本文選題：人參皂苷Re　切入點：施萬細胞　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的1、基于人參皂苷Re在體內(nèi)和體外都通過不同的機制來發(fā)揮生理學(xué)功能的特性,探索能夠促進神經(jīng)再生的有效藥物。2、在坐骨神經(jīng)損傷(SNC)大鼠模型中,評估人參皂苷Re對施萬細胞的增殖、分化和遷移的影響。3、探索人參皂苷Re處理的坐骨神經(jīng)損傷模型中周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的機制。方法1、動物模型的建立與取材(1)選用健康成年SD大鼠(180-220 g),雌雄不限。(2)將健康成年SD大鼠放置在動物中心適應(yīng)性生長14天,食水不限。(3)將大鼠分成Normal組(n=4), Saline組(n=4),損傷組,(Re用量分別為0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mg/kg,每組n=4), Normal組不作處理,Sanline組給予同劑量的生理鹽水。連續(xù)給藥三周。(4)在給藥的第二周,選取大鼠,應(yīng)用復(fù)合麻醉劑(3 ml/kg)施以腹腔注射,使得大鼠麻醉。(5)應(yīng)用嚴格滅菌的手術(shù)器械于大鼠右側(cè)大腿中間部切開,暴露出坐骨神經(jīng),找到距離其分叉0.5cm處。(6)坐骨神經(jīng)夾傷模型的建立,應(yīng)用滅菌止血鉗夾3次,每次持續(xù)10s,三次之間間隔10s。(7)坐骨神經(jīng)缺損模型的建立,應(yīng)用滅菌器械分別造成0.2、0.5、1cm的缺損。(8)根據(jù)坐骨神經(jīng)損傷后所設(shè)的8個觀察時相點隨機將大鼠分為8個實驗組：0小時(即正常組)、6小時、12小時、1天、3天、5天、1周和2周。每個實驗組6只大鼠,其中3只用于免疫印跡,另外3只用于組織切片檢測。2、運用足跡分析評估坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)和展趾功能指數(shù)(TSI)。3、免疫印跡和免疫熒光檢測坐骨神經(jīng)損傷后周圍神經(jīng)再生的指標變化情況。4、免疫印跡檢測人參皂苷Re對p-ERK、 p-JNK、p-p38表達變化的影響。5、細胞水平檢測人參皂苷Re對施萬細胞遷移作用的影響。結(jié)果1、免疫印跡結(jié)果顯示,坐骨神經(jīng)損傷后,人參皂苷Re可以以劑量依賴性的方式調(diào)節(jié)增殖細胞核抗原(PCNA)的表達。2、電鏡組織學(xué)分析表明2.0 mg/kg人參皂苷Re可以保護坐骨神經(jīng),促進髓鞘的再生,保護神經(jīng)纖維的形狀。3、免疫熒光結(jié)果表明軸突生長相關(guān)蛋白(GAP-43),施萬細胞的marker (S-100),神經(jīng)元的marker (NF-200)在人參皂苷Re作用下,與坐骨神經(jīng)損傷對照組相比其表達發(fā)生了明顯的變化。4、免疫熒光雙標結(jié)果顯示,坐骨神經(jīng)損傷模型中,人參皂苷Re可以顯著增強施萬細胞中PCNA的表達。5、免疫印跡以及免疫熒光雙標結(jié)果表明在坐骨神經(jīng)損傷模型中,人參皂苷Re可以顯著增強施萬細胞中八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子6(Oct-6)的表達,并能促進施萬細胞的分化。6、免疫印跡結(jié)果表明在提取的原代施萬細胞中,人參皂苷Re可以顯著增加p-ERK、 p-JNK的表達,而對p-p38的表達卻沒有明顯的影響。7、運用trans-well以及劃痕實驗,我們發(fā)現(xiàn)人參皂苷Re處理過的施萬細胞的遷移能力顯著增強。結(jié)論1、在坐骨神經(jīng)損傷模型中,人參皂苷Re能顯著的促進施萬細胞的增殖、分化、遷移能力,從而促進周圍神經(jīng)再生。2、在坐骨神經(jīng)損傷模型中,人參皂苷Re促進周圍神經(jīng)再生的機制和ERK及JNK通路的活化相關(guān)。
[Abstract]:1, ginsenoside Re both in vitro and in vivo through different mechanisms to play the characteristics of physiological function based on the exploration of effective drugs can promote nerve regeneration of.2 in sciatic nerve injury (SNC) rat model, evaluate the effect of ginsenoside Re on the proliferation of Schwann cells, effect of.3 differentiation and migration, exploration the mechanism of peripheral nerve injury and repair of sciatic nerve injury model of ginsenoside Re treatment in 1. Methods, established with the animal model (1) healthy adult SD rats (180-220 g), male and female. (2) healthy adult SD rats were placed in the animal center of adaptive growth for 14 days, fresh water no limit (3). The rats were divided into Normal group (n=4), Saline group (n=4), injury group (the dosage of Re was 0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mg/kg, n=4 in each group), Normal group was not treated, Sanline normal saline group were given the same dose. For continuous three weeks. (4) in drug delivery No. 浜屽懆,閫夊彇澶ч紶,搴旂敤澶嶅悎楹婚唹鍓，

本文編號：1559534