本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點(diǎn)：增殖　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的膠質(zhì)瘤是成人顱內(nèi)最多見、治療最棘手的原發(fā)性腫瘤,其發(fā)病率占顱內(nèi)腫瘤的35.26%～60.96%。雖然近幾十年來隨著手術(shù)、放療、化療等治療技術(shù)的發(fā)展,腦膠質(zhì)瘤的治療取得了長足的進(jìn)步,但是總體預(yù)后較以前并沒有顯著改善。積極尋求新的針對(duì)膠質(zhì)瘤的治療方式意義重大,近年來,藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞分化、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的治療理念由于不同于傳統(tǒng)的直接殺傷治療策略而受到普遍關(guān)注,并陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多種具有誘導(dǎo)分化作用的藥物。4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)是近來新合成的一種全反式維甲酸衍生物,具有很好的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的效果,本研究應(yīng)用ATPR體外誘導(dǎo)人腦U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞,并通過不同的方法檢測(cè)其抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲性、誘導(dǎo)其分化及促進(jìn)凋亡的作用,為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的誘導(dǎo)分化治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)并尋找合適的誘導(dǎo)分化劑。 方法將U87細(xì)胞隨機(jī)分成空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組分別加入PRMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基、含二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)的PRMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基和2mmol/L的苯丁酸鈉(Sodium phenylbutyrate, SPB)處理,實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的ATPR(終濃度分別為1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8和1×10-9mol/L)處理后,以CCK-8(Cell Counting Kit8,CCK-8)法及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞增殖；Transwell法檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲性變化；Tunnel法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況,分別在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變；蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)分化指標(biāo)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)表達(dá)；流式檢測(cè)對(duì)細(xì)胞周期分布的影響。 結(jié)果1、ATPR抑制U87細(xì)胞增殖：1.1CCK-8法做細(xì)胞生長曲線顯示陰性對(duì)照組和空白組細(xì)胞生長旺盛,陽性對(duì)照組與各劑量ATPR組能夠抑制U87細(xì)胞增殖,明顯的抑制效應(yīng)出現(xiàn)在72h后,而且,隨ATPR濃度的增加,抑制程度越明顯,提示抑制效應(yīng)呈濃度相關(guān)性,72h藥物作用IC50=1.75×10-*5mol/L。1.2平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陽性對(duì)照組及10-5、10-6mol/L ATPR組細(xì)胞散在分布,未能形成有效克隆,10-7、10-8、10-9mol/LATPR組克隆形成率分別為(4.97±1.22)%、(17.65±5.17)%、(26.24±3.65)%,低于空白組(43.26±8.81)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.458、4.341、3.091,P0.05),而陰性對(duì)照組(33.26±5.40)%與空白組間無明顯差異(t=1.676,P0.05)； 2、ATPR降低U87細(xì)胞侵襲性：經(jīng)ATPR處理72小時(shí)的U87細(xì)胞侵襲性下降,Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,陽性對(duì)照組與1×10-5、1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L ATPR組細(xì)胞侵襲力下降,與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而1×10-9mol/L ATPR及陰性對(duì)照組細(xì)胞侵襲性未見明顯下降(P0.05),提示ATPR能夠有效降低U87細(xì)胞侵襲性。 3、ATPR促進(jìn)U87細(xì)胞凋亡：經(jīng)ATPR處理72小時(shí)的U87細(xì)胞凋亡增加,Tunnel實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,陽性對(duì)照組與1×10-5、1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L ATPR組細(xì)胞凋亡數(shù)增加,且隨著ATPR濃度的升高,凋亡趨勢(shì)越明顯,與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而1×10-9mol/L ATPR及陰性對(duì)照組細(xì)胞凋亡情況未見明顯改變,與空白組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示ATPR能夠促進(jìn)U87細(xì)胞凋亡。 4、ATPR阻滯U87細(xì)胞周期的進(jìn)展：陽性對(duì)照組與1×10-5、1×10-6和1×10-7mol/LATPR組處于G1/Go期細(xì)胞比例較空白對(duì)照組升高(t=8.339、5.942、4.473、2.864,P0.05),而處于DNA合成旺盛的S期細(xì)胞比例降低(t=9.946、7.209、4.627、2.868,P0.05),ATPR能夠引起U87細(xì)胞周期進(jìn)展障礙,使細(xì)胞阻滯在G1/G0期,減少進(jìn)入DNA合成期細(xì)胞比例。 5、ATPR對(duì)U87細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響：光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果顯示,細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組中U87細(xì)胞的形態(tài)相似,細(xì)胞體積及細(xì)胞核均較大,細(xì)胞核/質(zhì)比較高,細(xì)胞突起少；ATPR處理后,U87細(xì)胞形態(tài)呈成熟化,表現(xiàn)為細(xì)胞體積及細(xì)胞核縮小,突起不同程度增多,細(xì)胞核/質(zhì)比減小。且隨著ATPR濃度升高,細(xì)胞成熟趨勢(shì)越明顯。然而1×10-6mol/L組與陽性對(duì)照組形態(tài)相似,成熟化程度超過1×10-5mol/L組,電子顯微鏡下觀察結(jié)果顯示,空白和陰性對(duì)照組胞核較大,細(xì)胞器少,而陽性對(duì)照組和ATPR組細(xì)胞體積及細(xì)胞核較小,細(xì)胞突起不同程度增多,細(xì)胞器豐富,可見多量線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等,其中1×10-5mol/L ATPR組可見多量腫脹的線粒體。 6、ATPR促使U87細(xì)胞GFAP表達(dá)增強(qiáng)：蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示,陽性對(duì)照組和高濃度ATPR組GFAP蛋白的表達(dá)上調(diào),表現(xiàn)為條帶加深、變寬。結(jié)果顯示SPB、1×10-5、1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L ATPR組GFAP表達(dá)量均高于空白對(duì)照組,而10"9mol/L組與空白組差異不明顯。 結(jié)論1、ATPR能夠有效抑制U87細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡并降低其侵襲性；2、ATPR能夠阻滯U87細(xì)胞周期向前進(jìn)展,上調(diào)GFAP表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞形態(tài)成熟化；3、ATPR有望成為神經(jīng)膠質(zhì)瘤合適的誘導(dǎo)分化劑,為其臨床治療腦膠質(zhì)瘤帶來新的希望。
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【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1670482