本文選題：癲癇　切入點：匹羅卡品　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 在本研究小組的前期研究證實實驗性癲癇誘發(fā)前予以經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激預(yù)處理可能通過增高谷氨酸脫羧酶（GAD）而起到抗癲癇作用的基礎(chǔ)上。本實驗中我們通過觀察經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激（TNS）處理對匹羅卡品誘發(fā)的癲癇大鼠海馬區(qū)細胞因子IL-1β和TNF-α的表達、小膠質(zhì)細胞的活化、癲癇大鼠的癲癇行為以及空間學(xué)習(xí)記憶能力的改變，以期探討經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激對實驗性癲癇的治療作用、可能炎性機制及經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激對實驗性癲癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。 方法 本實驗分為兩部分： 第一部分：選擇清潔健康雄性SD大鼠120只，隨機分成正常對照組（control組）30只和實驗組（experiment組）90只。給予實驗組大鼠皮下注射匹羅卡品以建立癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）模型，同時給予對照組大鼠皮下注射同等計量的生理鹽水。6h后將實驗組大鼠隨機分成單純匹羅卡品模型組（pilo組）和經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激組（TNS組）各45只，分別給予假刺激和電刺激處理。4周后再次給予pilo組和TNS組進行匹羅卡品致癇。用酶聯(lián)免疫吸附（Elisa）的方法檢測三組大鼠海馬組織IL-1β、TNF-α的蛋白含量；免疫組化的方法觀察小膠質(zhì)細胞活化情況。 第二部分：選擇清潔健康雄性SD大鼠30只，，同樣隨機分成正常對照組（control組）、單純匹羅卡品組（pilo組）和經(jīng)皮三叉神經(jīng)電刺激組（TNS組）各10只。給予pilo組和TNS組大鼠皮下注射匹羅卡品以建立SE模型，同時給予對照組大鼠皮下注射同等計量的生理鹽水。然后分別給予pilo組和TNS組連續(xù)4周假刺激和TNS處理。同時，SE模型建立2周后，視頻監(jiān)測三組大鼠自發(fā)性發(fā)作（SRS）的頻率以及每次發(fā)作的持續(xù)時間，每天監(jiān)測6小時，連續(xù)監(jiān)測兩周。電刺激處理4周完成后，各組大鼠進行Morris水迷宮實驗以檢測其空間學(xué)習(xí)記憶能力。 結(jié)果 第一部分： 1. pilo組和TNS組實驗大鼠再次匹羅卡品致癇后，TNS組大鼠較pilo組癇性發(fā)作嚴重程度減輕，持續(xù)時間較短,死亡率降低（P0.05，p0.01）；實驗大鼠SE后，分別給予pilo組和TNS組連續(xù)4周的假刺激和TNS處理，之后再次匹羅卡品致癇，結(jié)果pilo組5只大鼠(SRM=1.391)、TNS組2只大鼠在發(fā)作中死亡(SRM=0.591)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。再次匹羅卡品致癇后TNS組大鼠癇性發(fā)作程度較pilo組輕，且持續(xù)時間較短（TNS組平均分為1.8±0.4分，持續(xù)時間13.2±5.2min,pilo組平均分為3.5±0.9分，持續(xù)時間16.4±5.8min），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05，P0.01）。 2.各時間點TNS組大鼠海馬IL-1β和TNF-α含量分別相應(yīng)較pilo組顯著降低（P0.05，p0.01）;正常對照組大鼠海馬IL-1β、TNF-α蛋白含量甚微。