本文選題：糖尿病　切入點(diǎn)：痛覺(jué)過(guò)敏　出處：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究背景糖尿病神經(jīng)病變是糖尿病最常見(jiàn)也是最易致殘的慢性并發(fā)癥之一,其發(fā)生率根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法的不同,患病率在10%~96%不等(中國(guó)2型糖尿病防治指南2013版)。其最常見(jiàn)的類(lèi)型是周?chē)窠?jīng)病變,其次為糖尿病自主神經(jīng)病變。周?chē)窠?jīng)病變常表現(xiàn)為遠(yuǎn)端肢體對(duì)稱(chēng)性的麻木感,部分患者會(huì)出現(xiàn)異常疼痛,包括自發(fā)痛、痛覺(jué)過(guò)敏(輕度刺激引起劇烈疼痛)和痛覺(jué)超敏(無(wú)害刺激如光照、觸摸時(shí)也能引起明顯疼痛)等,稱(chēng)為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛。而自主神經(jīng)病變主要影響心血管、胃腸及泌尿生殖系統(tǒng)功能。當(dāng)累及上消化道時(shí),常導(dǎo)致患者出現(xiàn)上腹痛或不適、惡心嘔吐、反酸燒心、餐后飽脹等一系列癥狀,同時(shí)具有胃部痛覺(jué)過(guò)敏現(xiàn)象,表現(xiàn)為胃對(duì)胃酸、炎癥或擴(kuò)張等刺激的反應(yīng)性明顯增加。目前糖尿病神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,亦缺乏有效的臨床治療手段,顯著影響著糖尿病患者的生活質(zhì)量。進(jìn)一步研究其機(jī)制,對(duì)于尋找有效的治療靶點(diǎn)非常重要。第一部分1.研究目的闡明核因子-κB在糖尿病胃部痛覺(jué)過(guò)敏形成中的作用及相關(guān)機(jī)制,主要研究?jī)?nèi)容包括:(1)探討糖尿病大鼠是否存在胃部痛覺(jué)過(guò)敏及其相關(guān)電生理機(jī)制。(2)探討CBS-H2S系統(tǒng)是否參與糖尿病大鼠胃部痛覺(jué)過(guò)敏的形成。(3)探討NF-κB對(duì)CBS-H2S系統(tǒng)的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制。2.實(shí)驗(yàn)方法(1)選用雌性成年SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,應(yīng)用STZ(65mg/kg)腹腔單次注射誘導(dǎo)糖尿病模型。應(yīng)用胃部球囊擴(kuò)張及肌電圖分析技術(shù),檢測(cè)大鼠的胃部感覺(jué)。(2)應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠胃特異性DRG神經(jīng)元的興奮性及硫化氫對(duì)胃特異性DRG神經(jīng)元興奮性的影響。(3)應(yīng)用Real-time PCR和Western blotting方法檢測(cè)大鼠胃特異性DRG中NF-κB、硫化氫合成酶CBS、DNA甲基化相關(guān)酶的表達(dá)水平。(4)應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)和亞硫酸氫鹽處理測(cè)序法(BSP)檢測(cè)大鼠胃特異性DRG神經(jīng)元中cbs基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)。(5)應(yīng)用免疫熒光染色法觀(guān)察NF-κB與CBS在胃特異性DRG神經(jīng)元上的表達(dá)情況。(6)應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)法檢測(cè)大鼠胃特異性DRG中NF-κB與cbs基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合度。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)STZ腹腔注射后2-6周糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯的胃部痛覺(jué)過(guò)敏,第4-6周痛敏最為明顯。STZ注射后第4周,糖尿病大鼠胃特異性DRG神經(jīng)元興奮性明顯增加。(2)糖尿病大鼠胃特異性DRG中CBS表達(dá)增加。腹腔注射CBS抑制劑AOAA能夠緩解糖尿病大鼠胃部痛覺(jué)過(guò)敏,并呈劑量依賴(lài)性。腹腔注射AOAA能夠降低糖尿病大鼠胃特異性DRG神經(jīng)元的興奮性。H2S衍生劑Na HS能夠增加DRG神經(jīng)元興奮性。(3)NF-κB與CBS共表達(dá)于大鼠胃特異性DRG神經(jīng)元中,糖尿病大鼠胃特異性DRG中NF-κB與cbs基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合度增加。腹腔注射N(xiāo)F-κB抑制劑PDTC能夠下調(diào)糖尿病大鼠胃特異性DRG中CBS的表達(dá)。糖尿病大鼠胃特異性DRG中cbs基因啟動(dòng)子區(qū)明顯去甲基化,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3a、3b表達(dá)下調(diào)。4.小結(jié)(1)糖尿病大鼠存在胃部痛覺(jué)過(guò)敏,并與胃特異性DRG神經(jīng)元興奮性增加有關(guān);(2)糖尿病狀態(tài)下,胃特異性DRG神經(jīng)元中CBS的表達(dá)上調(diào),增加H2S的合成,致敏神經(jīng)元,參與糖尿病胃部痛覺(jué)過(guò)敏的形成;(3)糖尿病狀態(tài)下,活化的NF-κB可以在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)CBS的表達(dá);cbs基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化增強(qiáng),使得NF-κB與cbs基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合成為可能,并發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。第二部分1.研究目的闡明核因子-κB在糖尿病后肢痛覺(jué)過(guò)敏形成中的作用及相關(guān)機(jī)制,主要研究?jī)?nèi)容包括:(1)探討轉(zhuǎn)錄因子NF-κB是否參與糖尿病大鼠后肢痛覺(jué)過(guò)敏的形成。