本文選題：腦梗死　切入點(diǎn)：急性期高血糖　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：缺血性腦血管病有高發(fā)病率、高致殘率以及高死亡率三大特征,嚴(yán)重危害人類健康,成為重點(diǎn)防治對(duì)象。腦梗死急性期高血糖是臨床上常見現(xiàn)象,血糖水平與患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后息息相關(guān),血糖過高或者過低都惡化病情,影響預(yù)后。非糖尿病腦梗死患者急性期高血糖水平對(duì)腦的影響是神經(jīng)病學(xué)長(zhǎng)期頗具爭(zhēng)議的研究,急性期高血糖水平與腦損傷程度的關(guān)系及其機(jī)制目前均無定論。所以本實(shí)驗(yàn)針對(duì)急性期高血糖,探討非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖對(duì)腦損傷及其神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的影響,試圖能為臨床上對(duì)于急性期最佳血糖目標(biāo)的制定起一定的參考作用。 溶栓治療是目前國際公認(rèn)的治療腦梗死唯一確切有效的方法,能使栓塞的血管再通。但已有研究證明,急性期高血糖增加腦梗死患者溶栓后的出血危險(xiǎn),增加死亡率。近年來研究發(fā)現(xiàn),腦梗死后海馬存在神經(jīng)再生現(xiàn)象,能啟動(dòng)自身的內(nèi)源性修復(fù)機(jī)制,減少梗死體積,改善預(yù)后。葡萄糖作為大腦的唯一能量來源,在這個(gè)過程中起著至關(guān)重要的作用。但非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖在這方面的研究還不多見。非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖是否通過影響梗死性腦損傷后海馬神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力從而限制了大腦的這種自身修復(fù)能力,使得腦梗死后腦缺血缺氧性損傷更嚴(yán)重?因此本實(shí)驗(yàn)?zāi)M非糖尿病腦梗死后急性期高血糖狀態(tài),采用免疫熒光和免疫印跡的方法研究急性期高血糖對(duì)腦梗死后海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖以及海馬CREB磷酸化的影響。試圖讓非糖尿病性腦梗死的病理機(jī)制能從另外一個(gè)角度得到闡釋,為腦梗死患者提供另一方面的參考,神經(jīng)干細(xì)胞替代治療能否改善急性期高血糖對(duì)缺血性腦損傷的影響。 第一章非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖水平與腦損傷程度的關(guān)系 目的： 建立一種方便、快捷、血糖水平穩(wěn)定的非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖的穩(wěn)定模型,并探討急性期高血糖水平和非糖尿病大鼠梗死性腦損傷的關(guān)系。 方法： 1、大鼠MCAO模型的制備：采用經(jīng)典線栓法制備腦缺血(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,缺血90min,再灌注24h。 2、大鼠MCAO后急性期高血糖模型的制備：采用腹腔注射的給藥方式,依次在MCAO前5min、MCAO后45min和90min三個(gè)時(shí)間點(diǎn),給予50%葡萄糖溶液制備腦梗死后急性期高血糖模型,并使用快速血糖儀分別在MCAO后30min、75min和120min剪尾測(cè)血糖水平變化。 3、不同急性期高血糖水平的誘導(dǎo)及實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常血糖對(duì)照組(NG組)、高血糖1組(HG1組)和高血糖2組(HG2組)；三組給藥量分別為：第一次：2ml/Kg、2.5ml/Kg、8ml/Kg;第二、三次均為2ml/Kg。各組目標(biāo)血糖值為4-5mmol/L、10mmol/L和20mmol/L左右。給予0.9%注射用生理鹽水作為對(duì)照組。 4、評(píng)價(jià)指標(biāo)：腦梗死后24h采用Zea Longa改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分評(píng)估大鼠行為學(xué)變化和TTC染色測(cè)量腦梗死灶以了解不同急性期高血糖水平對(duì)梗死性腦損傷的影響。 結(jié)果： 1、各組大鼠血糖水平均從差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基礎(chǔ)血糖水平(P0.05)達(dá)到組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)的目標(biāo)血糖(mmol/L)水平,如下,NG組：4.94±0.27～4.44±0.70,HG1組：5.66±0.87～10.05±1.38,HG2組：5.3±1.12～19.87±2.30。各組組內(nèi)MCAO后30min、75min和120min各時(shí)間點(diǎn)血糖水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說明各組大鼠MCAO后急性期高血糖水平穩(wěn)定,并維持到MCAO后120min內(nèi)。 2、各組大鼠MCAO后24h Zea Longa評(píng)分(分)：NG組：1.4±0.55,HG1組：2.0±0.71,HG2組：2.8±0.45。HG2組與HGl組和NG組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009和P=0.02)。NG組和HG1組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.126)。 3、各組大鼠MCAO后24h腦梗死體積百分比(%)：NG組：21.48±2.40；HG1組：29.85±6.87；HG2組：49.16±10.50。HG2組與HG1組和NG組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.030和P=0.009)。HG1組與NG組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.126)。 4、Pearson相關(guān)分析：急性期高血糖與腦梗死容積相關(guān)系數(shù)為0.857(P=0.000)；急性期高血糖與神經(jīng)功能缺損評(píng)分相關(guān)系數(shù)為0.727(P=0.000)；梗死體積與神經(jīng)功能缺損評(píng)分相關(guān)系數(shù)為0.815(P=0.000)。 