本文選題：藤梨根提取物　切入點(diǎn)：膠質(zhì)瘤　出處：《武漢大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景腦膠質(zhì)瘤約占各種顱內(nèi)腫瘤的50%,其發(fā)病原因尚不十分清楚。各級別膠質(zhì)瘤的中位生存時間差別很大,其中低級別膠質(zhì)瘤(WHO Ⅰ、Ⅱ級)的中位生存時間為5-8年；高級別膠質(zhì)瘤(WHOⅢ、Ⅳ級)又稱為惡性膠質(zhì)瘤,星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤(WHO Ⅲ級)的中位生存時間為3年;Ⅳ級的中位生存時間僅有12～18個月,高齡(60歲以上)患者中位生存期更短。目前對于膠質(zhì)瘤的起源有兩種學(xué)說：1、腫瘤細(xì)胞由正常神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞起源：當(dāng)其分化失調(diào)后變成不成熟的膠質(zhì)細(xì)胞；2、腫瘤細(xì)胞起源于神經(jīng)干細(xì)胞。1992年,Reynolds[3]等首次在成年小鼠紋狀體中分離得到神經(jīng)干細(xì)胞,神經(jīng)腫瘤干細(xì)胞的學(xué)說逐漸引起學(xué)術(shù)界科研人員重視。后來的研究發(fā)現(xiàn)人類成熟或發(fā)育中的中樞神經(jīng)組織中存在部分休眠狀態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞,這類細(xì)胞同樣具有無限增殖、自我更新和分化潛能,這就決定著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和對各種治療敏感性等。當(dāng)中樞神經(jīng)受損時,這些休眠狀態(tài)下的神經(jīng)干細(xì)胞會發(fā)生一定程度的增殖分化,但卻不能完全修復(fù)損傷,其具體機(jī)制不明。事實(shí)上,對于膠質(zhì)瘤的真正起源,目前還沒有定論,在腦的膠質(zhì)瘤動物模型研究中發(fā)現(xiàn),經(jīng)過特定基因改造處理的成熟的星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)祖細(xì)胞(星形膠質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞)均有可能發(fā)展成為膠質(zhì)瘤。腫瘤細(xì)胞一旦發(fā)生,其就具有了高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高死亡率和低治愈率的特點(diǎn)。幾乎所有膠質(zhì)瘤都具備侵襲和轉(zhuǎn)移的內(nèi)在特性。腫瘤細(xì)胞能夠經(jīng)血管和有髓纖維路徑向周圍或者更遠(yuǎn)的地方遷徙。膠質(zhì)瘤的生物學(xué)特性使得絕大部分手術(shù)患者的術(shù)后生存期極為短暫�，F(xiàn)在,雖然顯微手術(shù)技術(shù)已經(jīng)極大改善了膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后,但目前的手術(shù)方式還只能達(dá)到影像學(xué)意義上的腫瘤全切,但無法徹底清除腫瘤細(xì)胞,手術(shù)后放化療仍是最為普遍接受的治療方式。然而腫瘤細(xì)胞對放療的耐受性很可能造成殘余病灶再復(fù)發(fā)。此外,由于常規(guī)化療藥物效果不佳,免疫療法、基因療法等治療新策略仍處于實(shí)驗(yàn)階段等原因,臨床仍然缺乏滿意的治療手段。如何提高膠質(zhì)瘤的綜合治療效果,降低腫瘤復(fù)發(fā)率,延長患者生存時間,是當(dāng)前膠質(zhì)瘤研究的關(guān)鍵問題。中藥在腫瘤發(fā)生、發(fā)展等多個環(huán)節(jié)具有顯著作用,具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多效應(yīng)等特點(diǎn),它在抑制、殺傷腫瘤細(xì)胞、改善患者癥狀與體征,以及減輕患者放化療不良反應(yīng)、延長患者生存期等方面表現(xiàn)出重要的作用,同時,還具有不良反應(yīng)少,改善機(jī)體免疫力,不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn),中藥的抗腫瘤作用研究已受到越來越多學(xué)者的重視。近年來,從細(xì)胞增殖抑制和凋亡等角度來探討中藥抗腫瘤的作用機(jī)制已成為研究的熱點(diǎn)。藤梨根是臨床上治療大腸癌的常用中藥,有較確切的抗癌癥效果,其抗腫瘤活性倍受人們關(guān)注,對肝癌、食管癌、胃癌也有明顯的抑制作用,但對腦膠質(zhì)瘤的作用目前研究較少,因此開展藤梨根對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞影響的研究,并闡明其作用機(jī)制,可以為藤梨根在抗腦膠質(zhì)瘤方面的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。由于藤梨根分布廣泛、易于種植、資源豐富、價(jià)格低廉,研究開發(fā)其抗腫瘤新藥生產(chǎn)成本較低,故具有較好的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。因此,本課題進(jìn)行藤梨根對人腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞的影響及其機(jī)制的研究。本課題分為三部分進(jìn)行研究：1)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究藤梨根對人腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞凋亡的作用； 2)藤梨根對人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞細(xì)胞周期的作用；3)藤梨根對人腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞STAT3信號通路的作用。第一部分藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤的抑制作用目的：探討藤梨根提取物對人腦膠質(zhì)瘤的作用。方法：1)采用倒置顯微鏡觀察不同濃度藤梨根提取物對培養(yǎng)孔內(nèi)的腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化的影響,并采用Hoechst33258熒光染色觀察細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)改變、核固縮、細(xì)胞膜皺縮、凋亡小體等。2)采用MTT法檢測不同濃度藤梨根提取物對腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞的抑制作用。3)采用CCK-8法檢測經(jīng)不同濃度藤梨根提取物作用48小時后的腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞活性改變。4)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤的抑制作用。