本文關(guān)鍵詞： 早產(chǎn)兔 生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血 動物模型 2 3-二羥基-6-硝基氨-磺酰苯喹喔啉 髓鞘堿性蛋白 微管相關(guān)蛋白-2　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(germinal matrix-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)是早產(chǎn)兒最常見的腦損傷形式之一,GM-IVH占新生兒顱內(nèi)出血中80%以上。在極低出生體重兒中GM-IVH的發(fā)生率在20%~25%,當(dāng)體重在500~750g的早產(chǎn)兒發(fā)生GM-IVH的比例會上升至45%左右。研究表明,孕周越小、體重越低,GM-IVH的發(fā)生率越高。隨著我國圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)的進(jìn)步及新生兒重癥監(jiān)護(hù)技術(shù)的提高,早產(chǎn)兒、極早產(chǎn)兒、極低出生體重兒的出生率越來越高,伴隨而來的是,早產(chǎn)兒GM-IVH的發(fā)生率上升。GM-IVH多發(fā)生在孕周小于34周的早產(chǎn)兒,GM-IVH幸存患兒在后期隨訪中發(fā)現(xiàn)存在不同程度神經(jīng)功能障礙、腦癱、認(rèn)知障礙、行為缺陷等情況,嚴(yán)重影響早產(chǎn)兒的生存質(zhì)量,給家庭、社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。因此,GM-IVH及其所致后遺癥是仍然是有待解決的重要問題。早產(chǎn)兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育不成熟,腦損傷機(jī)制復(fù)雜,腦損傷的發(fā)病機(jī)制之一是大量興奮性氨基酸分泌所致的興奮毒作用,谷氨酸是常見的興奮性氨基酸,發(fā)揮作用時必須與其受體結(jié)合,α-甲基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑基丙酸(AMPA)受體作為谷氨酸離子型受體之一,廣泛分布在海馬、大腦皮質(zhì)、紋狀體和小腦中的膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元上。腦損傷后,激活A(yù)MPA受體,谷氨酸結(jié)合位于少突膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元表面的AMPA受體,誘發(fā)鈣超載,造成神經(jīng)元細(xì)胞骨架蛋白降解、破壞,引起神經(jīng)元損傷;作用于少突膠質(zhì)細(xì)胞膜表面AMPA受體時,造成少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷、髓鞘形成障礙。2,3-二羥基-6-硝基氨-磺酰苯喹喔啉(NBQX)是AMPA受體的抑制劑,應(yīng)用于GM-IVH患者,通過其抑制神經(jīng)元及少突膠質(zhì)細(xì)胞表面AMPA受體的表達(dá),可否減輕神經(jīng)元損害、保護(hù)少突膠質(zhì)細(xì)胞,目前國內(nèi)尚未研究報道。本研究通過已經(jīng)建立的GM-IVH兔模型,探討(1)GM-IVH后髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)表達(dá),檢測髓鞘損傷情況。(2)通過檢測微管相關(guān)蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)的表達(dá),了解GM-IVH早產(chǎn)兔神經(jīng)元損傷情況。(3)GM-IVH早產(chǎn)兔應(yīng)用NBQX后,是否可以減輕GM-IVH后的脫髓鞘,以及發(fā)揮對神經(jīng)元的保護(hù)作用。方法:1選取新西蘭孕兔,孕29天(足月孕32天),進(jìn)行剖宮產(chǎn),迅速取出幼兔。生后迅速給予保溫、奶粉喂養(yǎng),于生后3小時,給予一部分早產(chǎn)兔50%丙三醇腹腔注射,劑量為10ml/Kg。其余不給予任何處理。2生后24小時接受頭顱超聲檢查,觀察GM-IVH的發(fā)生情況。3將發(fā)生GM-IVH的早產(chǎn)兔隨機(jī)分為兩組,NBQX治療組(15只)和模型組(15只)。另取生后未給予任何處理的早產(chǎn)兔15只作為正常組。用劑量為10μL的NBQX對NBQX治療組進(jìn)行前囟注射,對照組給予同等容積的生理鹽水。將NBQX治療組、模型組、正常組的早產(chǎn)兔隨機(jī)分為出生后3天、7天、14天三個亞組,按上述時間點(diǎn)給予處死,冰上剝離腦組織,一部分放入4%的多聚甲醛溶液中固定,供后期免疫組織化實(shí)驗(yàn)使用。另一部分放置于-80℃冰箱中,供蛋白印跡試驗(yàn)使用。