本文選題：TAGLN2　切入點(diǎn)：膠質(zhì)瘤　出處：《山東大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤,占所有原發(fā)性腦腫瘤的32%,其中超過一半為惡性程度最高的WHO Ⅳ級(jí)多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(Glioblastoma multiform,GBM)。研究顯示,約88%的GBM患者確診后總體生存期不足1年,且5年生存率5%。GBM患者預(yù)后不良的主要原因在于腫瘤細(xì)胞的高度增殖能力、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、瘤內(nèi)遺傳異質(zhì)性以及微血管增生等惡性表型及特征。目前,國(guó)際上治療GBM的標(biāo)準(zhǔn)方案為手術(shù)切除后給予替莫唑胺(Temolozomide,TMZ)同步化療,并聯(lián)合應(yīng)用放射治療,但整體治療效果并不理想。由于膠質(zhì)瘤細(xì)胞向周圍腦組織的浸潤(rùn)特性以及血腦屏障對(duì)化療藥物通透性較差,即使利用目前先進(jìn)的顯微外科手術(shù)技術(shù),仍難以將腫瘤完全切除,且易導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)治療干預(yù)措施的高度抵抗及耐受。因此,尋找有效抑制膠質(zhì)瘤惡性生物學(xué)特性的新型治療方式,從而延長(zhǎng)患者生存期、提高患者生存質(zhì)量,是神經(jīng)腫瘤治療領(lǐng)域面臨的重要挑戰(zhàn)。近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)及腫瘤遺傳學(xué)研究的不斷發(fā)展,對(duì)膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)也不斷深入。既往的世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)膠質(zhì)瘤病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中,以顯微鏡下腫瘤的細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征為重點(diǎn)進(jìn)行分級(jí)判斷。然而不斷有研究表明,組織特征相似的膠質(zhì)瘤基因表型特征卻存在不同,伴隨著個(gè)體間生存期的較大異質(zhì)性。2016年WHO依據(jù)基因表型特征對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分型進(jìn)行更新,首次將多個(gè)分子病理學(xué)指標(biāo)(包括IDH1突變、MGMT啟動(dòng)子區(qū)甲基化、染色體1p/19q的共缺失,TERT及ATRX基因突變等)納入分類標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí),基于TCGA基因聚類分析的分子亞型分類標(biāo)準(zhǔn)將膠質(zhì)瘤分為四類亞型:前神經(jīng)元型(Proneural)、經(jīng)典型(Classical)、神經(jīng)元型(Neural)及間充質(zhì)型(Mesenchymal),其中,間充質(zhì)型膠質(zhì)瘤相比前神經(jīng)元型膠質(zhì)瘤具有較大異質(zhì)性的基因組表達(dá)特征,其惡性度及浸潤(rùn)性高,預(yù)后較差;而前神經(jīng)元型膠質(zhì)瘤往往伴隨較長(zhǎng)生存期。因此,探尋間充質(zhì)型膠質(zhì)瘤特異性表達(dá)分子及其調(diào)控機(jī)制,亦有望深入闡釋膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展的潛在機(jī)理。新近研究表明,膠質(zhì)瘤中發(fā)生的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)是揭示其獲得高侵襲、遷移特性的重要機(jī)制,也是促進(jìn)其惡性生物學(xué)進(jìn)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)環(huán)節(jié)。在EMT過程中,上皮樣(Epithelial phenotype)細(xì)胞發(fā)生了多種生物學(xué)變化向間充質(zhì)樣(Mesenchymalphenotype)細(xì)胞轉(zhuǎn)變,這其中包括細(xì)胞間黏連減弱以及細(xì)胞形態(tài)的改變,并伴隨著腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)、化療耐受及失巢凋亡等現(xiàn)象。在EMT過程中,最為經(jīng)典的分子指標(biāo)改變?yōu)槟け砻驸}粘著蛋白N-cadherin的升高及E-cadherin的下降。