(2)探討配體門(mén)控通道P2X3受體是否參與糖尿病大鼠后肢痛覺(jué)過(guò)敏的形成。(3)探討NF-κB對(duì)P2X3受體的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制。2.實(shí)驗(yàn)方法(1)選用雌性成年SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,應(yīng)用STZ(65mg/kg)腹腔單次注射誘導(dǎo)糖尿病模型。應(yīng)用Von frey filament(VFF)和熱刺激儀定量檢測(cè)大鼠的后肢痛覺(jué)閾值。(2)應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄大鼠后肢特異性DRG神經(jīng)元ATP誘導(dǎo)的的電流密度。(3)應(yīng)用Real-time PCR和Western blotting方法檢測(cè)大鼠后肢特異性DRG中NF-κB、P2X3(及P2X1,P2X2)、DNA甲基化相關(guān)酶的表達(dá)水平。(4)應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)和亞硫酸氫鹽處理測(cè)序法(BSP)檢測(cè)大鼠后肢特異性DRG神經(jīng)元中p2x3基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化程度。(5)應(yīng)用免疫熒光染色法觀(guān)察NF-κB與P2X3在后肢特異性DRG神經(jīng)元上的表達(dá)情況;觀(guān)察攜帶GFP的慢病毒對(duì)后肢特異性DRG神經(jīng)元的轉(zhuǎn)染情況。(6)應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)法檢測(cè)大鼠后肢特異性DRG中NF-κB與p2x3基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合度。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)STZ腹腔注射后2周大鼠出現(xiàn)后肢機(jī)械痛敏及熱痛敏,并至少持續(xù)至第9周,第4-6周痛敏最為明顯。STZ注射后第4周,糖尿病大鼠后肢特異性DRG中NF-κB表達(dá)增加。腹腔注射N(xiāo)F-κB抑制劑PDTC或鞘內(nèi)注射N(xiāo)F-κB si RNA慢病毒均能夠緩解糖尿病大鼠的后肢機(jī)械痛敏和熱痛敏。(2)鞘內(nèi)注射P2受體拮抗劑suramin或P2X3受體拮抗劑A-317491均能緩解糖尿病大鼠后肢痛覺(jué)過(guò)敏,并呈劑量依賴(lài)性。糖尿病大鼠后肢特異性DRG中P2X3受體表達(dá)增加(而非P2X1或P2X2)。糖尿病大鼠后肢特異性DRG神經(jīng)元ATP誘導(dǎo)的電流密度明顯增加。(3)NF-κB與P2X3受體共表達(dá)于大鼠后肢特異性DRG神經(jīng)元中,糖尿病大鼠后肢特異性DRG中NF-κB與p2x3受體基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合度增加。鞘內(nèi)注射N(xiāo)F-κB si RNA慢病毒能夠下調(diào)糖尿病大鼠后肢特異性DRG中P2X3受體的表達(dá),并降低ATP誘導(dǎo)的電流密度。糖尿病大鼠后肢特異性DRG中p2x3受體基因啟動(dòng)子區(qū)明顯去甲基化,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3b表達(dá)下調(diào)。4.小結(jié)(1)NF-κB參與糖尿病大鼠后肢痛覺(jué)過(guò)敏的形成;(2)糖尿病狀態(tài)下,后肢特異性DRG神經(jīng)元中P2X3受體的表達(dá)及功能增加,參與糖尿病大鼠后肢痛覺(jué)過(guò)敏的形成;(3)糖尿病狀態(tài)下,活化的NF-κB可以在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控P2X3受體的表達(dá);p2x3基因啟動(dòng)子區(qū)域去甲基化,使得NF-κB與p2x3基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合成為可能,并發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)論(1)糖尿病大鼠存在胃部痛覺(jué)過(guò)敏及后肢痛覺(jué)過(guò)敏,并分別與各自特異性DRG神經(jīng)元的敏化有關(guān)。(2)NF-κB分別通過(guò)調(diào)控痛相關(guān)基因(cbs和p2x3)的表達(dá),致敏胃特異性及后肢特異性DRG神經(jīng)元,導(dǎo)致胃部痛覺(jué)過(guò)敏及后肢痛覺(jué)過(guò)敏。(3)DNA甲基化參與NF-κB對(duì)痛相關(guān)基因cbs及p2x3的表達(dá)調(diào)控。
[Abstract]:Objective To study the role of NF - 魏B in the pathogenesis of diabetic neuropathy . ( 2 ) To investigate the effect of NF - 魏B on gastric pain in diabetic rats . ( 1 ) The expression of NF - 魏B and cbs gene promoter region in diabetic rats was significantly increased by intraperitoneal injection of AOAA . ( 4 ) The expression of p2x3 gene promoter in hind limb specific DRG of diabetic rats was increased . The expression of P2X3 receptor in hind limb specific DRG of diabetic rats was increased . ( 3 ) The expression of P2X3 receptor in hind limb specific DRG of diabetic rats was increased . ( 3 ) NF - 魏B and P2X3 receptor antagonist A - 317 491 could regulate the expression of P2X3 receptor in hind limb specific DRG of diabetic rats .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R747.9