4使用免疫組化的方法比較NBQX治療組、模型組、正常組中早產(chǎn)兔腦室周圍組織中微管相關(guān)蛋白-2(MAP-2)的表達(dá)情況。5使用蛋白印跡方法檢測NBQX治療組、模型組、正常組中早產(chǎn)兔腦室周圍組織中髓鞘堿性蛋白(MBP)的表達(dá)情況。6統(tǒng)計方法:采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件、Microsoft Excel2003進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,檢驗(yàn)方差齊性,多個樣本均數(shù)的比較采用LSD-t檢驗(yàn);若方差不齊采用秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05,P值0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1成功復(fù)制了早產(chǎn)兔GM-IVH模型。對孕29天早產(chǎn)兔行剖宮產(chǎn)后獲得早產(chǎn)兔,通過組織樣本觀察后證實(shí)成功制備了早產(chǎn)兔GM-IVH模型。2腦組織中MBP的表達(dá)。用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法檢測腦組織中MBP的表達(dá)。出生后3天、7天、14天,正常組早產(chǎn)兔腦組織中MBP的表達(dá)量逐漸增加,三個時間點(diǎn)兩兩比較,3天和7天比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義;3天和14天、7天和14天比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在3天、7天、14天時,模型組中MBP的表達(dá)量均低于正常組的表達(dá)量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在NBQX治療組中,3天、7天、14天中MBP的表達(dá)量逐漸升高,3天與7天比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義;3天與14天、7天與14天比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義;在7天、14天時,NBQX治療組與模型組比較,MBP的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3腦組織中MAP-2的表達(dá)。應(yīng)用免疫組化檢測腦組織中MAP-2的表達(dá)。MAP-2在正常組腦組織中排列整齊,成纖維狀,且隨著時間的延長,腦組織中MAP-2的表達(dá)增高,3天、7天、14天兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)差異。模型組3天腦組織中MAP-2結(jié)構(gòu)完整性較差,基本無染色,表達(dá)量降低;7天時腦組織中MAP-2的表達(dá)量稍有增高;14天時,腦組織中MAP-2排列相對完整,染色仍較淡,表達(dá)較前增強(qiáng),模型組中任意兩時間點(diǎn)比較,MAP-2的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。且模型組中MAP-2的表達(dá)量較正常組低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。NBQX治療組,3天、7天、14天表達(dá)量呈上升趨勢,任意時間點(diǎn)兩兩比較腦組織中MAP-2的表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;在7天、14天時,同一時間點(diǎn)高于模型組的表達(dá)量,低于正常組的表達(dá)量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1早產(chǎn)兔發(fā)生GM-IVH后,腦組織中MBP的表達(dá)降低,提示GM-IVH后影響少突膠質(zhì)細(xì)胞的成熟及髓鞘化進(jìn)程。給予NBQX治療后,在一定程度上MBP的表達(dá)升高,提示NBQX干預(yù)有助于少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育,改善預(yù)后。2早產(chǎn)兔發(fā)生GM-IVH后,腦組織中MAP-2的表達(dá)降低,提示GM-IVH后破壞神經(jīng)元樹突結(jié)構(gòu)完整性。給予NBQX治療后,在一定程度上MAP-2的表達(dá)升高,提示NBQX治療后神經(jīng)元樹突結(jié)構(gòu)相對完整,可能對神經(jīng)元功能起到修復(fù)作用。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R743.34

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1550028