本文選題：癲癇持續(xù)狀態(tài)　切入點(diǎn)：miRNA　出處：《泰山醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文

【摘要】：目的 癲癇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)病，目前影響著全球0.5%~1%的人群。選擇性神經(jīng)元死亡和苔蘚纖維芽生等病理生理過(guò)程與癲癇的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)。microRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼小RNA，它通過(guò)誘導(dǎo)沉默復(fù)合體形成來(lái)降解靶mRNA，或者阻遏靶mRNA的翻譯。最近越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道，miRNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著極為重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立杏仁核點(diǎn)燃癲癇持續(xù)狀態(tài)模型的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)探討海馬miRNA表達(dá)譜的變化，并且對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)后差異表達(dá)的miRNA與海馬神經(jīng)元凋亡的關(guān)系進(jìn)行了評(píng)估。 研究方法 1、首先選用6~8周齡健康雄性SD大鼠，建立杏仁核點(diǎn)燃大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型，于造模成功后24小時(shí)提取大鼠腦組織海馬區(qū)miRNA，采用高通量測(cè)序技術(shù)研究癲癇持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬區(qū)腦組織與正常大鼠海馬區(qū)腦組織中miRNA表達(dá)譜的差異。 2、隨后將篩選出的差異表達(dá)明顯的6個(gè)miRNA用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR)進(jìn)行驗(yàn)證。 3、應(yīng)用靶基因預(yù)測(cè)軟件（RNAhybrid和miRand）對(duì)以上6個(gè)miRNA的目的候選靶mRNA進(jìn)行了預(yù)測(cè)，并使用KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）進(jìn)行通路分析。 4、最后檢測(cè)此6個(gè)miRNA在癲癇持續(xù)狀態(tài)后不同時(shí)間點(diǎn)（4小時(shí)，24小時(shí)，1周和3周）的動(dòng)態(tài)變化，與此同時(shí)應(yīng)用Nissel染色和TUNEL（Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP end-labeling assay）染色檢測(cè)癲癇持續(xù)狀態(tài)后不同時(shí)間點(diǎn)海馬神經(jīng)元生存和凋亡情況，進(jìn)一步評(píng)估篩選出的miRNA是否與癲癇持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)元凋亡有關(guān)。 結(jié)果 1、杏仁核點(diǎn)燃癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠和對(duì)照組正常大鼠海馬組織差異表達(dá)的miRNA：在癲癇持續(xù)狀態(tài)后24小時(shí)檢測(cè)出差異表達(dá)的miRNA共37個(gè)，其中上調(diào)的miRNA有34個(gè)，，下調(diào)的有3個(gè)。進(jìn)一步篩選出在癲癇持續(xù)狀態(tài)后變化大于2倍的（P＜0.01且P≠0）6個(gè)miRNA (miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p andmiR-99b-3p)，在以上6個(gè)篩選出的miRNA中，上調(diào)的miRNA表達(dá)差異最大的是miR-879-5p （4.177倍），差異最小的是miR-764-3p （2.078倍），下調(diào)大于2倍的是miR-99b-3p。 2、采用qRT-PCR對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證：將篩選出的變化明顯的6個(gè)miRNA進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證，miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p的表達(dá)量與正常對(duì)照組相比明顯增高，而miR-99b-3p的表達(dá)量明顯下降，此與高通量測(cè)序結(jié)果一致。 3、靶基因預(yù)測(cè)：利用RNAhybrid和miRand兩個(gè)靶基因預(yù)測(cè)軟件對(duì)篩選出的6個(gè)miRNA的靶mRNA進(jìn)行預(yù)測(cè)，KEGG通路分析進(jìn)一步顯示此6個(gè)miRNA的靶基因在癲癇持續(xù)狀態(tài)后凋亡通路中發(fā)揮十分重要的作用。 4、miRNA的動(dòng)態(tài)變化和Nissel染色及TUNEL染色的病理結(jié)果：以上miRNA在癲癇持續(xù)狀態(tài)后1周表達(dá)量的變化最明顯，Nissel染色及TUNEL染色結(jié)果顯示在癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬區(qū)腦組織生存神經(jīng)元減少，凋亡神經(jīng)元增多，且在癲癇持續(xù)狀態(tài)后1周時(shí)最明顯，這與篩選出的miRNA的動(dòng)態(tài)變化相一致。進(jìn)一步分析miRNA和癲癇持續(xù)狀態(tài)后凋亡的關(guān)系顯示miR-365-5p和miR-99b-3p的差異表達(dá)水平與癲癇持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)元凋亡具有明顯相關(guān)性。 結(jié)論 大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后，海馬區(qū)腦組織中miRNA的表達(dá)量發(fā)生明顯變化，并且差異表達(dá)的miRNA是癲癇持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)元凋亡重要的調(diào)節(jié)因子。
[Abstract]:objective
Epilepsy is a common disease of the central nervous system, currently affecting the global 0.5%~1% population. Selective neuronal death and mossy fiber sprouting in the pathophysiological processes of epilepsy and the occurrence and development of.MicroRNA (miRNA) is a kind of endogenous with regulationfunction encoding non small RNA, it can induce silencing complex formation to degradation of target mRNA. Or repression of target mRNA translation. More recent reports in the literature, miRNA in the central nervous system disease development plays an extremely important role. By establishing the animal experiment of amygdala kindling epileptic state model to explore the expression of hippocampal miRNA, and assess the relationship of miRNA expression of epilepsy after status epilepticus and apoptosis of hippocampus neurons.