同時(shí),研究已發(fā)現(xiàn)在高級(jí)別及預(yù)后較差的膠質(zhì)瘤患者組織中,EMT過程關(guān)鍵調(diào)控因子及多個(gè)間充質(zhì)型標(biāo)志物表達(dá)呈異常上調(diào)狀態(tài)。對(duì)EMT過程及間充質(zhì)型膠質(zhì)瘤相關(guān)分子機(jī)制的不斷深入研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞中的多類分子與腫瘤侵襲、EMT存在密切關(guān)聯(lián),已有多項(xiàng)研究表明細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白家族及RAB家族在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要調(diào)控作用。在本課題中,通過前期檢測(cè) TCGA(The Cancer Genome Atlas)及 GEO(Gene Expression Omnibus)膠質(zhì)瘤基因組數(shù)據(jù)庫(kù)信息,我們首次發(fā)現(xiàn):細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白TAGLN2以及RAB43在高級(jí)別膠質(zhì)瘤及間充質(zhì)亞型腫瘤組織中的mRNA水平明顯上調(diào)。因此,本課題擬深入探討TAGLN2及RAB43分子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義,并研究其對(duì)膠質(zhì)瘤惡性表型及EMT過程的調(diào)控作用,以評(píng)估TAGLN2及RAB43分子作為新的腫瘤標(biāo)志物及分子靶點(diǎn)在臨床中的轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景。TAGLN2(Transgelin-2)是一類Actin細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白家族的重要成員,又稱為Actin交聯(lián)蛋白。TAGLN家族由3個(gè)亞型組成,包括TAGLN1(又稱為SM22α),TAGLN2和TAGLN3。該分子家族在正常組織細(xì)胞中表達(dá)廣泛,結(jié)構(gòu)中包含共同的鈣調(diào)蛋白同源結(jié)構(gòu)域(Calponinhomologdomain,CHdomain),并存在多個(gè)鈣離子及磷酸化修飾結(jié)合位點(diǎn)。最初有文獻(xiàn)報(bào)道TAGLN蛋白定位于細(xì)胞胞漿,廣泛表達(dá)于平滑肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞,并通過直接結(jié)合Actin肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)構(gòu)影響細(xì)胞骨架的重塑,進(jìn)而參與細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化、細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分化及增殖凋亡等功能調(diào)控。由于TAGLN蛋白家族在細(xì)胞骨架重塑及細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化中的作用,其在腫瘤細(xì)胞惡性表型中的潛在功能受到研究者關(guān)注。同時(shí),新近有文獻(xiàn)報(bào)道TAGLN家族不僅與Actin骨架緊密連接調(diào)控細(xì)胞運(yùn)動(dòng),其在細(xì)胞核中亦有表達(dá),并可能通過直接調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)而影響細(xì)胞表型,因此,TAGLN家族在各類腫瘤中的調(diào)控作用有待深入闡明。TAGLN2是TAGLN家族的重要成員,分子量為24kDa,其與TAGLN1含有64%的同源氨基酸結(jié)構(gòu),并與細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)構(gòu)緊密結(jié)合發(fā)揮作用。與TAGLN1分布特點(diǎn)不同,TAGLN2主要分布于上皮細(xì)胞,在動(dòng)靜脈平滑肌細(xì)胞中亦有表達(dá)。目前,TAGLN2在腫瘤中的作用尚未明確,例如,在乳腺癌中的研究顯示TAGLN2在侵襲性腫瘤細(xì)胞中表達(dá)下調(diào);但在膀胱癌及宮頸癌中發(fā)揮癌基因效應(yīng),促進(jìn)其侵襲能力。而對(duì)于膠質(zhì)瘤中TAGLN2的表達(dá)特征與臨床意義,以及TAGLN2是否參與調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤侵襲相關(guān)惡性表型目前尚無相關(guān)報(bào)道。