本文選題：腦出血　切入點：TSPO　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH),為卒中的一種亞型,其發(fā)病率高,占所有卒中的第二位,每年全球約有兩百萬例腦出血發(fā)生。腦出血發(fā)病急驟,病情變化快且兇險,具有相當(dāng)高的致殘、致死率,極大威脅人類的健康。目前仍缺乏有效的治療干預(yù)措施。腦出血的損傷機(jī)制除了形成占位效應(yīng)的血腫所帶來原發(fā)性損傷,更包括如血液降解產(chǎn)物毒性、炎癥、水腫等后續(xù)繼發(fā)性損傷。近年有關(guān)實驗研究表明,神經(jīng)炎癥反應(yīng)在ICH后腦損傷進(jìn)展過程中為一個重要的部分。炎癥反應(yīng)在腦出血后迅速發(fā)生,發(fā)生發(fā)展機(jī)制涉及到原位小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、外周白細(xì)胞滲透侵入,伴隨多種炎癥介質(zhì)大量的產(chǎn)生,加重了腦損傷。由于參與的細(xì)胞及細(xì)胞因子眾多,它們之間相互作用、調(diào)節(jié),又有各自的作用,存在錯綜復(fù)雜的關(guān)系。因此研究ICH后神經(jīng)炎癥反應(yīng)相關(guān)損傷及尋找安全有效的治療措施顯得十分重要。轉(zhuǎn)運蛋白18k Da(Translocator Protein 18 k Da,TSPO),曾也叫外周型苯二氮卓類受體(Peripheral Benzodiazepine Receptor,PBR)。TSPO廣泛分布于全身多處組織,在正常狀態(tài)下的腦組織中,TSPO主要表達(dá)在膠質(zhì)細(xì)胞中,并且含量較低。當(dāng)處于缺血缺氧、炎癥、神經(jīng)毒性等病理狀態(tài)時,TSPO伴隨著膠質(zhì)細(xì)胞的激活,敏感又迅速地表達(dá)上調(diào)。并且已在多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病觀察到這一現(xiàn)象,所以,TSPO被看作是神經(jīng)炎癥反應(yīng)的一個標(biāo)志物。因此,將TSPO配體用放射性元素標(biāo)記后作為示蹤劑,通過PET成像,從而作為一種能夠深入探索、活體并實時研究神經(jīng)炎癥反應(yīng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病過程及評價治療效果的新手段。從目前現(xiàn)有的研究來看,TSPO及其配體已表現(xiàn)出在臨床上運用的良好前景。但目前TSPO的表達(dá)及其配體的運用在腦出血中領(lǐng)域尚無相關(guān)實驗研究有報道。此外,TSPO參與多種細(xì)胞生理功能,其中最主要為參與膽固醇等脂類物質(zhì)的轉(zhuǎn)運,作為限速步驟,調(diào)控并促進(jìn)神經(jīng)類固醇的合成。TSPO的部分內(nèi)源性及外源性配體,在離體或在體實驗中已證實能夠促進(jìn)神經(jīng)類固醇增多,并能減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng),作為潛在的治療手段。依替福辛(Etifoxine,EFX),作為TSPO配體中的一種,是一種臨床上使用的抗焦慮藥物。依替福辛在多發(fā)性硬化動物模型中,表現(xiàn)出抑制外周免疫細(xì)胞入侵、降低炎癥產(chǎn)物水平、促進(jìn)膠質(zhì)細(xì)胞再生的作用,并改善了神經(jīng)運動功能障礙。但目前確切的作用機(jī)制尚未闡明。本實驗建立了小鼠實驗性腦出血動物模型,第一部分將初步研究腦出血后轉(zhuǎn)運蛋白TSPO的表達(dá)情況及與炎癥反應(yīng)的關(guān)系,以為將來腦出血后活體成像、神經(jīng)炎癥反應(yīng)的在體監(jiān)測打下基礎(chǔ),第二部分研究TSPO的外源性配體依替福辛在腦出血后可能發(fā)揮的抑制炎癥反應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用,并為腦出血綜合治療提供新的方法。