research method
1, the first 6~8 weeks old healthy male SD rats to establish rat amygdala kindling model of status epilepticus, 24 hours after the success in modeling the extraction of brain tissue in rats hippocampus miRNA, using high-throughput sequencing technology to study epilepsy expression profiling of miRNA in hippocampus of rats with brain tissue and brain tissue in the hippocampus of normal rats.
2, then the 6 differentially expressed miRNA were identified by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (Real-time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR).
3, we applied the target gene prediction software (RNAhybrid and miRand) to predict the above 6 miRNA target candidate mRNA, and used KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) to conduct path analysis.
4, finally detect the 6 miRNA at different time points after status epilepticus (4 hours, 24 hours, 1 weeks and 3 weeks) the dynamic changes at the same time, using Nissel staining and TUNEL (Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP end-labeling assay) were detected at different time points after status epilepticus in hippocampal neuron survival and apoptosis, further evaluation whether the selected miRNA and status epilepticus induced neuronal apoptosis.
Result
1, status epilepticus rats and expression of hippocampus of rats in the control group of normal miRNA in amygdala kindled epileptic state after 24 hours to detect the expression of miRNA in a total of 37, which increased 34 in miRNA, down 3. Further screened in status epilepticus after changes greater than 2 times (P < 0.01 and P = 0) and 6 miRNA (miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p, andmiR-99b-3p) in more than 6 screened miRNA, upregulation of miRNA expression of miR-879-5p was the highest (4.177 times), the difference is the smallest miR-764-3p (2.078 times), down more than 2 times is miR-99b-3p.
2, using qRT-PCR to verify the results: 6 the change of miRNA screened obvious qRT-PCR validation, miR-874-3p, miR-20a-5p, miR-345-3p, miR-365-5p, miR-764-3p expression was significantly increased compared with normal control group, while the expression of miR-99b-3p was obviously decreased, the sequencing results were consistent with the high throughput.
3, target gene prediction: we use RNAhybrid and miRand two target gene prediction software to predict the target miRNA of 6 miRNA targets. KEGG pathway analysis further shows that these 6 miRNA target genes play a very important role in the apoptotic pathway after status epilepticus.
4, the pathological results of the dynamic changes of miRNA and Nissel staining and TUNEL staining: more than miRNA in status epilepticus after 1 weeks, the expression of the most obvious, Nissel staining and TUNEL staining showed reduced survival of neurons in hippocampus in epileptic state, the apoptosis of neurons increased, and in 1 weeks after epilepsy continue to state the most obvious, consistent with the dynamic changes of the screened miRNA. Further analysis of miRNA and apoptosis after status epilepticus relationship differences between miR-365-5p and miR-99b-3p expression and neuronal apoptosis after status epilepticus has obvious relevance.
conclusion
After the status epilepticus in rats, the expression level of miRNA in hippocampal area changed significantly, and the differential expression of miRNA was an important regulator of neuronal apoptosis after status epilepticus.

