本文選題：程序性壞死 + 受體相互作用蛋白　； 參考：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：[背景]細(xì)胞死亡涉及到生命的多個(gè)環(huán)節(jié),正面作用有：胚胎的發(fā)育,機(jī)體細(xì)胞的“新陳代謝”,反面左右有：炎癥、腫瘤等。既往認(rèn)為細(xì)胞死亡中除細(xì)胞凋亡是基因預(yù)存的主動(dòng)死亡模式,是由細(xì)胞產(chǎn)生各種信號(hào)分子伴隨能量消耗最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡之外,其他的細(xì)胞死亡都是被動(dòng)的不可逆的細(xì)胞死亡。2005年Degterev等提出一種新的細(xì)胞死亡方式：細(xì)胞程序性壞死。細(xì)胞的這種死亡方式具有壞死樣結(jié)構(gòu)特點(diǎn),細(xì)胞膜完整性破壞,周圍組織炎癥反應(yīng),同時(shí)該過程受細(xì)胞內(nèi)一系列信號(hào)分子調(diào)控。腦缺血所致腦損傷是我國神經(jīng)科致死、致殘的主要病因之一。如果能通過深入探索程序性壞死信號(hào)通路的生物化學(xué)機(jī)制,更進(jìn)一步研究程序性壞死信號(hào)通路在相關(guān)疾病中的參與程度與作用,不但利于對(duì)該信號(hào)通路的認(rèn)知,且對(duì)神經(jīng)內(nèi)外科相關(guān)神經(jīng)缺血再灌注損傷相關(guān)疾病的治療藥物、治療靶向、治療方法起到拓寬、確立的重要作用。[目的]本實(shí)驗(yàn)研究體外培養(yǎng)神經(jīng)元細(xì)胞在缺血再灌注損傷后RIP3的變化規(guī)律。本實(shí)驗(yàn)受臨床上腦梗死后出現(xiàn)缺血半暗帶啟發(fā),研究并探討程序性壞死在半暗帶區(qū)和梗死區(qū)的分布,進(jìn)一步揭示程序性壞死在腦缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制。[方法]原代神經(jīng)元培養(yǎng),神經(jīng)元細(xì)胞熒光鑒定,RIP3熒光鑒定,傳代細(xì)胞HT22細(xì)胞培養(yǎng)及凍存,細(xì)胞造缺氧模型,動(dòng)物造缺氧再灌注模型,PCR技術(shù),WesternB1otting技術(shù),MTT技術(shù),鼠腦TTC染色[結(jié)果]RIP3表達(dá)在缺血再灌注在體和體外模型中都有顯著變化。在本實(shí)驗(yàn)所設(shè)之間點(diǎn)中,在缺血再灌注損傷后12小時(shí)RIP3表達(dá)達(dá)到高峰。小鼠海馬來源細(xì)胞系HT22與大鼠皮層神經(jīng)元造模后PCR結(jié)果趨勢(shì)一致。動(dòng)物造模后梗死區(qū)及半暗帶區(qū)Western Blotting趨勢(shì)一致,與細(xì)胞PCR趨勢(shì)一致。在體實(shí)驗(yàn)中,梗死區(qū)較半暗帶區(qū),RIP3表達(dá)波動(dòng)顯著。缺氧時(shí)間1小時(shí)NEC-1實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率較對(duì)照組升高不明顯,而缺氧時(shí)間為4小時(shí)NEC-1實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率較對(duì)照組顯著升高。[結(jié)論]腦缺血再灌注模型中,缺血區(qū)和半暗帶區(qū)由于損傷程度不同,程序性壞死參與度不同,梗死區(qū)程序性壞死更活躍。[創(chuàng)新與不足]本實(shí)驗(yàn)受臨床上腦梗死后出現(xiàn)缺血半暗帶啟發(fā),探討程序性壞死在半暗帶區(qū)和梗死區(qū)的分布,進(jìn)一步揭示程序性壞死在腦缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制。動(dòng)物模型中干預(yù)后組織細(xì)胞的壞死變化是否能或只能歸因于程序性壞死成為疑問,這使結(jié)果分析變得困難,一些實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能用己知道理論解釋。
[Abstract]:Background: cell death is related to many aspects of life. The positive effects are: embryo development, cell metabolism, inflammation, tumor and so on.It has been thought that in cell death, except apoptosis is the active death mode of gene pre-storage, it is caused by various signal molecules produced by the cell and energy consumption, which leads to cell death.Other cell death is passive irreversible cell death. In 2005 Degterev et al proposed a new cell death mode: programmed cell necrosis.The cell death mode has the characteristics of necrotic structure, cell membrane integrity destruction, inflammation of surrounding tissues, and the process is regulated by a series of signaling molecules in the cell.Brain injury caused by cerebral ischemia is one of the main causes of death and disability in neurology in China.If we can further study the degree and function of the process necrosis signal pathway in the related diseases by further exploring the biochemical mechanism of the process necrosis signal pathway, it is not only beneficial to the cognition of the signal pathway,It also plays an important role in the treatment of nerve ischemia-reperfusion injury related diseases.[objective] to study the changes of RIP3 in cultured neuron cells after ischemia reperfusion injury in vitro.The present study was inspired by the occurrence of ischemic penumbra after cerebral infarction. The distribution of programmed necrosis in the penumbra and infarct area was studied, and the mechanism of programmed necrosis in cerebral ischemia-reperfusion injury was revealed.[methods] Primary culture of neurons, fluorescence identification of neuron cells and fluorescence identification of RIP3, culture and freezing of passage HT22 cells, establishment of anoxic model of cells, and establishment of hypoxia reperfusion model in animals were studied by Western B1otting technique.TTC staining [results] the expression of RIP3 was significantly changed in both in vivo and in vitro models.The expression of RIP3 reached its peak 12 hours after ischemia reperfusion injury.Mouse hippocampal derived cell line HT22 and rat cortical neurons showed the same trend of PCR results.The trend of Western Blotting in infarct and penumbra was the same as that in cell PCR.In vivo, RIP3 expression fluctuated significantly in infarcted area than in penumbra zone.The cell survival rate of NEC-1 group was not significantly higher than that of control group, but the cell survival rate of NEC-1 group was significantly higher than that of control group when hypoxia time was 4 hours.[conclusion] in the model of cerebral ischemia-reperfusion, the ischemic and penumbra regions are more active because of the different degree of injury and the participation degree of programmed necrosis.[innovation and deficiency] this experiment is inspired by the occurrence of ischemic penumbra after clinical cerebral infarction. The distribution of programmed necrosis in penumbra and infarct area is discussed, and the mechanism of procedural necrosis in cerebral ischemia-reperfusion injury is further revealed.Whether or not the necrotic changes of tissue cells after intervention in animal models can or can only be attributed to programmed necrosis is questionable, which makes the analysis of results difficult, and some experimental results cannot be explained by known theories.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：1761014