(shí)間和劑量依賴(lài)關(guān)系。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)提示SWNHs顯著誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡,并且凋亡相關(guān)蛋白Bad、 Bax的濃度與SWNHS的濃度呈正相關(guān),而凋亡抑制蛋白Bcl-2隨著SWNHS的濃度增加而減少,呈負(fù)相關(guān)。4. SWNHS影響U251細(xì)胞的線粒體功能：細(xì)胞氧消耗量、ATP產(chǎn)生和NAD的功能都以劑量依賴(lài)的方式受到阻礙。結(jié)論：SWNHs抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖,并促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡,同時(shí)存在劑量依賴(lài)關(guān)系。其具體機(jī)制可能通過(guò)Bcl-2信號(hào)系統(tǒng),引起了U251細(xì)胞線粒體功能的障礙。
[Abstract]:Aim: to investigate how SWNHs can inhibit the proliferation and induce apoptosis of human glioma cells.Method 1: 1.Human glioma cell line U251 cells were inoculated with 6-well plate or culture dish with different concentrations of SWNHs for a certain time. The morphology and number of U251 cells were observed by conventional electron inverted microscope and confocal laser microscope.The effects of BrdU on cell proliferation and mitosis were evaluated quantitatively by XTT and CCK8.The effect of SWNHs on apoptosis and cell cycle of glioma cells was evaluated by flow cytometry. Western Blot assay was used to analyze apoptosis-related protein .4.The effects of different concentrations of SWNHS on the oxygen consumption of U251 cells were measured by Seahorse XF24 analyzer. The production of ATP was analyzed by bioluminescence assay, and the effect of NAD production on U251 cells cultured with different concentrations of SWNHS was detected by luminescence assay.To evaluate the effects of SWNHS on mitochondrial function of U251 cells.The result is 1: 1.Human glioma U251 cells were cultured with SWNHs material with concentration gradient, and the cells were observed by inverted microscope at a fixed time. The results showed that the number of U251 cells decreased gradually with the increase of SWNHs concentration.The cells could not completely adhere to the wall, the cells became round and pyknotic, and some cells died and floated in the culture medium. Confocal laser microscopy showed that the nuclei of U251 cells had pyknosis and produced a large number of nucleosome fragments. 2.According to the experimental results of XTT and CCK8 methods, it was proved that SWNHs inhibited the proliferation of U251 cells in a time-and dose-dependent manner.Flow cytometry showed that SWNHs significantly induced apoptosis of U251 cells, and the concentration of apoptosis-related protein Badand Bax was positively correlated with the concentration of SWNHS, while the inhibitor of apoptosis protein Bcl-2 decreased with the increase of SWNHS concentration, which was negatively correlated with the concentration of SWNHS.SWNHS affects the mitochondrial function of U251 cells. The production of ATP and the function of NAD in U251 cells are obstructed in a dose-dependent manner.Conclusion the growth and proliferation of human glioma cells were inhibited and the apoptosis of glioma cells was promoted by WSWNHs in a dose-dependent manner.The mechanism may cause dysfunction of mitochondria function in U251 cells through Bcl-2 signaling system.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1762881