【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡劍平,白栓成,秦廣平;咪唑安定治療癲癇持續(xù)狀態(tài)的體會(huì)[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2004年09期

2 朱玉民;癲癇持續(xù)狀態(tài)診治分析[J];醫(yī)藥論壇雜志;2004年20期

3 王治靜,陳小聰,李華;咪達(dá)唑侖治療小兒癲癇持續(xù)狀態(tài)30例療效觀察[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

4 繆長(zhǎng)青,朱耀平;麻醉方法搶救癲癇持續(xù)狀態(tài)[J];海南醫(yī)學(xué);2005年02期

5 馬艷;安定治療癲癇持續(xù)狀態(tài)46例臨床分析[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年03期

6 張敏;癲癇持續(xù)狀態(tài)的治療及護(hù)理[J];湖北中醫(yī)雜志;2005年03期

7 吳江虹;陳軍華;徐建華;;癲癇持續(xù)狀態(tài)致多臟器功能衰竭的臨床研究[J];井岡山學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年03期

8 柏雪;;兒童癲癇持續(xù)狀態(tài)的治療體會(huì)[J];醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)資訊;2006年03期

9 Manno E.M;Pfeifer E.A;Cascino G.D;邱偉慶;;癲癇持續(xù)狀態(tài)患者的心臟病理[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(神經(jīng)病學(xué)分冊(cè));2006年05期

10 齊愛(ài)華;;癲癇持續(xù)狀態(tài)45例分析[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2006年15期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 宋安軍;伍國(guó)鋒;;癲癇持續(xù)狀態(tài)處理研究[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)第八屆神經(jīng)病學(xué)年會(huì)論文集[C];2010年

2 韓蘊(yùn)麗;李杏;;50例癲癇持續(xù)狀態(tài)的臨床特點(diǎn)與影響近期療效的相關(guān)因素分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

3 張鄭平;;首發(fā)癥狀為癲癇持續(xù)狀態(tài)的就診患者臨床分析(附35份病例)[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)第八屆神經(jīng)病學(xué)年會(huì)論文集[C];2010年

4 劉俊秀;康玉振;;小兒癲癇持續(xù)狀態(tài)的搶救[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];1994年

5 孫云菊;;癲癇持續(xù)狀態(tài)治療體會(huì)(附12例分析)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];1994年

6 揚(yáng)滿庚;;東莨菪堿治療癲癇持續(xù)狀態(tài)4例報(bào)告[A];第七次全國(guó)莨菪類藥研究學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2001年

7 魏忠東;;東莨菪堿控制癲癇持續(xù)狀態(tài)臨床觀察[A];第七次全國(guó)莨菪類藥研究學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2001年

8 朱淑萍;張琴;付曉榮;;安定持續(xù)泵入治療兒童癲癇持續(xù)狀態(tài)的護(hù)理[A];全國(guó)兒科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2002年

9 王遠(yuǎn)芳;;癲癇持續(xù)狀態(tài)的護(hù)理[A];中國(guó)心理衛(wèi)生協(xié)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2003年

10 羅蓉;湯有才;毛萌;肖俠明;;咪唑安定治療兒童癲癇持續(xù)狀態(tài)的療效觀察[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前9條

1 ;癲癇持續(xù)狀態(tài)的分類及診斷[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

2 李軍;癲癇持續(xù)狀態(tài)的治療[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

3 本報(bào)記者 魏平;控制癲癇持續(xù)——藥效求快 劑量要足[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

4 ;癲癇發(fā)作病例分析（二）[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

5 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院小兒科 梁承瑋;警惕小兒持續(xù)非驚厥性癲癇[N];健康報(bào);2009年

6 姚南;癲癇規(guī)律護(hù)理防復(fù)發(fā)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

7 王錦蓉;哪些藥物停服會(huì)出現(xiàn)“反彈”現(xiàn)象[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2009年

8 肖嵐;癲癇發(fā)作時(shí)的護(hù)理[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

9 夏蟲;癲癇發(fā)作，何時(shí)該叫救護(hù)車[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 王藝;癲癇持續(xù)狀態(tài)亞低溫神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

2 李真;HMGB1在幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)中的作用研究[D];山東大學(xué);2013年

3 史志勤;實(shí)驗(yàn)性癲癇大鼠凋亡機(jī)制的探討及重組人促紅細(xì)胞生成素的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張忱;大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬miRNA表達(dá)譜的研究[D];中南大學(xué);2010年

5 解媛媛;miR-34a在癲癇持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬神經(jīng)元凋亡發(fā)生中的作用[D];中南大學(xué);2012年

6 周淵峰;亞低溫對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)腦損傷神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

7 姚紅;2R，4R-APDC對(duì)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后結(jié)構(gòu)和功能可塑性變化的影響[D];山東大學(xué);2008年

8 王樹華;癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元程序性死亡與μ-calpain相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張凌鋒;咪達(dá)唑侖治療癲癇持續(xù)狀態(tài)療效的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

2 李燕玲;活性氧在癲癇持續(xù)狀態(tài)誘導(dǎo)神經(jīng)損傷中的信號(hào)機(jī)制研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

3 李杏;50例癲癇持續(xù)狀態(tài)的臨床特點(diǎn)與影響近期療效的相關(guān)因素分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 邢大江;癲癇持續(xù)狀態(tài)后一側(cè)大腦半球受損的臨床病例分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

5 王丹;癲癇持續(xù)狀態(tài)嚴(yán)重程度和認(rèn)知功能的評(píng)估[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

6 苗銳;癲癇持續(xù)狀態(tài)的臨床回顧性分析[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

7 楊光;癲癇持續(xù)狀態(tài)的病因?qū)W研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

8 岳宏;塞來(lái)昔布對(duì)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

9 馮鴿;86例癲癇持續(xù)狀態(tài)的臨床分析[D];吉林大學(xué);2011年

10 陳冠鋒;烏靈菌粉對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)誘發(fā)大鼠空間記憶障礙的作用[D];浙江大學(xué);2012年

本文編號(hào)：1679006