本文選題：慢性腦灌注不足　切入點：腦白質損傷　出處：《第四軍醫(yī)大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：慢性腦灌注不足誘發(fā)的腦白質損傷（WML）是導致老年患者認知功能下降的重要因素之一，嚴重影響患者的生活質量，目前尚無明確有效的治療方法。研究表明，腦白質內少突膠質細胞（OLs）變性死亡導致的髓鞘結構和功能異常、神經(jīng)元軸突纖維變性壞死是WML的關鍵環(huán)節(jié)，促進髓鞘修復/再生對改善WML所導致的認知功能缺損至關重要。成熟的OLs和室管膜下區(qū)（SVZ）的少突膠質前體細胞（OPC）是髓鞘修復/再生最重要的兩個內源性細胞來源，成熟OLs可直接參與髓鞘的合成，而損傷部位的OPC和SVZ遷移來的OPC經(jīng)過分化后也參與髓鞘的修復。在前期的實驗中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的抗血小板聚集藥物ASA可以促進SVZ新生OPC的增殖，并遷移至白質損傷部位分化為新生的OLs。本實驗將進一步探討ASA對缺血性腦白質損傷原位OPC增殖、分化及OLs成髓鞘的作用，以及ASA在體外環(huán)境下對少突膠質細胞系的作用，并通過行為學驗證ASA對WML模型大鼠認知功能的影響，最終探討其可能的作用機制，為ASA用于臨床治療WML提供實驗依據(jù)，并為新的治療WML藥物的開發(fā)提供思路。 實驗一阿司匹林促進少突膠質細胞增殖分化及髓鞘形成的研究 目的：研究ASA對WML模型大鼠胼胝體部原位OPC增殖、成熟以及OLs髓鞘再生的作用；方法：采用CCAO法制作WML大鼠模型，選取不同劑量（25、50、100、200mg/kg/d）ASA和等比例的賴甘溶液治療4周后，通過免疫熒光雙標染色法觀察各組大鼠胼胝體部NG2/BrdU、PLP/BrdU雙標陽性細胞的表達情況，Western blot檢測PDGFαR、CNPase、MBP的表達變化，超微結構電鏡分析觀察髓鞘結構的改變；結果：1）通過免疫組化雙標染色觀察到WML大鼠經(jīng)較低劑量（25mg/kg/d）ASA和較高劑量（100mg/kg/d）ASA治療后，胼胝體部NG2+/BrdU+雙標陽性OPC數(shù)量和PLP+/BrdU+雙標陽性OLs數(shù)量分別達到高峰，差別具有統(tǒng)計學差異（p0.05）；2）Western blot結果顯示對照組PDGFαR的表達較正常組有所增高，并且經(jīng)較低濃度（25mg/kg/d）ASA處理組后進一步增高，然而經(jīng)100、200mg/kg/dASA治療后卻有所降低，差別具有統(tǒng)計學差異（p0.05）；相反，對照組MBP的表達降低，而經(jīng)25-200mg/kg/d ASA治療后有所改善，其中較高劑量（100mg/kg/d）ASA處理組大鼠胼胝體部MBP的表達顯著高于正常組和對照組，差別具有統(tǒng)計學差異（p0.05）；而ASA處理并不影響CNPase的表達水平，差別不具有統(tǒng)計學差異（p0.05）；3）與正常組相比，對照組的髓鞘厚度明顯降低，且髓鞘結構板層分離明顯，100mg/kgASA治療4w或6w后可明顯改善缺血所致的脫髓鞘和髓鞘厚度降低以及G-ratio比值的減少；結論：根據(jù)使用劑量的不同，阿司匹林可以通過促進OPC的發(fā)育和髓鞘的形成保護缺血誘導的WML。 實驗二阿司匹林促進NSC和OPC分化為少突膠質細胞的研究 目的：研究體外條件下，ASA對少突膠質細胞發(fā)生的影響；方法：用不同濃度（0.1、0.5、1.0、5.0、10μmol/L）的ASA和等體積的無水乙醇處理體外培養(yǎng)的NSC和OPC，免疫熒光染色法觀察O4、CNPase、MBP的表達檢測ASA對NSC向少突膠質細胞系增殖、分化的影響，以及A2B5/Ki67、CNPase的表達觀察ASA對OPC的增殖和分化的影響；結果：在體外培養(yǎng)的NSC中，不同濃度（0.1-10μmol/L）ASA處理組與對照組相比O4+細胞均增多，但只有較高濃度（5-10μmol/L）ASA處理組CNPase、MBP的表達增多，與對照組相比具有統(tǒng)計學差異（p0.05）；不同濃度（0.1-10μmol/L）ASA處理組與對照組相比Tuj1+的神經(jīng)元均增多，伴隨著Tuj1-/MBP-的星形膠質細胞的減少，而僅有（5-10μmol/L）ASA處理組MBP+的OLs表達明顯增多。