結(jié)論： 1、采用經(jīng)典線栓法制備MCAO模型結(jié)合腹腔注射50%葡萄糖溶液可以建立非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖的穩(wěn)定模型； 2、非糖尿病的輕度急性期高血糖(10mmol/L)不加重缺血性腦損傷； 3、非糖尿病的重度急性期高血糖(20mmol/L)加重缺血性腦損傷。 4、非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖與腦損傷程度成正相關(guān)關(guān)系。 第二章非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖對(duì)海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的影響 目的： 探討急性期血糖水平對(duì)非糖尿病大鼠梗死性腦損傷后海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的影響。 方法： 1、采用經(jīng)典線栓法制備MCAO模型結(jié)合腹腔注射50%葡萄糖溶液建立非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖的穩(wěn)定模型,并采用Zea Longa改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分評(píng)估模型成功與否； 2、海馬增殖細(xì)胞標(biāo)記：采用腹腔注射BrdU (300mg/Kg)的方法標(biāo)記海馬增殖的細(xì)胞； 3、海馬增殖細(xì)胞的檢測(cè)：采用BrdU和DCX免疫熒光雙標(biāo)分別計(jì)數(shù)海馬BrdU+細(xì)胞和BrdU+/DCX+細(xì)胞數(shù)。用BrdU+細(xì)胞數(shù)評(píng)估大鼠缺血性腦損傷后急性期海馬細(xì)胞增殖情況；用BrdU+/DCX+對(duì)增殖的細(xì)胞進(jìn)行定性,即可用于評(píng)估神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況。 結(jié)果： 1、海馬BrdU+細(xì)胞數(shù)：MCAO后24h,大鼠腦缺血同側(cè)海馬的BrdU+細(xì)胞主要分布在齒狀回。HG2組細(xì)胞數(shù)最少,與NG組和HG1組差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。HG1組和NG組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 2、海馬BrdU+/DCX+細(xì)胞數(shù)：MCAO后24h,大鼠腦缺血同側(cè)海馬增殖的神經(jīng)干細(xì)胞主要分布在齒狀回。HG2組較NG組和HG1組顯著減少,差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),NG組和HG1組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 結(jié)論： 1、非糖尿病大鼠MCAO后急性期,輕度的急性期高血糖對(duì)腦缺血同側(cè)齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞可能有保護(hù)作用； 2、非糖尿病大鼠MCAO后急性期,重度的急性期高血糖減弱腦缺血同側(cè)齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力,可能加重缺血性腦損傷。 第三章非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖對(duì)海馬CREB磷酸化的影響 目的： 探討急性期高血糖對(duì)非糖尿病大鼠梗死性腦損傷后海馬CREB磷酸化的影響。 方法： ①采用經(jīng)典線栓法制備MCAO模型結(jié)合腹腔注射50%葡萄糖溶液建立非糖尿病大鼠腦梗死后急性期高血糖的穩(wěn)定模型,并采用Zea Longa改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分評(píng)估模型成功與否； ②海馬增殖細(xì)胞標(biāo)記：采用腹腔注射BrdU (300mg/Kg)的方法標(biāo)記海馬增殖的細(xì)胞； ③海馬增殖細(xì)胞p-CREB的檢測(cè)：采用BrdU和p-CREB免疫熒光雙標(biāo)的方法計(jì)數(shù)BrdU+/p-CREB+細(xì)胞數(shù),評(píng)估海馬增殖的神經(jīng)干細(xì)胞p-CREB表達(dá)變化情況； ④海馬CREB蛋白磷酸化的檢測(cè)：采用免疫印跡(Western blot, WB)檢測(cè)海馬CREB和p-CREB蛋白水平。 結(jié)果： 1、海馬BrdU+細(xì)胞分布及數(shù)量：大鼠腦缺血同側(cè)BrdU+細(xì)胞也主要分布在海馬齒狀回區(qū)。HG2組的BrdU+細(xì)胞數(shù)為11.00±1.00個(gè),較NG組和HG1組顯著減少,差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),NG組和HG1組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 2、海馬BrdU+/p-CREB+細(xì)胞分布及數(shù)量：大鼠腦缺血同側(cè)海馬BrdU+/p-CREB+細(xì)胞主要分布海馬齒狀回,HG2組細(xì)胞數(shù)為3.00±1.00個(gè),較NG組和HG1組減少,差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),NG組和HG1組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。 3、腦缺血同側(cè)海馬組織CREB蛋白和p-CREB蛋白水平變化：三組海馬均表達(dá)CREB和p-CREB蛋白,含量均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異(p0.01)；HG2組p-CREB和CREB蛋白含量的比率明顯低于NG組和HG1組,差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。HG1組和NG組則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異(p0.05) 結(jié)論： 1、CREB信號(hào)通路在神經(jīng)干細(xì)胞的增殖調(diào)控方面起重要作用,主要與其磷酸化比率有關(guān)。 2、非糖尿病大鼠MCAO后急性期高血糖對(duì)腦缺血同側(cè)海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的影響可能與CREB信號(hào)通路密切相關(guān),可能為p-CREB/CREB比值調(diào)控。