RAB43(Ras-relatedGTP-bindingprotein43)蛋白是 RAS 蛋白超家族中的一員,其分子量為23 kDa。RAB43主要定位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體,在生理狀態(tài)下廣泛參與介導(dǎo)囊泡運(yùn)動(dòng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及蛋白運(yùn)輸過程。新近的多項(xiàng)研究已發(fā)現(xiàn),RAB蛋白家族中的多個(gè)成員不僅參與了細(xì)胞內(nèi)各組分的囊泡形成、運(yùn)輸環(huán)節(jié),在腫瘤進(jìn)程中亦扮演了重要角色。在乳腺癌和卵巢癌中的研究發(fā)現(xiàn)RAB25可與腫瘤細(xì)胞中的整合素再循環(huán)囊泡直接結(jié)合,進(jìn)而參與細(xì)胞向細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲。另有研究發(fā)現(xiàn),RAB3D蛋白在侵襲性結(jié)腸癌組織中的表達(dá)顯著升高,并通過介導(dǎo)EMT過程在結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。此外,在包括膠質(zhì)瘤在內(nèi)的多類惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)RAB27A、RAB38蛋白與患者臨床病理學(xué)指標(biāo)及惡性表型標(biāo)志物存在相關(guān)性。而作為參與蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)及高爾基體結(jié)構(gòu)的重要分子,RAB43在膠質(zhì)瘤中的作用目前尚無文獻(xiàn)報(bào)道,有待深入探討�；谇捌谘芯楷F(xiàn)狀,本課題結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)差異性表達(dá)分析結(jié)果,以細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白TAGLN2以及RAB43為研究重點(diǎn),揭示其在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特征及臨床預(yù)后意義。利用生物學(xué)信息學(xué)GO(GeneOntology)及KEGG(Kyotoencyclopedia of genes and genomes)富集分析,我們首先預(yù)測(cè)了與TAGLN2及RAB43顯著相關(guān)的生物學(xué)功能及信號(hào)通路;隨后,通過Western blot及功能學(xué)實(shí)驗(yàn),從分子、細(xì)胞水平分別檢測(cè)了 TAGLN2及RAB43蛋白對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、運(yùn)動(dòng)能力及其他惡性表型的影響,同時(shí)探究其與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程的密切關(guān)系,闡明其在膠質(zhì)瘤惡性行為中的作用機(jī)制,從而為膠質(zhì)瘤的臨床治療提供新的靶點(diǎn)及理論基礎(chǔ)。第一部分細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白TAGLN2在膠質(zhì)瘤惡性生物學(xué)行為中的作用機(jī)制及臨床意義目的探究TAGLN2分子在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平及預(yù)后意義,明確其在間充質(zhì)亞型中的特征性表達(dá),評(píng)估TAGLN2與患者分子病理學(xué)特征的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián),探究TAGLN2是否影響EMT過程及其調(diào)控膠質(zhì)瘤相關(guān)惡性表型的作用機(jī)制,并初步檢測(cè)膠質(zhì)瘤中TGFβ是否作為上游信號(hào)通路參與TAGLN2的表達(dá)調(diào)控。