本文關(guān)鍵詞： 轉(zhuǎn)錄組測序 背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元 坐骨神經(jīng) 周圍神經(jīng)損傷 背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元 周圍神經(jīng)再生 突起生長 Vav1　出處：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分周圍神經(jīng)損傷后大鼠背根節(jié)神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄組分析目的尋找調(diào)控DRG突起生長的關(guān)鍵生物學(xué)過程以及信號通路,并探討其作用機(jī)制。方法1.制備大鼠坐骨神經(jīng)擠壓傷模型;2.提取樣品RNA,采用Illumina Hi Seq?進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。對大鼠坐骨神經(jīng)損傷0 h、3 h、9 h、1 d、4 d和7 d的L4-L6 DRG中m RNA的表達(dá)譜進(jìn)行了系統(tǒng)性分析;3.篩選差異表達(dá)基因;4.運(yùn)用生物信息分析軟件對差異表達(dá)基因進(jìn)行聚類、功能富集情況(GO)、KEGG pathway和基因網(wǎng)絡(luò)分析;5.對測序結(jié)果進(jìn)行q RT-PCR驗(yàn)證。結(jié)果1.系統(tǒng)性分析了L4-L6背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元在損傷后5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)轉(zhuǎn)錄組的變化,一共找到1688個(gè)差異表達(dá)的基因;2.對差異表達(dá)基因聚類以及功能富集分析,發(fā)現(xiàn)與離子運(yùn)輸、細(xì)胞離子穩(wěn)態(tài)、鈣離子運(yùn)輸、調(diào)節(jié)神經(jīng)元的投射發(fā)育、防御應(yīng)答、調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡、細(xì)菌感染應(yīng)答、調(diào)節(jié)細(xì)胞激活等相關(guān);3.差異表達(dá)基因網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)基因之間的相互作用主要涉及神經(jīng)系統(tǒng)、感覺系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、信號分子間的相互作用以及細(xì)胞間通訊等;4.q RT-PCR證實(shí)眾多關(guān)鍵基因的表達(dá)變化和測序結(jié)果一致。結(jié)論本研究通過RNA-Seq完成了大鼠坐骨神經(jīng)擠壓傷后背根節(jié)神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄組分析;結(jié)果表明,周圍神經(jīng)損傷后9h時(shí)的早期反應(yīng)階段,涉及轉(zhuǎn)錄因子、炎癥因子、G蛋白受體、鈣調(diào)節(jié)、凋亡;損傷后1d時(shí)再生啟動(dòng)階段,涉及轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞分化與生長、黏附分子、軸突延伸、生長因子等通路被激活;這些神經(jīng)損傷后細(xì)胞生物學(xué)過程的分子調(diào)控模式的研究,為闡明周圍神經(jīng)損傷后再生的分子調(diào)控機(jī)制提供了新的內(nèi)容。第二部分Vav1對神經(jīng)再生的影響及其基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析目的尋找調(diào)控DRG神經(jīng)元突起生長的重要調(diào)控基因,揭示Vav1對神經(jīng)再生的影響,并探討其作用機(jī)制。方法1.結(jié)合測序驗(yàn)證情況和生物信息學(xué)分析選取部分基因在體外培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中進(jìn)行功能學(xué)研究;2.對測序結(jié)果進(jìn)行q RT-PCR驗(yàn)證;3.Western blot檢測損傷后DRG中Vav1的表達(dá)情況;4.免疫組化檢測損傷后的DRG神經(jīng)元中Vav1的表達(dá)情況;5.通過測量神經(jīng)元突起長度分析在神經(jīng)元中si RNA干擾Vav1對背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元突起生長的影響;6.IPA分析Vav1相關(guān)基因調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果1.q RT-PCR證實(shí)Vav1的表達(dá)變化和測序結(jié)果一致;2.Western blot結(jié)果顯示損傷后DRG中Vav1的表達(dá)持續(xù)上調(diào);3.免疫組化結(jié)果顯示Vav1主要在損傷后的DRG神經(jīng)元中表達(dá);4.突起生長實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)si RNA干擾Vav1的表達(dá)能抑制背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元突起的生長;5.IPA分析發(fā)現(xiàn)Vav1相關(guān)基因調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)中眾多分子參與了神經(jīng)再生過程。結(jié)論1.Vav1基因在周圍神經(jīng)損傷后的表達(dá)逐步增強(qiáng),4d時(shí)最為顯著;2.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法顯示,Vav1基因蛋白在DRG神經(jīng)元中表達(dá),其神經(jīng)損傷后的表達(dá)逐步增加;3.體外si RNA干擾實(shí)驗(yàn),顯示si RNA干擾Vav1基因可明顯抑制DRG神經(jīng)元突起生長;4.神經(jīng)損傷后,Vav1基因的表達(dá)調(diào)控在不同時(shí)期,分別與SLA、IL6、Jun、SH2B2、EZH2等重要基因相互作用。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果,Vav1基因很可能是神經(jīng)損傷與再生過程中分子調(diào)控密切相關(guān)的重要功能基因。
[Abstract]:The expression profiles of mRNA in L4 - L6 DRG of rat sciatic nerve were analyzed by means of RNA - Seq . 1 . The effect of Vav1 on nerve regeneration and the expression of Vav1 in DRG neurons were investigated .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R745

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Anjie Lu;Zufa Huang;Chaoyue Zhang;Xianfang Zhang;Jiuhong Zhao;Haiying Zhang;Quanpeng Zhang;Song Wu;Xinan Yi;;Differential expression of microRNAs in dorsal root ganglia after sciatic nerve injury[J];Neural Regeneration Research;2014年10期

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本文編號：1547388