一、TSPO在腦出血后表達(dá)的初步研究目的通過建立小鼠實驗性腦出血動物模型,檢測腦出血后血腫周圍組織中TSPO的表達(dá)情況及部位,了解TSPO與腦出血后神經(jīng)炎癥反應(yīng)的關(guān)系。方法實驗總共分為三部分。第一部分建立自體血注入法小鼠實驗性腦出血模型,將實驗動物分為假手術(shù)組、15μl出血量組、25μl出血量組,于術(shù)后1d進(jìn)行神經(jīng)功能評分及磁共振掃描。第二部分將留取上述各組小鼠腦組織,并留取25ul出血量組小鼠在術(shù)后12h,1d,3d,5d的腦組織,用于Western Blot檢測TSPO的表達(dá)。第三部分將25ul出血量組小鼠腦組織在術(shù)后12h,1d,3d,5d用于免疫熒光組化檢測TSPO在小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)。結(jié)果1.磁共振結(jié)果成功建立小鼠實驗性腦出血模型,在術(shù)后1d時,25μl出血組小鼠的神經(jīng)功能障礙明顯重于15μl出血組小鼠。2.Western Blot結(jié)果表明,15μl出血量組及25μl出血量組TSPO表達(dá)較Sham組明顯升高,25μl出血量組的TSPO表達(dá)多于15μl出血量組;25μl出血量組在術(shù)后12h時,TSPO表達(dá)增多不明顯,但在術(shù)后1d、3d、5d逐漸增加。3.免疫熒光結(jié)果表明,TSPO的表達(dá)在術(shù)后明顯增加,主要表達(dá)在激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞上。結(jié)論TSPO在小鼠腦出血后的表達(dá)有明顯增多,表達(dá)量與術(shù)后時間、出血量有一定關(guān)系,還可能與疾病嚴(yán)重程度有關(guān),TSPO主要表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞上,提示了TSPO的表達(dá)可能與腦出血后神經(jīng)炎性反應(yīng)有密切的關(guān)系。二、Etifoxine在腦出血后腦保護(hù)作用的初步研究目的通過建立小鼠實驗性腦出血動物模型,觀察小鼠腦出血后的腦損傷表現(xiàn),初步探討依替福辛對腦出血的神經(jīng)保護(hù)作用。方法1.將實驗動物隨機(jī)分成假手術(shù)組(Sham)、腦出血組(ICH組)、腦出血+依替福辛組(ICH+EFX組)。ICH+EFX組于術(shù)后6h完成首次給藥,采用腹腔注射EFX(50mg/kg),并每天給藥,總共5日。Sham組和ICH組給予等體積溶劑作為對照。2.各組于術(shù)前、術(shù)后每日給藥前稱量并記錄體重。3.各組于術(shù)后1d、3d、5d進(jìn)行神經(jīng)運動功能障礙評分。4.采用干濕法測量腦組織含水量及伊文思藍(lán)法檢測血腦屏障通透性。5.采用ELISA測量各組血清中TNF-α及IL-1β水平。結(jié)果1.ICH可導(dǎo)致小鼠體質(zhì)量下降,引起急性腦水腫、血腦屏障破壞、神經(jīng)炎癥反應(yīng)及運動神經(jīng)功能障礙。2.依替福辛緩解了ICH后小鼠體質(zhì)量的降低,減輕了腦組織水腫,降低了IL-1β炎癥因子水平,改善神經(jīng)功能障礙,但對于血腦屏障通透性的保護(hù)卻不明顯。結(jié)論TSPO配體依替福辛具有神經(jīng)保護(hù)作用,可緩解小鼠ICH后體質(zhì)量下降、腦水腫程度,降低外周血腫炎癥因子水平,并一定程度改善小鼠神經(jīng)運動功能缺損�？赡苁俏磥砟X出血綜合治療的一種選擇。
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【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.34

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本文編號：1661210