方法本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)46例(WHO II-IV級(jí))膠質(zhì)瘤樣本及5例因外傷或腦疝切除的腦組織中的TAGLN2表達(dá)含量;利用公共平臺(tái)TCGA、GEO等基因芯片Microarray數(shù)據(jù)庫(kù),繪制TAGLN2的表達(dá)特征圖譜及生存曲線,評(píng)估該分子在不同級(jí)別及各亞型腫瘤中的表達(dá)差異及臨床意義;基于生物信息學(xué)平臺(tái)預(yù)測(cè)TAGLN2在膠質(zhì)瘤中的潛在生物學(xué)功能及密切相關(guān)的信號(hào)通路,利用RNA干擾技術(shù)結(jié)合功能學(xué)實(shí)驗(yàn)(3D微球體侵襲模型、CCK8、EdU熒光、流式細(xì)胞術(shù)等)檢測(cè)TAGLN2對(duì)膠質(zhì)瘤侵襲、增殖、細(xì)胞周期及凋亡過程的影響,并利用Western Blot檢測(cè)EMT相關(guān)分子及信號(hào)通路變化;構(gòu)建原位荷瘤小鼠模型研究靶向沉默TAGLN2對(duì)體內(nèi)成瘤的影響。結(jié)果1.TAGLN2表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤惡性程度正相關(guān),并高表達(dá)于間充質(zhì)型(Mesenchymal subtype)膠質(zhì)瘤樣本免疫組化結(jié)果及數(shù)據(jù)庫(kù)生物信息學(xué)結(jié)果顯示:GBM患者腫瘤樣本中的TAGLN2表達(dá)水平顯著高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤LGGs及正常腦組織,并于間充質(zhì)亞型膠質(zhì)瘤中上調(diào)。同時(shí),TAGLN2高表達(dá)于IDH1野生型樣本,而低表達(dá)于MGMT甲基化、染色體1p/19q共缺失、TERT缺失以及ATRX突變膠質(zhì)瘤樣本。提示TAGLN2可作為一項(xiàng)新的分子標(biāo)志物用于評(píng)估膠質(zhì)瘤患者惡性程度,并為膠質(zhì)瘤臨床診斷提供新的思路及參考。2.TAGLN2高表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者不良預(yù)后相關(guān)生存曲線及Log-rank檢驗(yàn)顯示,TAGLN2高表達(dá)組分別在低級(jí)別膠質(zhì)瘤及GBM中與患者不良預(yù)后密切相關(guān)。進(jìn)一步,多因素Cox回歸分析表明:TAGLN2可作為一項(xiàng)獨(dú)立不良預(yù)后指標(biāo)(HR =1.713,95%CI= 1.384-2.119,P0.001)用于評(píng)估患者術(shù)后生存狀況。3.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)TAGLN2在膠質(zhì)瘤中的潛在生物學(xué)功能及信號(hào)通路調(diào)控GO功能分析發(fā)現(xiàn)TAGLN2與多類生物學(xué)功能緊密相關(guān),包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞存活、細(xì)胞侵襲、細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)、細(xì)胞粘附及周期調(diào)控。KEGGpathway分析顯示TAGLN2富集于多條腫瘤相關(guān)信號(hào)通路,包括細(xì)胞骨架調(diào)控、粘附分子相關(guān)通路等。GSEA分析進(jìn)一步驗(yàn)證TAGLN2與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換、腫瘤轉(zhuǎn)移以及G1-S期細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化過程密切相關(guān)。4.敲除TAGLN2抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力及間充質(zhì)特性利用3D球狀體基質(zhì)膠侵襲模型檢測(cè)TAGLN2特異性敲除后膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的改變。觀察結(jié)果表明,與Control組相比,si-TAGLN2組膠質(zhì)瘤微球在培養(yǎng)96h后的侵襲區(qū)域面積受到顯著抑制。敲除TAGLN2蛋白后,U87MG及U251的間充質(zhì)表型指標(biāo)N-cadherin、β-catenin及EMT關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug、Twist蛋白的表達(dá)量明顯下調(diào)。同時(shí),si-TAGLN2組細(xì)胞侵襲偽足(Invadopodia)含量明顯降低,因此,TAGLN2可能通過參與膠質(zhì)瘤EMT過程及侵襲偽足的形成進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞侵襲能力。5.TAGLN2對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡功能的影響敲除TAGLN2蛋白后,CCK-8細(xì)胞生長(zhǎng)曲線受到顯著抑制,EdU陽性細(xì)胞率亦發(fā)生明顯降低。