結(jié)果：1、藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖有抑制作用在U251及U87細(xì)胞中,使用藤梨根組細(xì)胞增殖率明顯低于對照組(P0.05)2、藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制作用具有濃度依賴性藤梨根提取物在單位時間內(nèi)處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞后細(xì)胞增殖率明顯降低,且隨著藥物濃度增加,增殖率逐漸降低(P0.05)。3、藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖抑制作用無時間依賴性同一濃度藤梨根提取物作用膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h、48h、72h后,細(xì)胞增殖率變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤生長有抑制作用接種U251細(xì)胞于裸鼠腦內(nèi),使用藤梨根提取物及對照治療小鼠,使用藤梨根提取物組腫瘤明顯小于對照組(P0.05)。結(jié)論：藤梨根提取物可以抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及腫瘤生長。第二部分藤梨根提取物通過調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖目的：探討藤梨根提取物對腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞周期的作用。方法：藤梨根提取物處理腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞24h,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的影響。免疫印跡技術(shù)檢測BCL-2和BAX表達(dá)量的改變。結(jié)果：1、不同濃度藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h對細(xì)胞周期的作用藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后細(xì)胞周期發(fā)生改變,細(xì)胞被阻滯在G1期,且隨著藤梨根提取物濃度增加,阻滯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、不同濃度藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h對BCL-2及BAX的作用不同濃度藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后BCL-2表達(dá)量降低,BAX表達(dá)量升高,且隨著藥物濃度增加,BCL-2/BAX比值變小(P0.05)。3、BCL-2及BAX可以調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中BCL-2及BAX表達(dá)量,可以調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖。4、在藤梨根提取物處理的U251細(xì)胞中高表達(dá)BCL-2或者低表達(dá)BAX,可以逆轉(zhuǎn)藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤的作用使用myc-BCL-2高表達(dá)BCL-2或者siBAX敲低BAX后,藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的作用消失了。結(jié)論：藤梨根提取物通過調(diào)控BCL-2和BAX調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期,使其阻滯于G1期。第三部分藤梨根提取物通過調(diào)節(jié)STAT3信號通路調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期目的：探討藤梨根提取物調(diào)控腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞增殖的機(jī)制。方法：免疫印跡技術(shù)檢測不同濃度藤梨根提取物處理腦膠質(zhì)瘤U251及U87細(xì)胞后STAT3及P-STAT3蛋白表達(dá)量變化。熒光定量PCR檢測不同濃度藤梨根提取物處理腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞后STAT3的mRNA表達(dá)量變化。結(jié)果：1、不同濃度藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后STAT3及P-STAT3蛋白表達(dá)量變化藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后,細(xì)胞的STAT3及P-STAT3蛋白表達(dá)量降低,且隨著藥物濃度增加逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、不同濃度藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后STAT3的mRNA表達(dá)量變化藤梨根提取物處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞24h后,細(xì)胞的STAT3的mRNA表達(dá)量降低,且隨著藥物濃度增加逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、STAT3可以調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖及BCL-2和BAX表達(dá)量高表達(dá)STAT3,膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng),低表達(dá)STAT3,膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力減弱4、在藤梨根提取物處理的U251細(xì)胞中高表達(dá)STAT3可以逆轉(zhuǎn)藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及BCL-2和BAX的作用使用Flag-STAT3高表達(dá)STAT3后,藤梨根提取物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖作用及對BCL-2和BAX的作用消失了。結(jié)論：藤梨根提取物通過調(diào)控STAT3磷酸化及STAT3mRNA表達(dá)調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞增殖。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41

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本文編號：1620538