本文選題：HIF1α　切入點：VEGF　出處：《西南交通大學》2014年碩士論文

【摘要】：缺血性腦血管病是因腦部供血障礙所引起的腦組織相應區(qū)域缺血及缺氧而造成腦組織的破壞,從而出現(xiàn)一系列生化代謝異常、生理功能喪失的疾病,是世界范圍內(nèi)死亡和長期殘疾的主要原因。腦缺血的有效治療主要涉及機體適應缺氧/缺血、血管新生及神經(jīng)元的保護/再生等方面。 低氧誘導因子(hypoxia-inducible factors, HIF)是細胞在基因轉錄水平協(xié)調(diào)氧變化的最主要的調(diào)節(jié)因子,是一種介導細胞內(nèi)低氧反應的核轉錄復合體,促進其激活有利于缺血性疾病的治療。通過HIF-1α上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達可在腦和心臟中誘導目標區(qū)域形成新的血管,從而增加血流量和氧供應并減輕缺血的不良反應。血管內(nèi)皮生長因子(ascular endothelial growth factor, VEGF),是內(nèi)皮細胞(Endothelial cells,ECs)特異性促有絲分裂原,也是作用最強,特異性最高的促血管生長因子。發(fā)生腦缺血后,VEGF是血管生成、神經(jīng)保護和神經(jīng)再生過程中最重要的生長因子。它能夠顯著提高缺血腦部的血管生成,并減少恢復過程中的神經(jīng)功能損傷。神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor, NGF),是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族的典型成員,具有神經(jīng)元營養(yǎng)和促突觸生長雙重生物學功能,對中樞及周圍神經(jīng)元的發(fā)育、分化、生長、再生和功能特性的表達均具有重要的調(diào)控作用。NGF除了神經(jīng)保護以外還可通過促進血管再生改善缺血性疾病。因此以HIF1α, VEGF和NGF為靶點篩選腦缺血治療藥物,不僅有助于抗腦缺血藥物的開發(fā),也為藥物抗腦缺血作用機制研究提供一定的前期基礎。 本研究構建了以HIF1α, VEGF, NGF啟動子為作用靶點的細胞篩選模型,可用于高效、分類篩選具有抗腦缺血功效的藥物成分。首先,用HIF1α, VEGF和NGF基因的啟動子序列(其中,HIF1α選取了兩個序列)分別調(diào)控報告分子紅色熒光蛋白(E2-Crimson,E2)或熒光素酶(Luciferase, Luc)基因的轉錄,以此構建了8個重組質(zhì)粒：pHp1-E2, pHp2-E2, pVp-E2, pNp-E2; pHp1-Luc, pHp2-Luc, pVp-Luc, pNp-Luc,其中,Hp, Vp和Np分別表示HIF1α promoter,VEGF promoter和NGF promoter。隨后,用這8個質(zhì)粒分別轉染HEK293細胞,建立了24株穩(wěn)定的單克隆細胞株(每個質(zhì)粒建立3株細胞),分別命名為293-pHp1-E2a,b,c,293-pHp2-E2a,b,c,293-pVp-E2a,b,c,293-pNp-E2a,b,c;293-pHp1-Luca,b,c,293-pHp2-Luca,b,c,293-pVp-Luca,b,c和293-pNp-Luca,b,c。再利用二氯化鈷、脂多糖、鹽酸克倫特羅等陽性刺激物分別對含HIF1α, VEGF, NGF啟動子序列的3類細胞株進行功能驗證,建立以HIF1α,VEGF,NGF啟動子為作用靶點的3類藥物篩選的細胞模型：293-pHp1-Luc,293-pHp2-Luc,293-pVp-Luc和293-pNp-Luc。最后,應用鑒定出的細胞模型對25種中藥單體進行了篩選,初篩獲得6個對VEGF基因轉錄有激活作用的中藥單體。 本研究建立的細胞篩選模型不僅可對藥物進行快速篩選而且可同時進行大致功能分類,并對其效果進行定量判斷。這為尋找新型抗腦缺血藥物及其先導化合物提供了有力工具,也有助于中藥抗腦缺血作用機制的發(fā)現(xiàn)及其基因轉錄調(diào)控機制的探索。
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【學位授予單位】：西南交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

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1 高梅;杜冠華;;抗腦缺血藥物的研究現(xiàn)狀與進展[J];中國醫(yī)藥導刊;2006年05期

2 權晶晶;凌均h，

本文編號：1727034