本文選題：量子點(diǎn) + 適配子　； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探究量子點(diǎn)(QDs)連接適配子(QD-Apt)靶向EGFRv III膠質(zhì)瘤成像的方法與可行性。方法:1.QD-Apt的合成、物理學(xué)特征測(cè)定及安全性研究1)QD-Apt的合成及物理學(xué)特征測(cè)定:生物素修飾的適配子(A32)與鏈霉親和素修飾的量子點(diǎn)(SA-QDs)通過(guò)生物素-鏈霉親和素鏈接將兩者結(jié)合形成QD-Apt。Zetasizer Nano ZS型納米粒度分析儀測(cè)定QD-Apt粒徑,熒光分光光度計(jì)測(cè)定QD-Apt及QDs的吸收光譜和發(fā)射光譜。瓊脂糖凝膠電泳初步驗(yàn)證適配子與量子點(diǎn)的連接。2)安全性研究:體外采用CCK-8法檢測(cè)QD-Apt對(duì)HUVEC、U87和U87-EGFRv III細(xì)胞活力的影響。體內(nèi)尾靜脈注射QD-Apt后,不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量裸鼠體重。HE染色觀察裸鼠各器官組織的病理變化。2.QD-Apt在體外的靶向熒光標(biāo)記1)EGFRv III在細(xì)胞株中的表達(dá):逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)、western blot和細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)HUVEC、U87、U87-EGFRv III細(xì)胞ERFRv III的表達(dá)。2)QD-Apt靶向膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的研究:QD-Apt標(biāo)記HUVEC、U87、U87-EGFRv III細(xì)胞,并在激光共聚焦下觀察熒光強(qiáng)度。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)QD-Apt對(duì)HUVEC、U87、U87-EGFRv III細(xì)胞的標(biāo)記率。3.QD-Apt在裸鼠體內(nèi)成像及組織分布:建立裸鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型并用MRI檢測(cè)腫瘤生長(zhǎng)情況。4周后,尾靜脈注射QD-Apt及QDs,6小時(shí)后進(jìn)行活體成像。并取瘤組織及正常腦組織行冰凍切片并在激光共聚焦下觀察;分光光度計(jì)測(cè)定各組織器官的熒光強(qiáng)度。結(jié)果:1.成功構(gòu)建QD-Apt納米探針,QD-Apt及QDs的粒徑均為20nm左右,QDs與A32連接后,其最大發(fā)射光譜仍為605±5nm,吸收光譜波峰仍為330nm。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明,適配子與量子點(diǎn)連接成功。體內(nèi)外的安全性研究均證實(shí)QD-Apt無(wú)明顯毒性。2.EGFRv III在U87-EGFRv III細(xì)胞中為陽(yáng)性表達(dá),而在U87、HUVEC中均為陰性表達(dá)。QD-Apt可特異性的結(jié)合U87-EGFRv III膠質(zhì)瘤細(xì)胞株并且標(biāo)記率高達(dá)81.53%。3.活體熒光成像顯示,QD-Apt可以透過(guò)血腦屏障并通過(guò)特異性結(jié)合EGFRv III而選擇性地聚集在腫瘤組織中。與正常腦組織相比,腫瘤組織中具有很強(qiáng)的熒光信號(hào),可以清晰地顯示出腫瘤的邊界。QD-Apt主要聚集在EGFRv III(+)的腫瘤組織、肝臟和腎臟,而在瘤旁、正常腦組織、脾、肺和心等較少。結(jié)論:QD-Apt可以通過(guò)特異性結(jié)合EGFRv III靶向膠質(zhì)瘤熒光成像。
[Abstract]:Aim: to investigate the feasibility and method of QD-Apt targeting EGFRv III glioma imaging.Method: 1. Synthesis of QD-Apt,Synthesis and physical characterization of 1)QD-Apt: biotin modified aptamer A32) and Streptomycin modified Quantum Dot SA-QDs) combine the two to form QD-Apt.Zetasizer via biotin-streptavidin linkageNano ZS nano-particle size analyzer was used to measure the particle size of QD-Apt.The absorption and emission spectra of QD-Apt and QDs were measured by fluorescence spectrophotometer.Agarose gel electrophoresis (agarose gel electrophoresis) was used to preliminarily verify the safety of aptamer and quantum dots (QDs). The effects of QD-Apt on the viability of HUVEC-U87 and U87-EGFRv III cells were detected by CCK-8 assay in vitro.After intravenous injection of QD-Apt in vivo,Study on the expression of ERFRv III. QD-Apt targeted glioma cell line; U87-EGFRv III cell line U87-EGFRv, U87and U87-EGFRv III cells labeled with: QD-Apt.Fluorescence intensity was observed in confocal laser.Frozen sections of tumor tissue and normal brain tissue were taken and observed under confocal laser. Fluorescence intensity of various tissues and organs were measured by spectrophotometer.The result is 1: 1.After successfully constructing QD-Apt nanoprobe QD-Apt and QDs, the maximum emission spectrum and absorption peak of QD-Apt and QDs were 605 鹵5nmand 330nmrespectively after the QDs and A32 were connected with 20nm or so.Agarose gel electrophoresis showed that the aptamer was successfully connected with quantum dots.In vivo and in vitro safety studies confirmed that QD-Apt was not virulent. 2. EGFRv III was positive in U87-EGFRv III cells, but negative expression in U87 HUVEC. QD-Apt could specifically bind U87-EGFRv III glioma cells and the labeling rate was as high as 81.53. 3.In vivo fluorescence imaging showed that QD-Apt could selectively gather in tumor tissues through the blood-brain barrier and by specifically binding to EGFRv III.Compared with normal brain tissue, tumor tissue has strong fluorescence signal, which clearly shows that the boundary of tumor. QD-Apt is mainly clustered in tumor tissue, liver and kidney of EGFRv III (), while in adjacent tumor, normal brain tissue, spleen,The lungs and the heart are less.Conclusion: QD-Apt can target glioma with specific binding to EGFRv III.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1731253