本文選題：依達(dá)拉奉　切入點(diǎn)：腦缺血　出處：《承德醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：缺血性腦損傷作為目前危害人類健康的一種病理生理過(guò)程,嚴(yán)重影響了人們的生存時(shí)間及生活質(zhì)量。依達(dá)拉奉是臨床上一種常用的腦保護(hù)劑,可以清除自由基,抑制腦細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化,延遲神經(jīng)細(xì)胞死亡,從而減輕腦缺血癥狀而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。近年來(lái),自噬正成為研究腦缺血性疾病的熱點(diǎn)而受到廣泛的關(guān)注。自噬是一種由溶酶體介導(dǎo)的降解自身受損的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的催化過(guò)程,但是有關(guān)依達(dá)拉奉對(duì)腦組織自噬的影響研究目前尚未明了。本實(shí)驗(yàn)旨在研究依達(dá)拉奉對(duì)腦缺血大鼠自噬及自噬相關(guān)蛋白Atg-5和Beclin1表達(dá)的影響,探究依達(dá)拉奉能否通過(guò)調(diào)控腦組織自噬發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。目的:采用大腦中動(dòng)脈栓塞法(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)制備大鼠腦缺血模型。確認(rèn)腦缺血模型成功后進(jìn)行藥物干預(yù),比較各組神經(jīng)功能缺損評(píng)分,經(jīng)過(guò)蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察大鼠腦組織的病理學(xué)改變,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色檢測(cè)腦梗死體積,Western法對(duì)Atg-5和Beclin1蛋白在腦缺血大鼠腦組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),RT-PCR法檢測(cè)Atg-5和Beclin1的m RNA表達(dá)水平,探討依達(dá)拉奉對(duì)局灶性腦缺血損傷后大鼠腦組織自噬的影響。方法:1健康雄性清潔級(jí)SD大鼠72只,體重250-330g,隨機(jī)分為:假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組和依達(dá)拉奉組,每組24只大鼠。參照Z(yǔ)ea-Longa線栓法建立MCAO模型。其中實(shí)驗(yàn)組:行MCAO術(shù);依達(dá)拉奉組:MCAO術(shù)+依達(dá)拉奉干預(yù);假手術(shù)組:除不插入魚線外,余同實(shí)驗(yàn)組。模型成功判斷標(biāo)準(zhǔn)采用Longa法,評(píng)分1-3分的大鼠入選。各組均于模型制備后又隨機(jī)分為1d、3d和7d三個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只大鼠。照模過(guò)程中隨機(jī)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)大鼠,保證各組大鼠數(shù)量均為8只。2采用HE染色觀察各組的腦組織病理學(xué)改變。3運(yùn)用TTC染色法觀察腦梗死灶并計(jì)算梗死體積。4通過(guò)Western法檢測(cè)大鼠腦組織Atg-5和Beclin1的蛋白表達(dá)。5經(jīng)RT-PCR法測(cè)定各組大鼠Atg-5和Beclin1的m RNA表達(dá)水平。結(jié)果:1神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果:假手術(shù)組1d、3d、7d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分均為0分;實(shí)驗(yàn)組大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的評(píng)分分別為:(2.80±0.42)分、(2.87±0.35)分、(2.75±0.32)分;依達(dá)拉奉組各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)評(píng)分依次為:(2.03±0.47)分、(1.84±0.41)分、(1.97±0.37)分。與實(shí)驗(yàn)組比較,依達(dá)拉奉組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯下降(P0.05)。2 HE染色觀察各組大鼠腦組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果:假手術(shù)組大鼠腦組織中神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則,邊界清晰、細(xì)胞核完整;實(shí)驗(yàn)組腦組織出現(xiàn)片狀壞死,結(jié)構(gòu)疏松,與周圍正常組織分界清,細(xì)胞排列紊亂、邊界不清、部分細(xì)胞核溶解固縮,7d時(shí)上述變化最為明顯;依達(dá)拉奉組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)較實(shí)驗(yàn)組相比上述表現(xiàn)均有改善。3 TTC法檢測(cè)各組大鼠的腦梗死灶及梗死體積結(jié)果顯示:(1)假手術(shù)組未見(jiàn)腦梗死灶,實(shí)驗(yàn)組和依達(dá)拉奉組有肉眼可見(jiàn)的梗死灶,且依達(dá)拉奉組較實(shí)驗(yàn)組腦梗死區(qū)域明顯減小;(2)各組大鼠的腦梗死總體積分別是:0 mm3、(167.80±11.03)mm3、(19.40±12.12)mm3。實(shí)驗(yàn)組及依達(dá)拉奉組大鼠的腦梗死體積與假手術(shù)組的比較均明顯增高(P0.05);依達(dá)拉奉組與實(shí)驗(yàn)組比較,腦梗死體積明顯縮小(P0.05)。