本文選題：α-synuclein　切入點(diǎn)：星形膠質(zhì)細(xì)胞　出處：《中南大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：研究過表達(dá)α-synuclein野生型和突變型(A53T、A30P)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte, AST)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基系統(tǒng)及細(xì)胞凋亡的影響。 方法：分離培養(yǎng)和純化新生1-3天SD大鼠皮質(zhì)區(qū)的AST,用免疫熒光的方法對(duì)其進(jìn)行鑒定(GFAP), Western blot檢測(cè)AST內(nèi)源性α-synuclein的表達(dá)。用293FT細(xì)胞對(duì)前期已經(jīng)構(gòu)建好的(WT、A30P、 A53T)α-synuclein-HA-FUIGW-GFP、GFP-fuigw質(zhì)粒進(jìn)行慢病毒包裝,收獲病毒上清后分別感染AST,分為過表達(dá)野生型組(WT組)、A30P組、A53T組和對(duì)照組(FUIGW組)。5-7天后免疫熒光及Western blot檢測(cè)AST中(WT、A30P、A53T) α-synuclein-HA融合蛋白的表達(dá)。衣霉素處理AST6小時(shí)作為陽性對(duì)照組,Western blot檢測(cè)各組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)蛋白BIP、CHOP的變化；免疫熒光檢測(cè)各組GM130觀察高爾基體形態(tài)的變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率的變化。 結(jié)果：1)星形膠質(zhì)細(xì)胞有內(nèi)源性α-synuclein的表達(dá)。 2)慢病毒感染AST5-7天后免疫熒光及Western blot可檢測(cè)到過表達(dá)野生型組(WT組)、A30P組、A53T組α-synuclein-HA融合蛋白的表達(dá),而FUIGW組未檢測(cè)至α-ynuclein-HA融合蛋白的表達(dá)。 3)過表達(dá)野生型組(WT組)、A30P組、A53T組BIP、CHOP指標(biāo)明顯高于對(duì)照組(FUIGW組)(P0.05)；過表達(dá)野生型組(WT組)與A30P組、A53T組相比BIP、CHOP表達(dá)無顯著性差異(P0.05)。 4)過表達(dá)野生型組(WT組)與A30P組、A53T組的高爾基體分散在細(xì)胞質(zhì)中,囊泡碎裂；對(duì)照組(FUIGW組)高爾基體分布在細(xì)胞核一側(cè),囊泡完整無碎裂。經(jīng)χ2檢驗(yàn),過表達(dá)野生型組(WT組)、A30P組、A53T組的高爾基體碎裂百分比明顯高于對(duì)照組(FUIGW組)(P0.01)；過表達(dá)野生型組(WT組)與A30P組、A53T組的高爾基體碎百分比差異無顯著性(P0.05)。 5)過表達(dá)野生型組(WT組)、A30P組、A53T組的AST凋亡率明顯高于對(duì)照組(FUIGW組)(P0.01)；過表達(dá)野生型組(WT組)與A30P組、A53T組的AST凋亡率差異無顯著性(P0.05)。 結(jié)論： 過表達(dá)a-synuclein野生型和突變型(A53T、A30P)可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體系統(tǒng)損傷誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:Aim: to study the effects of overexpression of 偽 -synuclein wild type and mutant A53TnA30P on the endoplasmic reticulum Golgi system and apoptosis of astrocyte astrocyte (AST). Methods: AST3 was isolated and purified from the cortex of neonatal Sprague-Dawley rats (1-3 days), and identified by immunofluorescence. The expression of AST endogenous 偽 -synuclein was detected by Western blot. The previously constructed plasmids were packaged using 293FT cells for the slow virus packaging of the previously constructed plasmids, named as WTA30P, A53T) 偽 -synuclein-HA-FIGW-GFPFPGFP-fuigw, and the expression of 偽 -synuclein-HIGW-GFPGFP-fuigw plasmid was detected by Western blot. The virus supernatants were infected with ASTand were divided into two groups: overexpression wild-type group and control group FUIGW group. Immunofluorescence and Western blot were used to detect the expression of 偽 -synuclein-HA fusion protein in AST after treatment with AST6 for hours. The changes of endoplasmic reticulum stress index protein (BIP-CHOP) were detected by Western blot. The changes of Golgi body morphology and apoptosis rate were detected by immunofluorescence and flow cytometry respectively. Results: 1) Endogenous 偽-synuclein was expressed in astrocytes. 2) the expression of 偽 -synuclein-HA fusion protein was detected by immunofluorescence and Western blot on day after lentivirus infection in wild type AST5-7 group, while the expression of 偽 -ynuclein-HA fusion protein was not detected in FUIGW group. (3) the expression of BIP-CHOP in wild type group was significantly higher than that in control group (P 0.05), and that in wild type group was not significantly different from that in group A30P group (P 0.05), and that in wild type group was higher than that in group A30P group (P < 0.05). 4) the Golgi body of the over-expressed wild type group (WT group) and A30P group (A53T group) were dispersed in the cytoplasm, and the vesicles of the control group (FUIGW group) were scattered in the cytoplasm. The percentage of Golgi body fragmentation in the over-expressed wild type group was significantly higher than that in the control group (FUIGW group) and the wild type group (WT group), and there was no significant difference in the percentage of Golgi body fragmentation between the over-expressed wild type group and the A30P group (P 0.05). 5) the apoptosis rate of AST in the wild type group was significantly higher than that in the control group (P 0.01), and there was no significant difference in the apoptosis rate of AST between the wild type group and the A30P group (P 0.05). Conclusion:. Overexpression of a-synuclein wild-type and mutant A53TnA30Pmay induce apoptosis of astrocytes through endoplasmic reticular-Golgi system injury.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.5

