本文選題：BMSCs　切入點：小膠質(zhì)細胞　出處：《中國修復重建外科雜志》2017年12期

【摘要】：目的初步探討B(tài)MSCs條件培養(yǎng)液對小膠質(zhì)細胞(microglia,MGs)激活及其分泌精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)的影響。方法取4周齡SD大鼠股骨和脛骨骨髓,采用差速貼壁法分離培養(yǎng)原代BMSCs,行Vimentin免疫熒光染色鑒定。取新生3日內(nèi)SD大鼠全腦,采用胰蛋白酶消化法分離培養(yǎng)原代MGs,行Iba1免疫熒光染色鑒定。收集對數(shù)生長期BMSCs培養(yǎng)液制備BMSCs條件培養(yǎng)液,取原代MGs,分別使用含BMSCs條件培養(yǎng)液的DMEM/F12培養(yǎng)基(實驗組)和普通DMEM/F12培養(yǎng)基(對照組)培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h后采用倒置相差顯微鏡觀察MGs的形態(tài)改變;Iba1免疫熒光染色觀察MGs激活狀態(tài);Iba1和Arg1免疫熒光雙標染色及Western blot檢測MGs中Arg1的表達。結果倒置相差顯微鏡觀察示BMSCs約14 d進入對數(shù)生長期,Vimentin免疫熒光染色結果示98%以上細胞呈陽性反應;MGs約21 d進入對數(shù)生長期,Iba1免疫熒光染色結果示約80%細胞呈陽性反應。倒置相差顯微鏡觀察示實驗組MGs被激活,激活后的MGs胞體增大、突起變短、呈阿米巴樣變化。免疫熒光染色示實驗組Iba1陽性細胞顯著多于對照組,比較差異有統(tǒng)計學意義(t=0.007,P=0.000);免疫熒光雙標染色示實驗組Iba1和Arg1雙陽性細胞顯著多于對照組,比較差異有統(tǒng)計學意義(t=0.007,P=0.000);Western blot示實驗組Arg1蛋白相對表達量顯著高于對照組,比較差異有統(tǒng)計學意義(t=0.001,P=0.000)。結論 BMSCs條件培養(yǎng)液可激活MGs,并促進MGs表達Arg1。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of BMSCs conditioned medium on the activation of microglia microglia and the secretion of argininase 1(arginase 1 Arg 1. Methods the bone marrow of femur and tibia of 4-week-old SD rats was obtained. Primary BMSCs were isolated and cultured by differential adherent method and identified by Vimentin immunofluorescence staining. The whole brain of SD rats was obtained within 3 days after birth. Primary MGs were isolated and cultured by trypsin digestion and identified by Iba1 immunofluorescence staining. The BMSCs medium of logarithmic growth phase was collected to prepare the conditioned medium of BMSCs. The primary MGs were cultured in DMEM/F12 medium containing BMSCs conditioned medium (experimental group) and normal DMEM/F12 medium (control group) respectively. After 48 h culture, the morphologic changes of MGs were observed by inverted phase contrast microscope. The expression of Arg1 in MGs was detected by double immunofluorescence staining and Western blot. Results the expression of Arg1 in MGs was detected by inverted phase contrast microscope. Results the results of immunofluorescence staining showed that more than 98% of the cells were positive in the logarithmic growth phase of BMSCs. The results of Iba1 immunofluorescence staining showed that about 80% of the cells were positive in the logarithmic growth phase. The inverted phase contrast microscope showed that MGs was activated in the experimental group. After activation, the MGs cell bodies increased and the processes became shorter, showing amoeba like changes. Immunofluorescence staining showed that the number of Iba1 positive cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group. The results showed that the expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and the relative expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and the expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group, and the expression of Arg1 protein in the experimental group was significantly higher than that in the control group. Conclusion the conditioned medium of BMSCs can activate MGs and promote the expression of Arg1 in MGs.
【作者單位】： 成都中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院;成都中醫(yī)藥大學針灸推拿學院;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81603537、81704160) 中國博士后科學基金(2017M612928) 四川省科技廳國際科技合作與交流項目(2017HH0004) 四川省教育廳項目(17ZA0163)~~
【分類號】：R741

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