[Abstract]:Ischemic cerebrovascular disease with high incidence, high morbidity and high mortality of the three major characteristics, serious harm to human health, has become the key objects of prevention and treatment of acute cerebral infarction. Hyperglycemia is a common clinical phenomenon, is closely related to blood glucose level and the severity and prognosis of blood glucose is too high or too low, disease progression, prognostic effect of high. Blood glucose levels in nondiabetic patients with acute cerebral infarction of the brain is on long-term neurology controversial, the relationship between the acute high blood glucose level and the severity of brain injury and its mechanism are currently inconclusive. So this experiment for acute hyperglycemia, to investigate the effect of acute cerebral infarction in non diabetic rats after hyperglycemia on brain injury and neural stem cell proliferation, to the clinical in the acute phase of optimal glycemic targets play a certain reference role.
Thrombolytic therapy is currently considered the only effective method for the treatment of cerebral infarction, can cause embolism recanalization. But studies have shown that acute hyperglycemia increases the risk of bleeding in patients with cerebral infarction after thrombolysis, increase the mortality. Recent studies have found that cerebral infarction in Houhai Ma Cun in nerve regeneration phenomenon, can activate the endogenous repair mechanism itself the reduction of infarct volume and improve prognosis. Glucose as the sole source of energy for the brain, plays a crucial role in this process. But the research on this aspect of hyperglycemia in acute phase of cerebral infarction in diabetic rats is rare. Non diabetic rats after cerebral infarction acute hyperglycemia cerebral infarction is affected by after the injury of hippocampal neural stem cell proliferation which limits the brain the ability to repair itself, so after cerebral infarction ischemia hypoxia injury due to more serious? Simulation of hyperglycemia in acute non diabetic cerebral infarction after this experiment, using immunofluorescence and Western blot method to study the acute effects of hyperglycemia on the hippocampal CREB phosphorylation and cell proliferation of hippocampal neural stem after cerebral infarction. Try to make the pathological mechanism of non diabetic cerebral infarction can be explained from another angle, another the reference for the patients with cerebral infarction, neural stem cell replacement therapy can improve effect of acute hyperglycemia on ischemic brain injury.
Chapter 1 Relationship between the level of hyperglycemia and the degree of brain injury in the acute stage of cerebral infarction in non diabetic rats
Objective:
Objective to establish a convenient, quick, stable model of hyperglycemia in acute phase of cerebral infarction in non-diabetic rats after stable blood glucose level, and to explore the relationship between acute hyperglycemia and infarcted brain injury in non-diabetic rats.
Method錛，

本文編號(hào)：1583555