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周燕;治療糖尿病的中醫(yī)藥研究近況[J];華夏醫(yī)學(xué);2001年04期

2 徐祗順,蔣曉剛,劉海南,傅強(qiáng),許復(fù)郁,劉玉強(qiáng);1型糖尿病大鼠陰莖神經(jīng)型一氧化氮合酶的含量及意義[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2001年04期

3 艾智華,孟萍,蔡紅衛(wèi);糖尿病大鼠血、尿、腎臟內(nèi)皮素變化及意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年08期

4 李全宏,田澤,蔡同一;南瓜提取物對(duì)糖尿病大鼠降糖效果研究[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2003年01期

5 張斌,高鑫;絲裂原激活蛋白激酶信號(hào)通路與糖尿病并發(fā)癥[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè);2004年05期

6 丁文成;;運(yùn)動(dòng)在糖尿病治療中的作用機(jī)理及實(shí)施原則[J];貴州體育科技;2004年04期

7 梁俊清,丁春華,凌亦凌;糖尿病時(shí)肺內(nèi)氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡的研究進(jìn)展[J];河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年01期

8 陳磊,章新華,聶宏光,金萬(wàn)寶,李金鳴;早期糖尿病大鼠血中降鈣素基因相關(guān)肽的變化[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年01期

9 李紅,張哲,翁紅雷,阮昱;糖尿病大鼠腎臟α平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

10 李潔;趙明;王燕燕;;糖尿病足的分子生物學(xué)機(jī)制[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王志強(qiáng);陳秀榮;武兵;;(綜述)中藥治療糖尿病及其并發(fā)癥的臨床科研進(jìn)展[A];中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)基層中醫(yī)藥會(huì)議專(zhuān)刊[C];1997年

2 金滿(mǎn)文;韓毅;王妍;陳雷;何婷;沈紀(jì)中;辛欣;李先輝;胡燕;;五甲基槲皮素全面防治2型糖尿病的作用及機(jī)制[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議專(zhuān)刊[C];2011年

3 周水平;仝小林;;糖尿病陽(yáng)痿的研究進(jìn)展[A];糖尿病中醫(yī)研究進(jìn)展——全國(guó)第六次中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

4 黃慧;田浩明;李雄偉;;殼聚糖胰島素微球在糖尿病大鼠中的降糖作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

5 柳剛;關(guān)廣聚;亓同鋼;傅余芹;李學(xué)剛;孫云;吳濤;文蓉珠;;丹參對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制[A];第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2005年