進(jìn)一步利用流式細(xì)胞術(shù)顯示敲除TAGLN2導(dǎo)致周期阻滯于G0/G1期。轉(zhuǎn)錄因子FoxM1在TAGLN2敲除后表達(dá)量降低,同時(shí),周期調(diào)控因子CDK2、CyclinB1等亦發(fā)生明顯降低,周期抑制因子p21、p27蛋白顯著上調(diào),并伴隨p21下游分子c-Myc及Survivin表達(dá)量下降。另一方面,細(xì)胞晚期凋亡率隨TAGLN2的敲除而明顯升高。6.TGFβ信號(hào)通路參與調(diào)控TAGLN2的表達(dá)首先,應(yīng)用數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)明確TGFβ2在GBM中的表達(dá)明顯高于LGGs;且患者共表達(dá)兩分子(TAGLN2higTGFβ2high)時(shí),預(yù)后明顯較差;關(guān)聯(lián)性分析顯示膠質(zhì)瘤中TAGLN2與TGFβ2分子存在顯著線性相關(guān)。體外給予TGFβ2(0,1,5,10 ng/mL)刺激后TAGLN2及N-cadherin表達(dá)水平上調(diào),而使用TGFβ受體特異性抑制劑SB431542時(shí),TGFβ2誘導(dǎo)的TAGLN2及N-cadherin表達(dá)上調(diào)受到顯著抑制,以上結(jié)果提示TGFβ2信號(hào)通路參與調(diào)控了膠質(zhì)瘤中TAGLN2的表達(dá)。7.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲除TAGLN2可延長(zhǎng)原位荷瘤小鼠生存期裸鼠隨機(jī)分選為Control組及sh-TAGLN2組(n=5),將慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞(約1×106)定向注射裸鼠顱內(nèi),構(gòu)建原位種瘤模型。腦切片HE染色結(jié)果顯示sh-TAGLN2組裸鼠顱內(nèi)腫瘤明顯縮小,同時(shí)生存期明顯長(zhǎng)于Control組(44.0vs28.5天,P0.05)。免疫組化證實(shí),sh-TAGLN2組顱內(nèi)腫瘤TAGLN2表達(dá)量明顯較低,同時(shí),EMT標(biāo)志物N-cadherin及增殖標(biāo)志物Ki-67表達(dá)量亦受到明顯抑制。結(jié)論在本研究部分我們首次發(fā)現(xiàn)TAGLN2基因表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤惡性程度正相關(guān),并高表達(dá)于間充質(zhì)型(Mesenchymalsubtype)及預(yù)后不良膠質(zhì)瘤患者。功能學(xué)實(shí)驗(yàn)提示TAGLN2參與了膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)、侵襲、EMT轉(zhuǎn)化等功能。因此,TAGLN2可能作為膠質(zhì)瘤新的生物學(xué)標(biāo)記物及潛在治療靶點(diǎn),而對(duì)于該分子對(duì)FoxM1相關(guān)通路的具體調(diào)控機(jī)制及其在TGFβ2信號(hào)中的重要作用,有待后續(xù)研究進(jìn)一步探討。第二部分RAB43蛋白在膠質(zhì)瘤侵襲及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制及臨床意義目的分析RAB43分子在不同惡性程度膠質(zhì)瘤中的差異性表達(dá),統(tǒng)計(jì)RAB43與膠質(zhì)瘤分子病理學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性并評(píng)估RAB43與膠質(zhì)瘤患者術(shù)后生存期的關(guān)聯(lián),檢測(cè)特異性敲除RAB43對(duì)膠質(zhì)瘤生物學(xué)功能的影響,探究RAB43是否調(diào)控腫瘤侵襲及EMT過程。方法本實(shí)驗(yàn)利用免疫組化手段檢測(cè)52例(WHO grades II-IV)膠質(zhì)瘤樣本及5例正常腦組織中的RAB43差異性表達(dá);利用公共數(shù)據(jù)平臺(tái)Microoarray數(shù)據(jù)庫(kù),分析RAB43的表達(dá)特征及生存曲線,評(píng)估該分子在間充質(zhì)亞型中的特異性表達(dá)及臨床患者預(yù)后意義;基于生物信息學(xué)平臺(tái)預(yù)測(cè)RAB43在膠質(zhì)瘤中的潛在生物學(xué)功能及密切相關(guān)的信號(hào)通路;利用Transwell檢測(cè)RAB43對(duì)膠質(zhì)瘤侵襲、遷移能力影響,并通過Western Blot評(píng)估EMT相關(guān)分子變化。