本文關鍵詞： 急性一氧化碳中毒 遲發(fā)型腦病 細胞凋亡 轉(zhuǎn)錄因子E2相關因子2 血紅素加氧酶1　出處：《西南醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:創(chuàng)建急性CO中毒遲發(fā)性腦病(DEACMP)大鼠模型,檢驗其行為學、形態(tài)學區(qū)別及轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關因子2(Nrf2)和血紅素加氧酶1(HO-1)在大鼠海馬區(qū)的表達,初步探討Nrf2及HO-1在DEACMP發(fā)病機制中的作用及兩者可能存在的相互關系,為DEACMP發(fā)病機制的進一步研究提供一定的基礎和方向。方法:1、將168只無認知功能障礙的健康成年雄性SD大鼠隨機分組:空白對照組(BC組)48只,空氣對照組(AC組)60只,DEACMP組(CO組)60只,每個組按染毒后第1d、3d、7d、14d、21d、28d六個時相點分為6個亞組,再將三組大鼠隨機分配到6個亞組中(CO組和AC組每個時相點10只大鼠,BC組每個時相點8只大鼠);2、CO組采取改良式腹腔注射法制備DEACMP大鼠模型,BC組以相同的方式注射等量空氣,AC組不做任何干預;3、采用Morris水迷宮試驗測試大鼠染毒前后認知學習記憶能力,并同時檢測大鼠體內(nèi)HbCO濃度,判斷造模是否成功;4、HE法觀察大鼠海馬CA1區(qū)病理變化,Tunel法檢測大鼠海馬CA1區(qū)細胞凋亡情況,免疫組化法檢測海馬CA1區(qū)Nrf2及HO-1蛋白的表達情況,Western Blot法檢測大鼠整個海馬Nrf2及HO-1的蛋白表達量。結(jié)果:1、DEACMP模型的建立:(1)CO中毒癥狀:CO組大鼠染毒后出現(xiàn)躁動、呼吸急促、皮膚黏膜呈現(xiàn)櫻桃紅色、肢體癱軟、動作遲緩,部分大鼠出現(xiàn)肢體強直抽搐、甚至昏迷,其余兩組大鼠無上述異常改變;(2)動脈血Hb CO濃度變化:大鼠在染毒過程中體內(nèi)的HbCO濃度50%維持時間超過16h;(3)Morris水迷宮結(jié)果:染毒前及染毒后7天內(nèi)三組大鼠平均躲避潛伏期無明顯差別(p0.05),染毒后第14-28天co組大鼠平均逃避潛伏期較其余兩組顯著延伸(p0.01),平臺所在象限運動時間、穿越平臺次數(shù)亦較bc、ac組明顯減少(p0.01)。2、he染色:bc、ac組大鼠染毒前后神經(jīng)元形態(tài)基本正常,而co組大鼠染毒后海馬區(qū)神經(jīng)元隨時間的變化出現(xiàn)不同程度的病理改變:細胞水腫、核固縮、核碎裂、錐體細胞減少、排列稀疏紊亂等;3、tunel檢測:bc組和ac組大鼠海馬ca1區(qū)細胞凋亡現(xiàn)象不明顯,而co組大鼠海馬ca1區(qū)凋亡細胞第1天起開始逐漸增多,第7天達高峰(20.20±1.78)后逐漸減少,第28天凋亡仍然存在,且每個時間點其凋亡指數(shù)較bc組和ac組均顯著增高(p0.01)。4、nrf2和ho-1蛋白的表達:(1)免疫組化法:nrf2和ho-1蛋白在bc組和ac組大鼠海馬ca1區(qū)表達均不明顯,且各時間點表達差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),在co組大鼠染毒后第1天nrf2和ho-1即開始增高,均在第3天達高峰(8.20±1.08,9.04±1.13)后開始減少,第28天仍維持在較高表達水平,且二者表達在每個時間點均較ac組、bc組明顯增加(p0.01);(2)蛋白質(zhì)印跡法(westernblot)檢測:ac、bc組大鼠海馬nrf2及ho-1蛋白表達量較少,且各時間點表達差異無統(tǒng)計學意義(p0.05),co組大鼠海馬nrf2及ho-1蛋白表達量均呈現(xiàn)出增高-高峰(第3天)-降低的趨勢,在第28天表達量仍處于較高水平,且二者表達在每個時間點均較ac組、bc組明顯增加(p0.01)。結(jié)論:1、改良式腹腔間隔注射法創(chuàng)建deacmp模子,與人類起病的病理程序相似,操作簡化易行,相對安全,實驗器材常見,co劑量易控制,是一種制備deacmp動物模型比較理想的方法;2、morris水迷宮實驗通過測試大鼠染毒前后的行為學改變(認知學習記憶能力),結(jié)合大鼠體內(nèi)HbCO濃度,可初步判斷大鼠是否出現(xiàn)DEACMP;3、大鼠DEACMP的發(fā)生發(fā)展很可能與大鼠海馬區(qū)錐體細胞遲發(fā)性凋亡有關;4、Nrf2和HO-1在DEACMP的發(fā)病機制中起著雙重作用:在CO中毒前期(3天內(nèi)),大鼠海馬Nrf2快速增高,通過促進其下游因子HO-1的表達,共同發(fā)揮抗細胞凋亡的作用;而后期(3天后)Nrf2持續(xù)過量表達,導致下游因子HO-1及其產(chǎn)物的堆積,很可能又促進了海馬區(qū)錐體細胞發(fā)生遲發(fā)性凋亡,是CO中毒發(fā)展為DEACMP的重要機制。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of Nrf2 and HO - 1 in the hippocampus of rats with acute CO poisoning delayed encephalopathy ( DEACMP ) rats . ( 2 ) There was no significant difference ( p . 01 ) in the hippocampus ca1 area in the hippocampus ca1 area of the co - group . The expression level of the protein in the hippocampus of the co - group was higher than that in the bc and ac groups ( p . 01 ) .

【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R595.1;R747.9;R-332

【參考文獻】

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本文編號：1548224