在體外培養(yǎng)的OPC中，較低濃度（0.1μmol/L）ASA處理組與對照組相比，A2B5+/Ki67+雙標陽性的新增殖OPC數(shù)量明顯增多，差別具有統(tǒng)計學意義（p0.05），而較高濃度（10μmol/L）則有所減少；反之，較高濃度（1-10μmol/L）的ASA處理組與對照組相比，CNPase+的OLs數(shù)量明顯增多，差別具有統(tǒng)計學差異（p0.05），而較低劑量（0.1-0.5μmol/L） ASA處理組則沒有此作用；結論：ASA可通過減少NSC向星形膠質細胞的分化而增加其向OPC的分化效率，并促進OPC的增殖、分化和髓鞘形成。 實驗三阿司匹林對WML模型大鼠認知功能的影響 目的：驗證ASA是否可以改善WML模型大鼠的認知功能；方法：通過曠場試驗和高架十字迷宮試驗排除大鼠焦慮情緒對認知功能檢測結果的影響，進而通過Morris水迷宮試驗檢測各組大鼠學習記憶能力的改變；結果：通過4天的定位航行訓練，ASA處理組與對照組相比可明顯縮短WML模型大鼠的逃避潛伏期，其中以第四天最顯著，差別具有統(tǒng)計學差異（p0.05），而各組大鼠的游泳速度并無明顯差別，不具有統(tǒng)計學意義（p0.05），并且ASA處理組與對照組相比，在焦慮狀態(tài)方面也沒有顯著差別（p0.05）；結論： ASA可以改善WML模型大鼠的學習記憶能力，并且與大鼠的焦慮抑郁狀態(tài)無關。 實驗四阿司匹林促進少突膠質細胞發(fā)生和成髓鞘作用的機制研究 目的：有研究證實，ERK及Rho信號通路在OLs發(fā)育和髓鞘形成具有重要作用，本實驗研究ASA是否通過這兩條通路發(fā)揮促進少突膠質細胞系發(fā)育和髓鞘形成的作用的；方法：用10μmol/L的ASA單獨或同時添加ERK抑制劑（PD98059）干預體外培養(yǎng)的OPC，Western blot法檢測磷酸化ERK和MBP的表達水平變化及RhoA的活性改變；結果:10μmol/LASA處理后MBP的表達與對照組相比顯著增高，且磷酸化ERK（p-ERK）的表達也明顯高于對照組，二者差別均具有統(tǒng)計學意義（p0.05）；添加ERK抑制劑（PD98059）后MBP及p-ERK表達明顯降低至對照組表達水平，，而總ERK的表達在添加抑制劑前后無明顯改變；與ERK通路相反，經(jīng)10μmol/LASA處理的OPC，RhoA的活性較對照組相比降低約80%，差別具有統(tǒng)計學意義（p0.05）；結論：ASA可能是通過增加ERK磷酸化水平，同時降低RhoA通路的活性而對少突膠質細胞系的發(fā)育和髓鞘化發(fā)揮作用的。
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【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R742

【參考文獻】

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1 Handi Zhang;Yanbo Zhang;Haiyun Xu;Lingyan Wang;Jinsong Zhao;Junhui Wang;Zhijun Zhang;Qingrong Tan;Jiming Kong;Qingjun Huang;Xin-Min Li;;Locomotor activity and anxiety status, but not spatial working memory,are affected in mice after brief exposure to cuprizone[J];Neuroscience Bulletin;2013年05期

2 Li He;Q.Richard Lu;;Coordinated control of oligodendrocyte development by extrinsic and intrinsic signaling cues[J];Neuroscience Bulletin;2013年02期

本文編號：1560345