結(jié)果1.RAB43表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤級(jí)別進(jìn)展相關(guān)免疫組化結(jié)果及數(shù)據(jù)庫(kù)生物信息學(xué)結(jié)果顯示:高級(jí)別患者膠質(zhì)瘤樣本中的RAB43水平顯著高于低級(jí)別及正常組織,而在低級(jí)別與正常組織之間未發(fā)現(xiàn)RAB43表達(dá)差異性。相關(guān)性分析結(jié)果顯示RAB43高表達(dá)組與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)(P0.0001)、年齡≥45歲(P = 0.0056)呈正相關(guān),但與患者性別(P=0.4151)及治療前卡氏評(píng)分(P = 0.0675)并無相關(guān)性。2.RAB43高表達(dá)預(yù)示膠質(zhì)瘤患者不良預(yù)后生存曲線及Log-rank檢驗(yàn)顯示,高表達(dá)RAB43基因患者相對(duì)于低表達(dá)RAB43組其總體生存期明顯較短。利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)提取348例GBM患者信息亦發(fā)現(xiàn)RAB43表達(dá)量具有明確的預(yù)后指示,并于Rembrandt(n = 329)及GSE16011(n= 284)數(shù)據(jù)庫(kù)中分別在低級(jí)別及高級(jí)別膠質(zhì)瘤中驗(yàn)證了 RAB43的預(yù)后意義。3.RAB43高表達(dá)于間充質(zhì)亞型膠質(zhì)瘤并與多類分子病理特征相關(guān)RAB43分子在間充質(zhì)型膠質(zhì)瘤樣本中的表達(dá)量明顯高于前神經(jīng)元型及其他分型,同時(shí)高表達(dá)于惡性程度較高的G3型膠質(zhì)瘤,而在G1、G2分型中處于低表達(dá)狀態(tài)。進(jìn)一步對(duì)膠質(zhì)瘤其他分子病理學(xué)指標(biāo)的表達(dá)量分析提示RAB43分子高表達(dá)于IDH1野生型樣本,而低表達(dá)于MGMT甲基化、染色體1p/19q共缺失膠質(zhì)瘤樣本,進(jìn)一步提示RAB43可能作為一類癌基因在膠質(zhì)瘤中發(fā)揮作用。4.生物信息學(xué)提示RAB43富集于膠質(zhì)瘤侵襲及粘附相關(guān)功能GO功能分析提示RAB43高度富集于免疫應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞粘附、細(xì)胞侵襲、胞外基質(zhì)重構(gòu)等功能。同時(shí),KEGG通路分析亦發(fā)現(xiàn)RAB43正相關(guān)分子與腫瘤侵襲相關(guān)信號(hào)如細(xì)胞粘附分子、ECM受體相互作用相關(guān)。在關(guān)聯(lián)性分析中MMP-2、MMP-9、IL-6、IL-8、VEGFA以及Ki-67等腫瘤相關(guān)標(biāo)志物均與其存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。5.RAB43參與調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力及間充質(zhì)特性Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,siRAB43組膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲穿過基質(zhì)膠的數(shù)明顯降低。進(jìn)一步Western結(jié)果顯示敲除RAB43后間充質(zhì)相關(guān)指標(biāo)N-cadherin、Vimentin、Snail表達(dá)水平明顯下調(diào)。因此,RAB43可能通過參與膠質(zhì)瘤EMT過程進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞侵襲能力。結(jié)論在本研究部分,我們首次發(fā)現(xiàn)RAB43表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤級(jí)別進(jìn)展相關(guān),其高表達(dá)與間充質(zhì)亞型及其他惡性病理學(xué)指標(biāo)密切相關(guān),并預(yù)示患者不良預(yù)后。功能學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)敲除RAB43顯著抑制膠質(zhì)瘤侵襲、EMT轉(zhuǎn)化過程,因此,RAB43可能在膠質(zhì)瘤病理進(jìn)展中扮演重要角色,并可作為新的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)及分子干預(yù)靶點(diǎn)應(yīng)用于膠質(zhì)瘤患者臨床診療。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1569630