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高俊英;朱永紅;張露青;肖明;丁炯;;自發(fā)性高血壓大鼠腦干心血管核團(tuán)內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化[J];解剖學(xué)研究;2011年03期

2 靳哲;趙忠新;;星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇發(fā)病中的作用研究[J];世界臨床藥物;2012年01期

3 張文佳;韋力;廉春蓉;阮林;莫立根;李小妹;;全腦照射對(duì)小鼠室管膜下區(qū)GFAP表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年01期

4 王蘭;張劍平;于璇;李在望;;星形膠質(zhì)細(xì)胞增生干預(yù)的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2012年06期

5 李睿;楊文明;汪美霞;;帕金森病早期診斷線索探討[J];中醫(yī)藥臨床雜志;2013年11期

6 劉芳婷;李建;李向南;徐盛w\0;向正華;袁紅斌;;氫分子對(duì)H_2O_2體外誘導(dǎo)氧化損傷大鼠脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

7 Yu-feng Tang;劉建國;Zong-liang Wang;Yu Wang;Li-guo Cui;章培標(biāo);Xue-si Chen;;In Vivo Degradation Behavior of Porous Composite Scaffolds of Poly(lactide-co-glycolide) and Nano-hydroxyapatite Surface Grafted with Poly(L-lactide)[J];Chinese Journal of Polymer Science;2014年06期

8 賈硯秋;呂佩源;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在神經(jīng)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)中的作用[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2014年02期

9 林亨;陳兵;黃梓雄;莫偉;李小亭;朱鵬博;尹延慶;廖壯檳;;劃痕損傷對(duì)大鼠腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞NF-êB表達(dá)及繼發(fā)性死亡的影響[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年04期

10 馬緒彪;卞偉華;宋佳;李慶忠;楊美子;;胍丁胺對(duì)氧糖剝奪/復(fù)氧損傷U251細(xì)胞水通道蛋白-4,9的影響[J];中國臨床藥理學(xué)雜志;2014年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 呂子全;發(fā)育期全氟辛烷磺酸鹽暴露對(duì)成年子代大鼠的糖脂代謝的影響及神經(jīng)毒性研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 王貞;飽和脂肪酸在小膠質(zhì)細(xì)胞激活中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2011年

3 趙冰;新型P2Y樣G蛋白偶聯(lián)受休GPR17在缺血性腦損傷中的作用[D];浙江大學(xué);2012年

4 張玲;全氟辛烷磺酸鹽的胚胎發(fā)育毒性機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

5 李哲;磁刺激對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

6 李在望;表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑對(duì)大鼠脊髓損傷后軸突再生微環(huán)境的作用機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

7 曾懷才;全氟辛烷磺酸鹽的神經(jīng)發(fā)育毒性研究[D];華中科技大學(xué);2010年

8 黃雪琴;半胱氨酰白三烯及CvsLT_1受體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用[D];浙江大學(xué);2012年

9 唐娟娟;ATP敏感性鉀通道在帕金森病模型小鼠神經(jīng)損傷中的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

10 高飛;FTY720抗癲vN發(fā)作及癲vN發(fā)生的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 梁睿;水通道蛋白4敲除取消帕金森病模型中多巴胺能神經(jīng)元差異性損傷[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 吳薇;D-半乳糖致小鼠腦衰老早期階段星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化及其作用機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

3 蔡蓓蕾;半胱氨酰白三烯受體2對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)及其siRNA和拮抗劑篩選[D];浙江大學(xué);2011年

4 尚晶;伴皮層下囊腫的巨腦性白質(zhì)腦病臨床及分子遺傳學(xué)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

5 郭志慧;星形膠質(zhì)細(xì)胞活化與表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)的相關(guān)性研究[D];南華大學(xué);2011年

6 劉世民;大鼠腦缺血模型評(píng)價(jià)及大鼠腦缺血慢性期GFAP、NSE、SYN、Nogo-A表達(dá)與神經(jīng)功能轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性[D];南昌大學(xué);2011年

7 張雪;全腦缺血再灌注損傷后大鼠海馬區(qū)Skp2的表達(dá)研究[D];華中科技大學(xué);2011年

8 鐘麗敏;中樞M受體參與毒血癥大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞激活及細(xì)胞因子分泌的研究[D];蘇州大學(xué);2011年

9 曹劍;基于分子動(dòng)力學(xué)模擬研究Cu~(2+)對(duì)α-synclein蛋白聚集的影響[D];山東師范大學(xué);2012年

10 潘劍;大鼠脊髓半切損傷后腦和脊髓GFAP表達(dá)的變化[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1571499