4 Western法檢測(cè)各組大鼠腦組織中Atg-5和Beclin1的蛋白表達(dá)情況:(1)假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組、依達(dá)拉奉組Atg-5蛋白在1d時(shí)表達(dá)結(jié)果依次是:0.46±0.02、0.97±0.05、0.73±0.03,在3d時(shí)表達(dá)結(jié)果為0.39±0.08、1.57±0.06、0.97±0.05,在7d時(shí)表達(dá)結(jié)果為:0.41±0.04、0.72±0.08、0.58±0.07;(2)上述三組Beclin1蛋白在1d時(shí)表達(dá)水平依次為:0.72±0.02、1.64±0.18、0.91±0.09,在3d時(shí)蛋白表達(dá)結(jié)果為0.67±0.04、2.18±0.17、1.64±0.18,在7d時(shí)蛋白表達(dá)結(jié)果依次為:0.69±0.05、1.02±0.24、0.82±0.17。假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)Atg-5和Beclin1蛋白表達(dá)水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組和依達(dá)拉奉組Atg-5和Beclin1蛋白表達(dá)趨勢(shì)一致,1d時(shí)增高,3d時(shí)表達(dá)呈高峰,7d下降,但仍高于假手術(shù)組(P0.05)。與假手術(shù)組比較,各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和依達(dá)拉奉組中Atg-5和Beclin1蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。與實(shí)驗(yàn)組比較,各時(shí)間點(diǎn)依達(dá)拉奉組中Atg-5和Beclin1蛋白表達(dá)水平下降(P0.05)。5 RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠中Atg-5和Beclin1的m RNA在腦組織內(nèi)的表達(dá)水平:(1)假手術(shù)組、實(shí)驗(yàn)組、依達(dá)拉奉組Atg-5m RNA在1d時(shí)表達(dá)水平依次是:0.46±0.04、1.51±0.05、1.01±0.04,在3d時(shí)表達(dá)結(jié)果為0.55±0.03、1.99±0.09、1.41±0.06,在7d時(shí)表達(dá)結(jié)果為0.51±0.02、1.20±0.04、0.89±0.06;(2)上述三組在1d時(shí)Beclin1m RNA表達(dá)結(jié)果分別是:0.76±0.04、1.68±0.12、1.02±0.07,在3d時(shí)表達(dá)結(jié)果為0.71±0.05、2.05±0.12、1.51±0.10,在7d時(shí)表達(dá)結(jié)果為0.85±0.06、1.41±0.20、1.02±0.11。假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)Atg-5m RNA和Beclin1m RNA表達(dá)水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組和依達(dá)拉奉組Atg-5和Beclin1m RNA表達(dá)趨勢(shì)相似,1d時(shí)增高,3d時(shí)表達(dá)呈高峰,7d下降,但仍高于假手術(shù)組(P0.05)。與假手術(shù)組比較,各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和依達(dá)拉奉組中Atg-5和Beclin1m RNA表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。與實(shí)驗(yàn)組比較,各時(shí)間點(diǎn)依達(dá)拉奉組中Atg-5和Beclin1m RNA表達(dá)水平下降(P0.05)。結(jié)論:1正常大鼠腦組織內(nèi)存在自噬,自噬相關(guān)蛋白Atg-5和Beclin1低水平表達(dá)。2大鼠局灶性腦缺血損傷可激活自噬,表現(xiàn)為Atg-5和Beclin1蛋白及m RNA表達(dá)的增加。3依達(dá)拉奉可能通過(guò)抑制自噬的過(guò)度激活而減輕腦缺血大鼠的神經(jīng)功能損害,對(duì)發(fā)生的腦缺血性損傷起保護(hù)作用,可能是依達(dá)拉奉腦保護(hù)作用的機(jī)制之一。
[Abstract]:In recent years , the rats were randomly divided into three groups : sham operation group , experimental group and Edara group . The rats were randomly divided into two groups : sham operation group , experimental group and Edara group . The rats were randomly divided into three groups : sham operation group , experimental group and Edara group . Compared with the experimental group , the expression levels of Atg - 5 and Beclin1 in the experimental group were : 0 mm3 , ( 167.80 鹵 11.03 ) mm3 and ( 19.40 鹵 0.12 ) mm3 . Results : The expression levels of Atg - 5 and Beclin1 mRNA in the experimental group were significantly higher than those in sham operation group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R741

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1681040