6 ;血管緊張素-(1-7)對(duì)糖尿病大鼠腎臟影響的研究[A];2005年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

7 仝小林;劉銅華;陳良;;中醫(yī)藥防治糖尿病及其并發(fā)癥研究20年概況及展望[A];第九次全國(guó)中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

8 祁少海;劉坡;舒斌;謝舉臨;徐盈斌;黃勇;毛任翔;劉旭盛;;不同深度糖尿病大鼠燙傷模型的制備[A];第五屆全國(guó)燒傷救治專(zhuān)題研討會(huì)燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

9 韓亭亭;蘇布德格日樂(lè);胡耀敏;劉偉;;2型糖尿病大鼠在急性炎癥狀態(tài)下的反應(yīng)能力研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

10 陳向芳;劉志民;石勇銓;鄒俊杰;湯瑋;馮曉云;張貝;張?zhí)m予;陽(yáng)秋良;許娟;岳欣欣;;糖尿病大鼠“內(nèi)源性損害”的作用機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 郭賽珊　梁曉春 潘明政;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病慢性并發(fā)癥可顯著改善癥狀[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

2 本報(bào)記者 王樂(lè)羊;中西醫(yī)結(jié)合防治糖尿病大有可為[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

3 北京協(xié)和醫(yī)院 梁曉春;對(duì)中醫(yī)治糖尿病并發(fā)癥研究的思考[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2011年

4 劉燕玲;肥胖是糖尿病的源頭[N];健康報(bào);2006年

5 仝小林;糖尿病慢性并發(fā)癥論治[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2003年

6 汪敏;糖尿病皮膚易損元兇找到[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2003年

7 林蘭;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病的前景[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

8 北京協(xié)和醫(yī)院中醫(yī)科主任 梁曉春;糖尿病周?chē)窠?jīng)病變的中西醫(yī)治療進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

9 本報(bào)記者 劉艷芳;糖尿病干預(yù)不能忽視抗氧化[N];中國(guó)食品報(bào);2012年

10 譚小月;糖尿病與腎病關(guān)系研究的新進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 毛雪琴;富釩鷹嘴豆芽對(duì)糖尿病大鼠糖脂代謝及學(xué)習(xí)記憶的影響[D];山東大學(xué);2008年

2 羅禮達(dá);溫臟扶正驅(qū)邪法對(duì)2型糖尿病T淋巴細(xì)胞免疫功能影響的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

3 高泓;參芪復(fù)方調(diào)控糖尿病血管PI3-K/Akt通路的實(shí)驗(yàn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年

4 張冬梅;特發(fā)性1型糖尿病的臨床研究[D];中南大學(xué);2003年

5 王寬宇;早期離斷配合外用中藥藥膜治療糖尿病足的實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀(guān)察[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 李純;抑制神經(jīng)酰胺合成對(duì)糖尿病大鼠內(nèi)皮功能紊亂及動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響[D];中南大學(xué);2011年

7 郭志新;血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑對(duì)糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其作用機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

8 宋莉莉;糖尿病對(duì)血管性癡呆認(rèn)知功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 姜兆順;基于結(jié)構(gòu)化住院病歷采集系統(tǒng)對(duì)糖尿病及血管并發(fā)癥辨證論治規(guī)律的研究[D];中國(guó)中醫(yī)研究院;2005年

10 郝賢;降糖消脂湯對(duì)2型糖尿病大鼠胰島素抵抗影響機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高峰;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不同移植方法治療糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2009年

2 吳迪;電針治療糖尿病周?chē)窠?jīng)病的臨床觀(guān)察及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2009年

3 張紅霞;2型糖尿病患者血清tHcy水平與認(rèn)知功能障礙的關(guān)系[D];山東大學(xué);2009年

4 侯亞利;2型糖尿病患者心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化[D];蘭州大學(xué);2010年

5 袁海潑;通絡(luò)糖泰方對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠血清IL-6水平表達(dá)影響的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 張麗;2型糖尿病患者的肺功能變化及其相關(guān)因素分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

7 程晶;半導(dǎo)體激光聯(lián)合高壓電位對(duì)糖尿病大鼠血管病變作用機(jī)理研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

8 邱作成;健脾腎化瘀濁法治療糖尿病多發(fā)性周?chē)窠?jīng)病變的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2004年

9 馮智敏;糖尿病對(duì)大鼠正畸牙齒移動(dòng)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

10 鄭淑君;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1與1型糖尿病大鼠骨骼肌病變的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：1673033