pilo組和TNS組實驗大鼠SE后24h均即可檢測出海馬中含量顯著升高IL-1β和TNF-α，72h節(jié)點達高峰，至癲癇發(fā)作后28天，雖含量降低，但仍可檢測出較正常對照組顯著增高（P0.05，P0.01）。TNS組的IL-1β和TNF-α含量變化走勢與Pilo組基本一致。在癲癇發(fā)作后的24h、48h、72h、7d、14d及28d節(jié)點，TNS組大鼠海馬IL-1β和TNF-α含量雖較正常對照組均顯著增高，但較pilo組均顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05，P0.01）。 3. TNS組活性小膠質(zhì)細胞在各時間點的數(shù)量分別相應(yīng)較pilo組均明顯減少（P0.05，p0.01）;對照組大鼠海馬區(qū)Iba1（小膠質(zhì)細胞標志物）陽性細胞表達較少，胞體呈圓形或橢圓形，突起較少。pilo組和TNS組Iba1陽性細胞著色較深，部分細胞胞體演變成狹長狀及梭狀，突起增多、增粗，以致癇后第3天最為明顯。pilo組隨癲癇發(fā)作后各時間點的延長，呈快速增加趨勢(P㩳0.01)，TNS組的變化趨勢與pilo組相一致。與pilo組比較，TNS組活化的小膠質(zhì)細胞的數(shù)量在各時間點均明顯減少（P0.05，P㩳0.01）。 第二部分： 1. TNS處理減少了SRS發(fā)生的頻率、降低了發(fā)作嚴重程度并縮短了發(fā)作時間（P0.05，p0.01）；當建立SE模型并刺激處理2周后，開始視頻監(jiān)測三組實驗大鼠的SRS。結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常對照組大鼠在整個實驗過程中均未見任何異常行為；TNS組大鼠SRS發(fā)作頻率顯著少于pilo組大鼠（TNS組發(fā)作頻率為1.4±0.3次/24h，Pilo組發(fā)作頻率為3.8±0.6次/24h）、每次發(fā)作持續(xù)時間顯著縮短（TNS組SRS平均持續(xù)時間為15±6min，Pilo組大鼠SRS平均持續(xù)時間為35±12min）、癲癇發(fā)作級別較低（TNS組平均分為1.8±0.2分，pilo平均分為3.2±0.3分）（P0.05或P0.01）。 2.TNS處理縮短了大鼠水迷宮試驗逃避潛伏期，提高大鼠在目標象限的航行時間百分比（P0.05，p0.01）；在大鼠水迷宮獲得性訓(xùn)練試驗中，隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，各組實驗動物尋找水下平臺的時間逐漸縮短，在平臺象限搜索的時間和航行的距離也有所改變。獲得性訓(xùn)練的1d,2d,3d,4d和5d,pilo組大鼠平均逃避潛伏期較正常對照組均顯著延長（P0.01），而各時間點TNS組大鼠平均逃避潛伏期卻較pilo組大鼠顯著縮短（P0.05，P0.01）。在第6天的空間探索試驗中，pilo組大鼠較正常對照組試驗大鼠60s內(nèi)在目標象限搜索的時間百分比、航行距離百分比及穿越平臺的次數(shù)均顯著降低（P0.01），TNS組實驗大鼠60s內(nèi)在目標象限搜索的時間百分比及航行距離百分比與pilo組相比顯著較高（P0.05），穿越平臺的次數(shù)較pilo組多（P0.01）。 結(jié)論 建立匹羅卡品癲癇模型后，經(jīng)皮電刺激其三叉神經(jīng)的眼支，可有效減輕匹羅卡品致癇后自發(fā)性發(fā)作、有效降低大鼠海馬區(qū)IL-1β和TNF-α含量、抑制小膠質(zhì)細胞活化并顯著改善癲癇大鼠受損的空間學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)合以往的研究結(jié)果提示TNS通過提高了癲癇發(fā)作的閾值發(fā)揮顯著的抗癲癇作用，其機制可能與其下調(diào)炎性因子IL-1β和TNF-α及減輕小膠質(zhì)細胞的活化有關(guān)。本實驗結(jié)果為癲癇機理探索及癲癇臨床治療手段選擇提供借鑒作用。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R742.1

【參考文獻】

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本文編號：1620364